全 文 ：第 32 卷 第 5 期
2 0 1 4 年 5 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 32 No． 5
May 2 0 1 4
中
药
研
究
扫
描
中
华
中
医
药
1186
学
刊
DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2014． 05． 076
高效液相色谱法测定复方黑参颗粒中射干苷的含量
贺康洪1，2，张广春2，林阳2
(1．沈阳药科大学药学院，辽宁 沈阳 110016，2．沈阳军区联勤部药品仪器检验所，辽宁 沈阳 110026)
摘 要:目的:建立 HPLC法测定复方黑参颗粒中射干苷的含量。方法:色谱柱:DiamonsilTM C18色谱柱(250
mm ×4． 6 mm，5 μm) ;流动相:乙腈 － 0． 05%磷酸，梯度洗脱;流速:1． 0 mL /min，检测波长:266 nm;柱温:30℃。
结果:射干苷在 21． 12 ～ 105． 6 μg /mL范围内线性关系良好(r = 0． 999 8)。平均加样回收率为 98． 3%，ＲSD 为
1． 7%(n = 9)。结论:该方法简便快速，适用于复方黑参颗粒中射干苷的含量测定。
关键词:复方黑参颗粒;射干苷;HPLC;含量测定
中图分类号:Ｒ284 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2014)05-1186-03
Determination of Content of Belamcandin in Compound Heishen Granules by HPLC
HE Kanghong1，2，ZHANG Guangchun2，LIN Yang2
(1． School of Pharmacy，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，Liaoning，China;
2． Institute for Drug and Instrument Control of Shenyang Military Ｒegion，Shenyang 110026，Liaoning，China)
Abstract:Objective:To establish a method for the determination of belamcandin in compound Heishen Granules by
HPLC． Methods:The separation was performed on a DiamonsilTMC18 column (250 mm ×4． 6 mm，5 μm )with a gradient
elution composed of acetonitrile and 0． 05% phosphoricacid． The flow rate was 1． 0 mL /min． The detection wavelength
was 266 nm and the column temperature was 30℃ ． Ｒesult:The calibration curve was linear(r = 0． 9998)in the range of
21． 12 － 105． 6 μg /mL for belamcandin． The average recovery of belamcandin in compound Heishen Granules was 98．
3% (n = 9)． Conclusion:The method is quick and convenient for the determination of belamcandin in compound He-
ishe Granules．
Key words:Compound Heishen Granules;belamcandin;HPLC;content determination
收稿日期:2013 － 12 － 23
作者简介:贺康洪(1975 －) ，男，辽宁沈阳人，主管药师，研究方向:
药物分析研究。
通讯作者:林阳(1972 －) ，女，辽宁沈阳人，主管药师，研究方向:药
物质量控制方法和药物动力学研究。
复方黑参颗粒是沈阳军区集合众多部队中医专家和药
学专家，结合多年临床实践总结出的治疗上呼吸道疾病的
口服制剂，具有清热解毒、养阴润肺、利咽消肿之功效。特
别是针对驻地气候特点，治疗官兵所患呼吸道疾病有特殊
疗效。由玄参、射干、北豆根、麦冬、天冬 5 味中药组成。以
玄参射干相伍共为君药，北豆根为臣药，麦冬和天冬为佐
药。射干含有丰富的黄酮类化合物，已报道的有 33 种化合
物［1］。有清热解毒，消痰、利咽［2］、止咳、祛痰［3］，抗炎、抗
菌、抗病毒［4］等多种作用。射干苷为主要止咳、平喘的主
要活性成分［5］，而且含量最高。玄参的主要定量指标是哈
巴苷和哈巴俄苷［3］，但哈巴苷的紫外吸收较弱，在梯度洗
脱条件下易受基线飘移的影响［6］，哈巴俄苷不稳定，在炮
制过程中易向肉桂酸转化［7］，因此本文采用 HPLC 法测定
复方黑参颗粒中射干苷的含量，操作简便，测定结果准确、
可靠，可用于复方黑参颗粒的质量控制。
1 仪器和试药
Angilent1100 高效液相色谱仪，Chemistation system 工
作站(美国 Angilent 公司) ，KQ － 100 型超声波清洗器(昆
山市超声仪器有限公司) ，L － 200SM 电子分析天平(日本
Shimadzu公司) ;射干苷对照品(批号 111632 － 200501)购
自中国药品生物制品检定所;复方黑参颗粒(批号
20120220， 20120226， 20120228， 20120531， 20120819，
20120919，20121112，20121122)购自沈阳军区某医院;甲
醇、乙腈(色谱纯，美国 Fisher Scientific 公司) ，磷酸(分析
纯，天津科密欧化学试剂有限公司) ，水为娃哈哈纯净水;
玄参、射干、北豆根、天冬、麦冬 5 味中药材购自沈阳中街同
仁堂药店。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱:DiamonsilTM C18(250 mm × 4． 6
mm，5 μm) ;流动相:A 为乙腈，B 为体积分数为 0． 05% H3
PO4水溶液;梯度洗脱;流速:1． 0 mL /min;检测波长:266
nm;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。梯度洗脱程序见表 1。
2． 2 溶液的制备 (1)对照品溶液:取射干苷对照品适
量，精密称定，加甲醇制成 0． 0660 mg /mL 的溶液，即得。
(2)供试品溶液:称取复方黑参颗粒约 1． 0 g，精密称定，置
50 mL锥形瓶中，加 50%甲醇 －水 25 mL 精密称定，浸泡
第 32 卷 第 5 期
2 0 1 4 年 5 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 32 No． 5
May 2 0 1 4
中
华
中
医
药
1187
学
刊
30 min，称定重量，超声处理 30 min，放冷，用 50%甲醇 －水
补足减失的重量，滤过，取续滤液用 0． 45 μm 微孔滤膜滤
过即得。(3)阴性对照溶液:按处方量 1 /10 分别称取除射
干外的 4 味药材，加入 12 倍量的水浸泡 3 h，回流提取 2 h，
滤过;残渣再加入 10 倍量的水，继续回流提取 1 h，滤过，再
依法煎煮一次。合并煎液，浓缩。用 0． 45 μm 微孔滤膜滤
过，取续滤液即得缺射干的阴性对照溶液。
表 1 梯度洗脱程序
Time(min) A(%) B(%)
0 85． 0 15． 0
5 77． 5 22． 5
18 75． 0 25． 0
20 35． 0 65
23 20 80
30 20 80
2． 3 专属性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴
性对照溶液，按 2． 1 项色谱条件测定，记录色谱图，结果见
图 1。射干苷与相邻其他色谱峰的分离度大于 1． 5，拖尾因
子符合要求，按射干苷计算，理论塔板数大于 8000。阴性
样品在与射干苷对照品相同保留时间处没有色谱峰。
A:对照品;B:供试品;C:阴性对照品;1:射干苷
图 1 复方黑参颗粒中射干苷典型色谱图
2． 4 线性关系考察 精密吸取射干苷对照品溶液 2、4、6、
8、10 mL 置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得到
系列浓度的对照品溶液，分别精密吸取对照品溶液各 10
μL，按 2． 1 项下色谱条件测定色谱峰面积。以射干苷浓度
(X )为横坐标，色谱峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归，
得回归方程:Y = 49X + 52． 21，r = 0． 9998。结果表明:射
干苷在 21． 12 ～ 105． 6 μg /mL范围内线性关系良好。
2． 5 精密度试验 精密吸取射干苷对照品溶液(0． 0396
mg /mL) ，10 μL重复进样 6 次，测定射干苷峰面积的 ＲSD
为 0． 3%。结果表明本方法的精密度良好。
2． 6 重复性试验 称取同一批号样品(批号:20121122)6
份，每份约 1． 0 g，精密称定，按 2． 2(2)项制备供试品溶液，
按 2． 1 项下色谱条件测定其峰面积，计算射干苷含量的
ＲSD为 1． 5%。表明本方法的重复性良好。
2． 7 稳定性试验 称取样品(批号:20121122)约 1． 0 g，精
密称定，按 2． 2(2)项制备供试品溶液，按 2． 1 项下色谱条
件，分别于 0、2、4、8、12、24 h进样测定，计算射干苷峰面积
的 ＲSD为 1． 3%，结果表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2． 8 回收率试验 称取已知含量的复方黑参颗粒样品约
0． 5 g，共 9 份，精密称定，分别精密加入一定量的对照品，
按 2． 2(2)项制备低、中、高浓度的样品溶液，按 2． 1 项下色
谱条件测定，计算加样回收率，结果见表 2。
表 2 复方黑颗粒中射干苷的回收率试验结果 (n = 9)
取样量
(g)
样品中量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
0． 5039 0． 5657 0． 1056 0． 6684 97． 2
0． 5059 0． 5680 0． 6689 95． 6
0． 5044 0． 5663 0． 6695 97． 8
0． 5176 0． 5811 0． 2112 0． 7896 98． 8 98． 3
0． 5094 0． 5719 0． 7870 101． 8
0． 5157 0． 5790 0． 7870 98． 4 (1． 7)
0． 5078 0． 5701 0． 4224 0． 9846 98． 1
0． 5044 0． 5663 0． 9831 98． 7
0． 5077 0． 5700 0． 9845 98． 2
2． 9 样品测定 取复方黑参颗粒样品 8 批，每批平行制备
3 份，按 2． 2(2)项下方法制备供试品溶液，按 2． 1 项下色谱
条件测定，用外标法计算样品中射干苷的含量，结果见表
3。
表 3 复方黑参颗粒中射干苷含量测定结果 (n = 3)
批号 射干苷含量(mg·g － 1)
20120220 1． 05
20120226 1． 05
20120228 1． 03
20120531 1． 07
20120819 1． 12
20120919 1． 07
20121112 1． 58
20121122 1． 54
3 讨 论
3． 1 检测波长的选择 文献报道［5］射干苷在 266 nm波长
处有最大吸收，通过在 200 ～ 400 nm 波长范围内扫描射干
苷对照品溶液和复方黑参颗粒供试品溶液，结果在 266 nm
波长处有最大吸收。
收稿日期:2013 － 12 － 08
作者简介:戴小慧(1971 －) ，女，浙江缙云人，副主任中药师，学士，
研究方向:药学临床研究。
3． 2 供试品制备方法的选择 本实验考察了超声和加热
回流两种提取方法。加热回流提取方法繁琐，提取样品需
离心后才能过滤，制备的供试品溶液与超声提取法制备的
供试品溶液的峰面积几乎无差别;超声提取方法简便快捷，
且提取完全，故采用超声提取方法;考察了甲醇、水和不同
比例的甲醇 － 水溶液的提取效率，结果表明体积分数为
50%甲醇水溶液提取率最高;分别考察超声时间为 15、30、
45 min的供试品溶液的峰面积，结果 30 min 时射干苷提取
完全，提取率达到最高，因此采用 50%的甲醇溶液超声 30
min作为提取条件。
3． 3 流动相的选择 本实验考察乙腈 －磷酸水、甲醇 －
磷酸水、甲醇 －冰醋酸水和乙腈 －甲酸水系统，最终确定乙
腈 － 0． 05%磷酸水系统，峰型较好，改善拖尾现象，在保证
分离度的情况下使保留时间提前。
3． 4 洗脱梯度的选择 有文献报道测定射干药材中射干苷
含量采用等度洗脱方法，本实验考察了等度洗脱方法，但峰
型较差，并且分离度达不到要求，这可能与制剂中成分较复
杂有关，因此采用了梯度洗脱程序，达到了较好的分离效果。
参考文献
［1］ 齐建红，李宏卫．射干的化学成分、药理作用及临床应用［J］．
国外医药·植物药分册，2006，21(3) :111 － 114．
［2］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典:1 部［S］．北京:中国
医药科技出版社，2010:207，108．
［3］ 李国信，齐越，秦文艳，等．射干提取物止咳祛痰药理实验研
究［J］．实用中医内科杂志，2008，22(2) :3 － 4．
［4］ 张明发，沈雅琴． 射干药理研究进展［J］． 中国执业药师，
2007，17(1) :14 － 18．
［5］ 杨明，庞贺，李囯信，等． HPLC 法测定射干中射干苷的含量
［J］．中华中医药学刊，2008，26(4) :782 － 783．
［6］ 杨宪，杨水平，张雪，等． HPLC － UV － ELSD 同时测定玄参中
5 种成分的含量［J］．中国中药杂志，2009，34(1) :68 － 71．
［7］ 龚友兰，向大雄，邓长凤． HPLC － UV双波长同时测定玄参中
5 种成分的含量［J］．中南药学，2008，6(6) :660 － 663．
第 32 卷 第 5 期
2 0 1 4 年 5 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 32 No． 5
May 2 0 1 4
中
华
中
医
药
1188
学
刊
DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2014． 05． 077
更新制备盐酸小檗碱纳米脂质体粒径
及对 Hela细胞毒性作用研究
戴小慧
(杭州师范大学附属医院，浙江 杭州 310015)
摘 要:目的:对盐酸小檗碱的理化毒性进行研究并优化盐酸小檗碱脂质体的制备条件，提高盐酸小檗碱脂
质体的生物利用度。方法:盐酸小檗碱纳米脂质体采用主动载药法优化制备，对该脂质体的粒径、包封率、形貌等
进行考察，并采用 MTT法对该脂质体的生物安全性进行检测。结果:盐酸小檗碱脂质体的包封率随卵磷脂 /胆固
醇质量比比的增加呈逐渐下降趋势，其粒径在卵磷脂 /胆固醇质量比为 3 ∶ 1 时，得到较高的包封率;其粒径随盐
酸小檗碱含量的增加而增大，当盐酸小檗碱含量等于 0． 8mg /mL 时，纳米盐酸小檗碱脂质体的包封率为最大;在
较低浓度条件下(≤20μg /mL) ，小糪碱纳米脂质体样品作用 48h 后的细胞存活率仍然都保持在 80%以上，与同
一浓度纯品小糪碱样品相比，小糪碱纳米脂质体样品作用细胞后，细胞存活率提高明显。结论:优化盐酸小檗碱
脂质体的制备条件，能够显著提高生物利用度，可以使粒径更小，小糪碱纳米脂质体比小糪碱纯品对 Hela细胞的
毒性作用更小，药物安全性高。
关键词:主动载药法;盐酸小檗碱;纳米脂质体
中图分类号:Ｒ284 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2014)05-1188-03
Optimizing Preparation of Berberine Hydrochloride Liposomes Particle Diameter
and Its Cytotoxicity Studies in Vitro
DAI Xiaohui
(The Affiliated Hospital of Hangzhou Normal University，Hangzhou 310015，Zhejiang，China)
Abstract:Objective:To investigate the preparation conditions in vitro of cytotoxicity and optimization of berberine
hydrochloride liposomes in order to improve the berberine hydrochloride solution bioavailability． Methods:Berberine
hydrochloride liposomes were prepared by active loading method． The particle size of the liposomes，entrapment efficiency
and morphology were investigated and the MTT method was used to detect the biological safety of the liposome． Ｒesults: