全 文 ：表 1　紫花野芝麻挥发油化学成分分析结果
峰号 保留时间t/min 化合物名称 分子式 分子量 相对含量(%)
25 52.46 正二十九烷 Nonacosane C29H60 408 9.08
26 54.94 正三十烷 Tricontane C30H62 422 1.72
27 55.37 3, 5, 22 -三烯 -豆甾烷 Stig-mastan-3, 5, 22-trien C29N48 396 3.82
28 57.06 正三十一烷 Hentriacontane C31H64 436 9.04
29 58.06 正三十六烷 Hexatriacontane C36H74 506 4.72
参考文献:
[ 1] 　中国科学院植物志编辑委员会.中国植物志 ,第六十五卷第二分册
[ M] .北京:科学出版社 1977:486, 489.
[ 2 ] 　乌鲁木齐国土资源编委会.乌鲁木齐国土资源 [ M].乌鲁木齐:新
疆人民出版社 , 1993:197.
[ 3 ] 　江苏新医学院.中药大辞典(下册)[ M] .上海:上海人民出版社 ,
1977:2133.
[ 4 ] 　高海翔 ,鲁润华 ,汪汉卿 ,等.透骨草挥发油成分分析 [ M] .中草药 ,
2000, 31(8):574.
[ 5 ] 　丛蒲珠.质谱在天然有机化学中的应用 [ M].北京:科学出版社 ,
1987.
收稿日期:2009-08-17;　修订日期:2009-12-30
作者简介:沈钦海(1966-),男(汉族),山东曹县人 ,现任山东医学高等专
科学校临床教研室副教授 ,博士学位 ,主要从事肝病的发病机制及治疗研
究工作.
木芙蓉叶提取物对大鼠慢性肝损伤的实验性研究
沈钦海 ,秦召敏 ,孙志军
(山东医学高等专科学校 ,山东 济南　250002)
摘要:目的 观察木芙蓉叶提取物(CHE)对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化的预防作用。方法 实验大鼠随机被分为
3组 ,即正常对照组 、模型组 、CHE预防组。 CHE预防组除腹腔注射 40%CCl4外 , 还给予 CHE灌胃 , 1次 /d, 至第 8周 , 所
有大鼠均被处死。收集大鼠血液 , 检测转氨酶及肝纤维化指标;取不同部位肝组织除检测脂质过氧化外 , 还进行病理检
测。结果 与模型组相比 , CHE预防组大鼠血清 ALT, AST, HA, LN, PCⅢ , Ⅳ -C, MDA含量均降低 , SOD, GSH-Px, ALB
水平升高;病理学检测肝纤维化程度减轻。结论 CHE对 CCl4诱导的大鼠肝损伤具有保护作用 , 而且对其产生的肝纤维
化有抑制和减轻作用。
关键词:木芙蓉叶提取物;　肝纤维化;　大鼠
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)05-1273-02
　　木芙蓉属槿葵科木属植物 ,其花 、叶和根均可入药 ,味微辛 ,
无毒 , 具有清热解毒 、消肿排毒 、凉血止血之功效 ,在民间被广泛
用于治疗痈肿疮疖。文献记载该药外用和口服有很好的抗炎 、消
肿作用 , 可以治疗阑尾炎 、腮腺炎 , 也可以治疗关节炎 、丹毒等。
符诗聪等 [ 1]研究发现木芙蓉叶有效成分具有明显的抗炎作用。
罗仕华等 [ 2]研究发现木芙蓉叶有效成分对肾缺血再灌注损伤有
保护作用。近年来 , 研究发现木芙蓉叶中主要成分含有芸香苷
(芦丁)等黄酮类化合物 [ 3 , 4] 。黄酮类化合物多有较强的抗自由
基作用 , 对机体氧化损伤有很好的保护作用。本实验通过四氯化
碳诱导大鼠肝纤维化模型 ,探讨 CHE预防肝纤维化的作用。
1　材料
1.1　药品和试剂 木芙蓉叶(重庆市三峡库区)采用 70%乙醇回
流法进行提取 , 其主要成分为总黄酮 , 提取过程参照姚莉韵等 [ 5]
实验方法 , 通过减压浓缩并真空干燥而获得浸膏(每克浸膏相当
于生药 47.8 g),然后用蒸馏水稀释备用。透明质酸(HA)、层粘
连蛋白(LN)、三型前胶原(PCⅢ)、四型胶原(Ⅳ -C)检测试剂盒
(上海海军医学研究所)。过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过
氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)及白蛋白(ALB)检测试剂盒
(南京建成生物工程研究所产品);转氨酶试剂盒(上海荣盛生物
制剂厂);四氯化碳(重庆西南化学试剂有限公司)。
1.2　动物 Wistar实验用雄性大鼠 , 体质量 180 ～ 200 g/只(重庆
医科大学动物实验中心提供)。
2　方法
2.1　分组与给药 将 35只大鼠随机分为 3组:正常对照组(10
只),模型组(15只), 木芙蓉叶提取物预防组(10只),各组间暴
露因素无差异。模型组和干预组给予含 40%CCl4 的石蜡油溶
液 , 腹腔注射 8周 , 1 ml/kg, 2次 /周 , 干预组同时给予木芙蓉叶提
取物(CHE), 剂量为人体的 10倍量灌胃(人木芙蓉叶临床拟用
量为生药 15 g/d,体重按 60 kg计 , 即 0.25 g/kg· d), 1次 /d;正
常对照组只给予生理盐水 1 ml/kg, 腹腔注射 8周 , 其中模型组在
8周中共有 4只死亡。
2.1.1　血生化与脂质过氧化指标的检测 动物麻醉 , 摘眼球取
血 , 分离血清 ,用全自动生化检测仪检测 ALT、AST和 ALB值 , 采
用放免法检测Ⅳ -C、HA、LN、PCⅢ型胶原 , 按试剂盒说明进行操
作。取肝左叶同一部位 ,比色分析检测肝组织 SOD、MDA和 GSH
-Px的活性。
2.1.2　肝组织病理学检测 取肝右叶同一部位 , 10%甲醛固定 ,
石蜡包埋 ,连续切片 , 行 HE染色 ,光镜下观察肝组织炎症及纤维
组织增生状况。根据肝组织病理变化 ,将纤维化分为 0 ～ 4级 [ 6]:
0级:无肝纤维化;1级:纤维结缔组织仅局限于汇管区或汇管区
扩大 , 有向肝小叶发展的倾向;2级:纤维结缔组织增生进入肝小
叶 2/3并有 1级同样的改变;3级:纤维结缔组织进入肝小叶中
央周围;4级:纤维结缔组织在全小叶多处弥漫性增生 , 假小叶形
成 , 并有 3级同样的改变。
2.2　统计学分析 实验结果经统计学处理 , 计量资料用 x±s表
示 , 采用 SAS6.12软件对两组间均数比较采用 t检验 , 纤维化程
度以等级资料表示 ,并用 Ridit检验进行分析处理。
3　结果
3.1　CHE对肝功能的影响 由表 1显示模型组与正常对照组比
较差别有显著意义(P<0.01), 说明造模成功;预防组丙氨酸氨
基转移酶(ALT)、天门冬氨酸转移酶(AST)水平显著低于模型组
(P<0.01), 白蛋白(ALB)明显高于模型组(P<0.05),结果表明
CHE预防组有保护肝细胞的作用。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.5 时珍国医国药 2010年第 21卷第 5期
表 1　CHE对肝纤维化大鼠血清肝功能的影响( x±s)
组别 n ALT/u· L-1 AST/u· L-1 ALB/g· L-1
正常对照 10 48.6±7.9 114.3±17.6 40.9 ±2.7
模型 11 282.5±10.2△△ 471.9±26.5△△ 25.6 ±2.1△△
预防 10 119.7±6.3△ 258.1±15.6△ 32.3±1.9□
　　与正常对照组比较 , △△P<0.01;与模型组比较 , △P<0.01;与模型组比较 ,
□P<0.05
3.2　CHE对肝组织脂质过氧化指标活性的作用 由表 2可见正
常对照组与模型组比较 ,模型组过氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘
肽过氧化物酶(GSH-Px)活性降低 , 丙二醛(MDA)含量升高 ,
两组差异均有显著意义(P<0.01);预防组与模型组比较 , SOD
与 GSH-Px活性显著升高(P<0.01), MDA活性降低 (P<
0.01)。
表 2　CHE对大鼠肝脏脂质过氧化指标的作用( x±s)
组别 n MDA/μmol· g-1 SOD/U· g-1 GSH-Px/U· g-1
正常对照 10 1.315±0.31 35.2±3.5 62.5±7.8
模型 11 3.42±1.64＊＊ 17.7±1.8 ＊＊ 44.9±8.1＊＊
预防 10 2.08±0.56＊ 26.7±1.8＊ 54.2±2.5＊
　　与模型组比较 , ＊P<0.01;与正常组比较 , ＊＊P<0.01
3.3　肝组织病理变化 肝组织苏木精 -伊红染色结果显示(见
表 3), 正常对照组未见肝细胞变性 、坏死 , 而模型组大鼠肝脏可
见肝索排列紊乱 , 肝细胞弥漫性水样变性和脂肪变性 ,门管区及
肝小叶内可见明显的灶性淋巴细胞浸润 , 纤维组织增生明显 ,肝
小叶结构破坏 , 且增生的纤维将肝小叶分隔成大小不等的肝细胞
团 , 纤维化增生程度多为 3、 4级;CHE预防组大鼠肝细胞变性 、
坏死明显减轻 , 结缔组织轻度增生 , 多为 1、 2级 , 未见假小叶形
成 , 统计学分析 , CHE干预组较模型组纤维化程度减轻(P<
0.05)。
表 3　各组大鼠肝组织纤维化程度( x±s)
组别 n 肝纤维化的分级
0级 1级 2级 3级 4级
正常对照组 10 10 0 0 0 0
模型＊＊ 11 0 0 1 4 6
预防＊ 10 0 4 3 2 1
　　与正常对照组比较 , ＊＊P<0.01;与模型组比较 , ＊P<0.05
3.4　CHE对血清肝纤维化指标的影响 由表 4结果显示模型组
肝纤维化指标 HA、LN、PCⅢ和 CⅣ含量显著增加 , 与正常对照
组比较差异均有显著性意义(P<0.01);CHE预防组可显著降低
血清中纤维化指标 , LN、PCⅢ及 HA与模型组相比显著降低(P
<0.01), 而Ⅳ -C型胶原的水平也明显下降(P<0.05)。
表 4　CHE对大鼠慢性肝损伤血清肝纤维化指标的影响( x±s)
μg· L-1
组别 HA LN PCⅢ Ⅳ -C
正常对照 37.16±11.45 40.26±17.08 19.76±3.87 22.85±7.43
模型 168.23±19.67△△ 67.33±25.41△△ 43.32±12.10△△38.67±9.12△△
预防 46.23±22.74△ 48.32±12.46△ 24.71±9.50△ 31.06±8.25□
　　与模型组比较 , △P<0.01, □P<0.05;与正常对照组比较 , △△P<0.01
4　讨论
肝纤维化是肝脏发展至肝硬化的必经阶段 , 而肝星状细胞
(HSC)活化是肝纤维化发生的核心环节 , 氧化应激及脂质过氧化
是引起肝细胞损伤与肝星状细胞活化的重要机制 [ 7 ～ 9] , 活化的
HSC是合成胶原等细胞外基质(ECM)的主要肝纤维化细胞 [ 10] , 抑
制肝星状细胞的激活是防治肝纤维化的关键步骤。近来研究发现
培养的 HSC可以被自由基激活而被抗氧化剂阻断 [ 11]。大量研究
发现黄酮类化合物具有广泛的生物活性 ,包括抗氧化 、抗衰老 、抗
菌 、抗肿瘤等 [ 12 , 13] ,但最主要的是它的抗氧化活性 ,它通过酚羟基
与自由基反应生成较稳定的半醌式自由基 ,从而终止自由基链式
反应 ,从而抑制氧自由基和脂质过氧化反应 ,这是黄酮类化合物清
除自由基的最主要机制。MDA为脂质过氧化的终末产物 , 其含量
反映了组织中过氧化损伤的程度。 GSH-Px和 SOD是重要的过
氧化物分解酶, 而且GSH-Px能特异性地催化还原型 GSH对过氧
化氢的还原反应, 从而保护细胞膜结构和功能的完整性。抑制
MDA等毒性物质的生成 , 增强自由基反应酶类如 SOD、GSH-Px
等活性 ,减缓氧自由基和脂质过氧化损伤。 CHE中含有芦丁等黄
酮类化合物, 其是否有抗肝纤维化作用? 本实验通过研究发现
CHE预防组明显降低血浆中 HA、LN、PCⅢ、CⅣ及肝组织中 MDA
的含量 ,提高肝组织中 GSP-Px、SOD活性的作用 , 且生化结果显
示 CHE可显著降低 AST、ALT活性、增加 ALB的水平 ,改善肝功
能的作用。病理结果表明 CHE能明显预防四氯化碳所致的肝损
伤 、减轻肝细胞变性、炎细胞浸润和坏死等病变 , 作用机理可能是
通过提高肝细胞抗氧化能力、对抗 CCl4引起的膜脂质过氧化及保
护肝细胞膜结构的完整性而实现的。
参考文献:
[ 1 ] 　符诗聪 ,张凤华 ,史炜镔 ,等.木芙蓉有效成分的抗炎实验研究初步
报告 [ J] .上海第二医科大学学报 , 2001, 21(1):14.
[ 2 ] 　罗仕华 ,符诗聪.木芙蓉叶有效组分对大鼠肾缺血再灌注损伤保护
作用的实验研究 [ J].湖北中医杂志 , 2004, 26(10):3.
[ 3 ] 　薜申如 , 刘金旗.木芙蓉叶化学成分研究 [ J] .基层中药杂志 ,
1991, 5(4):37.
[ 4 ] 　姚莉韵 , 陆　阳 , 陈泽乃.木芙蓉叶化学成分研究 [ J].中草药 ,
2003, 34(3):201.
[ 5 ] 　姚莉韵 ,王国艳 ,王丽平.木芙蓉叶提取工艺的研究 [ J].中成药 ,
2000, 22:827.
[ 6 ] 　HayasakaASaishoH.Serummarkersastoolstomonitorliverfibrosis
[ J] .Digestion, 1998, 59(4):381.
[ 7 ] 　LeeKS, LeeSJ, ParKHJ, ChungJP, HanKH, ChonCY, LeeSI, Moon
YM.Oxidativestressefectontheactivationofhepaticstellatecels
[ J] .YonseiMedJ, 2001, 42(1):1.
[ 8 ] 　kangWZ, XieYM, NieQH, etal.Efectofoxymatrineonexperimen-
talliverfibrosis[J] .ShijieHuarenXiaohua, Zazhi, 2003, 11(2):195.
[ 9 ] 　WangLT, ZhangB, ChenJJ.Efectofanti-fibrosiscompoundoncola-
genexpressionofhepaticcelsinexperimentalliverfibrosisofrats[ J] .
WorldJGastroenterol, 2000, 6(6):877.
[ 10]　HERNANDEZ-MUNOZR, DIAZ-MUNOZM, SUAREZ-CUENCA
JA, etal.AdenosinereversesapreestablishedCCl4 -inducedmicronod-
ularcirrhosisthroughenhancingcolagenolyticacivityandstimulating
hepatocytecelproliferationinrats[ J] .Hepatology, 2001, 34(4PEI):
677.
[ 11]　BruckR, GeninaO, AeedH, etal.Halofuginonetopreventandtreat
thioacetamide-inducedliverfibrosisinrats[ J] .Hepatology, 2002 , 33
(2):379.
[ 12]　GuoQ, ZhaoB, ShenS, etal.ESRstudyonthestructureantioxidant
activityrelationshipofteacatechinsandtheirepimers[ J].Biochim
BiophysActa, 1999, 1427(1):13.
[ 13]　MengDS, WangSL.Antitumorefectofquercetin[ J] .ChinTradit
HerbDrugs, 2001, 32(2):186.
·1274·
时珍国医国药 2010年第 21卷第 5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.5