全 文 ：测定 , 或者再增加抗炎 、降血糖 、镇痛等方面的药效学实验 , 再与
指纹图谱的相关信息进行处理 、分析 ,得出的结果则会更加全面 、
合理 、科学。
3.1　流动相的选择 牡丹皮中所含成分复杂 , 使用单一流动相各
色谱峰很难达到理想的分离效果 ,实验中我们考察了不同组成 、
不同比例及不同洗脱梯度的流动相的分离效果 ,结果表明现在所
采用的流动相分离效果较好。
3.2　最佳检测窗口的选择 本实验采用的是二极管阵列检测器 ,
采用上述所得最佳流动相条件运行样品 ,可以看到在任意波长下
色谱峰的分离情况 , 通过观察发现在 λ=274 nm处 , 样品中丹皮
酚有最大吸收且各色谱峰分离较好 , 多数峰的灵敏度都比较高 ,
但是峰数较少且芍药苷的峰灵敏度较低;又发现 λ=239 nm处 ,
样品中色谱峰数增多且各色谱峰同样分离较好 ,总峰面积较大 ,
芍药苷峰的灵敏度提高。通过将指纹图谱与药理结果相结合 , 确
定牡丹皮药效指纹图谱的最佳检测窗口为 274 nm, 选择的原则
是与药效成正相关的峰最多 , 而且分离度较好 , 有效峰面积占总
峰面积比例最大。 这样得到的指纹图谱更能代表牡丹皮的有
效性。
参考文献:
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收稿日期:2007-10-11;　修订日期:2007-12-27
基金项目:广西科技厅科研项目(No.桂科技 0235023-1;桂科能 0630006
-5A)
作者简介:邓家刚(1953-),男(汉族),广西合浦人 ,现任广西中医学院教
授 ,博士生导师 ,主要从事中药基础理论与药效筛选的研究工作.
黄根醇提物对四氯化碳所致
大鼠肝纤维化的保护作用
邓家刚 1 , 周程艳2 , 郑作文 1
(1.广西中医学院 ,广西 南宁　530001;　2.华北煤炭医学院 ,河北 唐山　063000)
摘要:目的 研究黄根醇提物对四氯化碳所致大鼠肝纤维化的保护作用。方法 大鼠首次于背部皮下注射纯 CCl4 5 ml/kg,以后每周 2次注射 40%(V/V)CCl4花生油 3 ml/kg,连续注射 8周。 8周后取血 , 计算大鼠的肝脾指数 , 检测大鼠血清
中 ALT, AST的活性及其总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)的含量 , 计算白蛋白与球蛋白的比值;检测血清中透明质酸(HA)、层
黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ )、Ⅳ型胶原(CⅣ)的含量;检测肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性 、羟脯氨酸
(Hyp)含量 、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。结果 黄根醇提物能明显降低 CCl4所致的大鼠肝
纤维化肝脾指数的升高(P<0.01)和血清中 ALT, AST活性的升高(P<0.01), 降低血清中 HA, LN, PCⅢ , CIV, GLB的含
量(P<0.01), 升高血清中的 TP, ALB含量和 A/G的比值(P<0.01);降低肝组织中 MDA的水平和 Hyp的含量(P<
0.01), 亦能升高肝组织中 SOD的活性和 GSH-Px的水平(P<0.01)。结论 黄根醇提物具有显著的抗肝纤维化的作用。
关键词:黄根;　四氯化碳;　肝纤维化
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)06-1339-03
ProtectiveEffectsoftheAlcoholExtractfromPrismatomeristetrandraagainstLiverFi-
brosisinMice
DENGJia-gang1 ,ZHOUCheng-yan2 ,ZHENGZuo-wen1
(1.GuangxiTraditionalChineseMedicalUniversity, Nanning530001, China;2.NorthChinaCoalMedical
Colege, Tangshan063000, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheprotectiveeffectsofthealcoholextractfromPrismatomeristetrandraagainstliverfibrosisinmiceinducedbycarbontetrachlotide(CCl
4
).MethodsMousemodelwithliverfibrosiswasinducedbythemultiplesubcutane-
ousinjectionsof40% CCl4 , 3 ml/kg, twiceaweekfor8weeks.Theindexesoftheliverandspleeninmicewerecalculated.ALTandASTactivitiesandcontentsofTP, Albinserumwereexamined, meanwhiletheratiooftheALBandGLBwerecalculated.The
fourindexesofliver-fibrosis(HA, LN, PCⅢ , CⅣ)weredeterminedinlivertissue.SODactivitiesandMDA, GSHlevelsinliv-
ertissueweredetermined.ResultsThealcoholextractfromPrismatomeristetrandracouldobviouslyinhibittheincreaseofliver
andspleenindexes(P<0.01)inliverfibrosismice, andtheincreaseofALTandASTinserum(P< 0.01), elevatethecon-
tentsofTP, ALB, A/Ginserum(P<0.01), suppressthecontentofHA, LN, PCⅢ , CIV, GLBinlivertissue(P<0.01), de-
creasetheMDAlevelsinlivertissue(P<0.01), andimproveSODactivityandGSHlevelinlivertissue(P<0.01)Conclusion
ThealcoholextractfromPrismatomeristetrandrahasremarkableprotectiveeffectsonliverfibrosisinmice.
Keywords:AlcoholextractfromPrismatomeristetrandra;　Carbontetrachlotide;　Liverfibrosis
　　肝纤维化是慢性肝病重要的病理特征 ,也是进一步向肝硬化
发展的主要中间环节 [ 1] 。目前研究认为肝纤维化是一个动态过
程 , 尚属于可逆性病变 , 其转归与肝损伤因素是否持续存在有关 ,
如果得到及时彻底治疗 ,肝损伤停止发展 , 则肝纤维化多可逆转;
病情如不断发展则可能导致肝硬化甚至肝癌 [ 2] 。因此 , 肝纤维
化的防治在临床上具有十分重要的意义。黄根 Prismatomeristet-
randra,为壮医用药 , 具有软坚散结 、利湿退黄等功效 [ 3] , 广西民
间多用其治疗慢性肝炎 [ 4]。本研究采用四氯化碳(CCl
4
)所致慢
性大鼠肝纤维化模型 ,探讨黄根醇提物对肝纤维化的影响。本文
实验尚属首次。
·1339·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.6 时珍国医国药 2008年第 19卷第 6期
1　器材
1.1　药品 谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)
试剂盒(批号 20060620),超氧化物歧化酶(SOD)测
试盒(批号 20060610),丙二醛(MDA)测试盒(批号
20060615), 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)测试盒和考
马斯亮兰蛋白测定试剂盒(批号 20060620),以上试
剂盒均为南京建成生物工程研究所产品。秋水仙
碱 , 为昆明制药药品销售有限公司产品 , 批号
20060418。四氯化碳(CCl4 , 分析纯), 为重庆川江化
学试剂厂产品 , 批号 20050426, 实验时用花生油配
成 0.08%四氯化碳溶液。黄根 , 由广西药材站购
进 , 经广西中医学院药用植物教研室韦松基副教授
鉴定为茜草科植物三角瓣花 Prismatomeristetrandra
(Rox-b.)K.Schum.的根。
1.2　动物 清洁级 Wistar大鼠 , 雌雄各半 , 体重 160
～ 200g。由广西医科大学实验动物中心提供 ,合格
证号:SCXK桂 2003 ～ 0003。
1.3　黄根醇提物的制备 将黄根粉碎成粗粉 ,用乙
醇加热回流提取两次 , 合并提取液 , 滤过 , 浓缩至无
醇味 , 加水稀释致所需浓度 ,于 4℃冰箱保存备用。
1.4　仪器 Biofugestrutos型高速低温离心机(Ken-
droLaboratoryproducts)。 JY92 -2D型超声波细胞
粉碎机(宁波新芝科器研究所)。 YKH-I型液体快
速混合器(江西医疗器械厂)。 Agilent8453紫外分
光光度计。 ZFQ-85A型旋转蒸发仪(上海安亭电
子仪器厂)。
2　方法 [ 5]
2.1　造模 采用 CCl4造成大鼠肝纤维化模型 , 除正
常组外 , 其余各组每只大鼠首次于背部皮下注射纯
CCI4 5ml/kg, 以后皮下注射 40%(V/V)CCl4花生
油 3 ml/kg,每周注射 2次 , 共 8周 。
2.2　分组与给药 将大鼠随机分为 6组 , 每组各 16
只 , 即正常组 ,模型组 , 阳性组 ,黄根醇提物高 、中 、低
剂量组。造模与给药同时进行。各组每天灌胃(ig)
给药 , 给药容量为 20 ml· (kg-1· d-1),连续 8周。
正常组和模型组给予蒸馏水 , 阳性组给予秋水仙碱
0.2 mg/kg,高 、中 、低剂量组分别灌胃黄根醇提物
12, 6, 3 g生药 /kg。股动脉取血 ,常规分离血清 , 大
鼠处死前禁食不禁水 24h。
2.3　检测指标 检测血清中的谷丙转氨酶(ALT)、
血清谷草转氨酶(AST)的活性及其总蛋白(TP)、白
蛋白(ALB)的含量 , 计算白蛋白与球蛋白的比值
(A/G);并检测血清中的肝纤维化四项指标 , 即检测
Ⅲ型前胶原(ProcollagenⅢ , PCⅢ)、IV型胶原(Cola-
genTypeIV, CIV)、透明质酸(Hyaluronicacid, HA)和
层粘连蛋白(Laminin, LN)的含量。取肝脏 、脾脏称
量 , 计算肝指数 、脾指数;并用肉眼观察大鼠肝脏的
外形 、体积 、颜色 、质地的改变 ,一部分肝脏用生理盐
水制成 10%的肝匀浆 ,用于检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性 、羟
脯氨酸(Hyp)的含量 、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)的水平。
2.4　数据处理 各组实验数据均以 x±s表示 , 采用统计软件 SPSS13.0进行
组间 t检验 , P<0.05有统计学意义。
3　结果
3.1　黄根醇提物对大鼠肝脏 、脾脏系数的影响 见表 1。与正常组比较 ,模型
组大鼠肝脾重量明显增加 , 肝脾指数明显升高(P<0.05)。与模型组比较 , 黄
根醇提物各剂量组大鼠肝脾指数显著降低(P<0.01),并能明显降低肝脾的
重量(P<0.01)。结果提示 ,黄根醇提物能明显对抗 CCl4导致的肝纤维化大
鼠肝脾指数的升高。
表 1　黄根醇提物对 CCl4 致肝纤维化大鼠的肝脾重量及肝脾指数的影响( x±s)
组 别 n 肝脏重量 m/g 肝指数 / ×10-2
脾脏
重量m/g 脾指数 / ×10-2
正常 16 6.05±1.26 2.52±0.43 0.55±0.09△△ 0.23±0.04
模型 10 8.50±1.62＊＊ 4.14±0.093＊＊ 1.52±0.46＊＊ 0.73±0.2＊＊
阳性 13 5.42±1.12△△ 2.74±0.64△△ 0.64±0.12△△ 0.33±0.07△△
黄根醇提物(高) 11 6.70±0.95△△ 2.79±0.32△△ 0.96±0.078△△ 0.40±0.03△△
黄根醇提物(中) 11 5.39±1.07△△ 2.68±0.56△△ 0.82±0.12△△ 0.41±0.05△△
黄根醇提物(低) 14 6.27±1.34△△ 2.89±0.50△△ 0.86±0.1△△ 90.40±0.09△△
　　与正常对照组比较 , ＊＊P<0.01;与模型对照组比较 , △△P<0.01
3.2　黄根醇提物对大鼠血清中 ALT, AST的影响 见表 2。常规分离血清 , 按
照说明书的要求测试 ALT(谷丙转氨酶), AST(谷草转氨酶)的活性。与正常
组比较 ,模型组大鼠血清中 ALT, AST活性显著升高(P<0.01), 提示造模成
功。与模型组比较 ,黄根醇提物各剂量组大鼠血清中 ALT, AST的活性显著降
低(P<0.01)。与高剂量组比较 ,中剂量组大鼠血清中 ALT的活性有显著性
差异(P<0.05)。结果提示 ,黄根醇提物能显著对抗 CCl4导致的肝纤维大鼠
血清中 ALT, AST的活性升高。
表 2　黄根醇提物对CCl4 致肝纤维化大鼠血清中 ALT, AST活性的影响
组 别 n 剂量C/mg· kg-1
ALT
C/U· L-1
AST
C/ U· L-1
正常 16 - 64.73±9.29 104.1±5.2
模型 10 - 186.23±25.44＊＊ 170.54±7.99＊＊
阳性 13 0.2 131.44±27.71△△ 128.04±10.36△△
黄根醇提物(高) 11 12 000 137.95±27.92△△ 137.08±13.34△△
黄根醇提物(中) 11 6 000 115.68±10.51△△○ 131.16±12.93△△
黄根醇提物(低) 14 3 000 133.50±21.11△△ 131.43±5.84△△
　　与正常对照组比较 , ＊＊P<0.01;与模型对照组比较 , △△P<0.01;与高剂量组比
较 , ○P<0.05
3.3　黄根醇提物对大鼠血清中 TP, ALB, GLB, A/G的影响 见表 3。常规分
离血清 ,按照说明书的要求测试大鼠血清中的 TP(血清总蛋白)、ALB(血清白
蛋白)的含量 , 并计算出 GLB(血清球蛋白)的含量和 A/G(白蛋白 /球蛋白比
值)的比值。与正常对照组比较 , 模型组血清 TP, ALB的含量和 A/G的比值
远远低于正常对照组(P<0.01), 模型组大鼠血清中 ALB含量降低的同时
GLB含量相应增加 , 提示造模成功。与模型组比较 , 黄根醇提物各剂量组大
鼠血清中 TP, ALB的含量和 A/G的比值明显升高(P<0.01), 而 GLB的含量
明显降低(P<0.01)。结果提示 ,黄根醇提物能显著对抗 CCl
4
导致的肝纤维
化大鼠血清中 TP的含量和 A/G比值的降低 , 亦能对抗血清中 ALB和 GLB含
量的逆转。
表 3　黄根醇提物对 CCl4 致肝纤维化大鼠血清 TP, ALB, GLB及 A/G的影响( x±s)
组别 n 剂量 C/mg· kg-1
TP
C/g· L-1
ALB
C/g· L-1
GLB
C/g· kg-1 A/G
正常 16 - 82.25±4.18 45.43±4.19 　30.69±2.75 1.49±0.20
模型 10 - 59.76±4.49＊＊ 23.13±2.57＊＊ 　38.04±2.31＊＊ 0.61±0.071＊＊
阳性 13 0.2 71.77±3.52△△ 38.39±3.05△△ 　33.38±2.67△△ 1.16±0.15△△
黄根醇提物(高) 11 12 000 67.96±4.83△△ 40.09±3.92△△ 　27.87±4.06△△ 1.47±0.27△△
黄根醇提物(中) 11 6 000 70.68±3.69△△ 40.56±4.22△△ 　30.12±3.88△△ 1.38±0.28△△
黄根醇提物(低) 14 3 000 71.4±4.16△△ 42.4±2.44△△ 　29±3.93△△ 1.49±0.24△△
　　与正常对照组比较 , ＊＊P<0.01;与模型对照组比较 , △△P<0.01
·1340·
时珍国医国药 2008年第 19卷第 6期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.6　
3.4　黄根醇提物对大鼠血清中肝纤维化四项的影响 结果见表
4。常规分离血清 , 按照说明书的要求测试大鼠血清中的的 HA
(透明质酸)、LN(层黏连蛋白)、PCⅢ(Ⅲ型前胶原)、CⅣ(IV型
胶原)的含量。与正常对照组相比 , 模型组大鼠血清中 HA, LN,
PCⅢ , CⅣ的含量均显著升高(P<0.01),提示造模成功。 与模型
组比较 , 黄根醇提物各剂量组大鼠血清中 HA, LN, PCⅢ , CⅣ的
含量明显降低(P<0.01)。与高剂量组比较 , 中剂量组大鼠血清
中 LN的含量有显著性差异(P<0.05), 低剂量组大鼠血清中
HA, PCⅢ的含量有显著性差异(P<0.05)。结果提示:黄根醇提
物能显著对抗 CCl4导致的肝纤维化大鼠血清中 HA, LN, PCⅢ , CⅣ含量的升高 , 因此黄根醇提物能显著抑制 CCl4对肝组织的
影响。
表 4　黄根醇提物对 CCl
4
致肝纤维化大鼠血清 HA, LN, PCⅢ , CⅣ的影响
组别 n 剂量 C/mg· kg-1 HAC/ng· ml-1
LN
C/ng·ml-1
PCⅢ
C/ng· ml-1
CⅣ
C/ng· ml-1
正常 16 - 227.76±43.94 35.47±6.66 6.71±0.33 30.74±3.09
模型 10 - 737.84±40.81＊＊ 63.31±12.18＊＊ 17.06±2.00＊＊ 59.25±7.96＊＊
阳性 13 0.2 336.36±28.47△△ 41.79±4.99△△ 8.86±1.07△△ 36.68±4.16△△
黄根醇提物(高) 11 12 000 440.75±60.38△△ 49.61±4.41△△ 10.80±1.85△△ 43.14±5.44△△
黄根醇提物(中) 11 6 000 435.83±68.07△△ 45.31±4.03△△○ 10.95±1.78△△ 43.23±3.89△△
黄根醇提物(低) 14 3 000 376.07±63.84△△○ 45.63±3.01△△ 9.27±0.72△△○ 40.41±4.32△△
　　与正常对照组比较 , ＊＊P<0.01;与模型对照组比较 , △△P<0.01;与高剂量组比较 , ○P<0.05
3.5　黄根醇提物对大鼠肝组织中 SOD活性 , MDA, GSH-Px水
平的影响 见表 5。常规取出大鼠的肝组织 ,并用生理盐水做成
10%的肝匀浆 , 按照说明书的要求测试 SOD(超氧化物歧化酶)
的活性和 MDA(丙二醛)、GSH-PX(谷胱甘肽过氧化物酶)的水平。与正常组比较 , 模型组大鼠肝组织中 SOD活性 、GSH-Px水
平显著降低(P<0.01), MDA水平显著增加(P<0.01), 提示造
模成功。与模型组比较 , 黄根醇提物各剂量组大鼠肝组织中
MDA的含量显著降低(P<0.01), 而肝组织中的 SOD的活力和
GSH-Px的水平显著增强(P<0.01)。与黄根高剂量组比较 , 黄
根低剂量组大鼠肝组织中的的 MDA的水平有显著性差异(P<
0.05)。结果提示 , 黄根醇提物能显著对抗 CCl
4
导致的肝脏纤维
化大鼠肝组织中 MDA的升高 ,同时能显著对抗肝组织中 SOD的
活力和 GSH-Px水平的降低。
表 5　黄根醇提物对 CCl4致肝纤维化大鼠肝组织中
SOD活性的影响和肝组织中 MDA, GSH-Px水平的影响( x±s)
组别 n 剂量C/mg· kg-1
SOD
C/U· g-1
MDA
C/nmol· g-1
GSH-Px
C/μg· g-1
正常 16 - 147.58±19.68 15.74±3.85 145.63±31.29
模型 10 - 60.69±12.84＊＊ 40.50±8.39＊＊ 85.64±43.82＊＊
阳性 13 0.2 124.50±23.54△△ 8.10±2.14△△ 132.35±17.94△△
黄根醇提物(高)11 12 000 130.66±12.99△△ 28.22±7.69△△ 121.27±15.64△△
黄根醇提物(中)11 6 000 130.63±4.49△△ 22.78±3.18△△ 122.60±8.47△△
黄根醇提物(低)14 3 000 130.86±10.11△△ 20.97±1.44△△○132.04±4.18△△
　　与正常对照组比较 , ＊＊P<0.01;与模型对照组比较 , △△P<0.01;与高剂量组
比较 , ○P<0.05
3.6　黄根醇提物对大鼠肝组织中 Hyp的影响 结果见表 6。常
规取出大鼠的肝组织 ,按照说明书的要求测试肝组织中 Hyp(羟
脯氨酸)的含量。与正常组比较 , 模型组大鼠肝脏 Hyp含量显著
升高(P<0.01),提示造模成功。与模型组比较 , 黄根醇提物各
剂量组大鼠肝组织中 Hyp的含量明显降低(P<0.01)。结果提
示:黄根醇提物能显著对抗 CCl4导致的肝纤维化大鼠肝组织中Hyp含量的升高。
表 6　黄根醇提物对 CCl4致肝纤维化
大鼠肝脏组织 Hyp含量的影响( x±s)
组别 n 剂量 C/mg· kg-1 Hyp/μg· g-1
正常 16 - 220.06±0.02
模型 10 - 535.02±0.07＊＊
秋水仙碱 13 0.2 306.55±0.04△△
黄根醇提物(高) 11 12 000 306.62±0.04△△
黄根醇提物(中) 11 6 000 284.82±0.03△△
黄根醇提物(低) 14 3 00 284.32±0.03△△
　　与正常对照组比较 , ＊＊P<0.01;与模型对照组比较 , △△P<0.01
4　讨论
肝纤维化形成机制极其复杂 , 中药含有多种活性成分 , 可以
发挥综合作用 ,在抗肝纤维化方面体现出独特优势。许多中药诸
如丹参 、桃仁 、虫草菌丝 、汉防己 、姜黄等在临床和实验研究中已
被证实具有较好的抗肝纤维化作用 [ 6] 。本实验采用 CCl4导致肝
纤维化大鼠模型研究黄根醇提物对肝纤维化的影响。结果表明
黄根醇提物可显著抑制血清 ALT, AST的升高 , 使 ALB合成增
加 、A/G值升高 , 表示肝细胞再生和合成功能进一步加强 , 说明黄
根醇提物能明显改善肝功能 , 具有抑制肝细胞 、肝损伤的作用。
血清 HA, LN, PCⅢ和肝组织 Hyp测定结果表明 ,黄根醇提物可以
明显抑制胶原纤维的增生 ,能抑制肝脏胶原纤维合成沉淀 , 具有
抗肝纤维化的作用 [ 7] 。
CCl4诱导大鼠肝纤维化过程中 , 脂质过氧化是其主要的肝
损伤形成机制 [ 8] 。模型组大鼠肝组织脂质过氧化产物 MDA大
量生成 , SOD和 GSH-Px活性受到明显抑制。黄根醇提物能明
显降低肝纤维化大鼠肝组织中的 MDA的水平和 SOD, GSH-Px
的活性 ,说明黄根醇提物能提高肝组织的抗氧化酶(SOD和 GSH
-Px)活性 , 抑制自由基的产生 , 促进其清除 ,并能抑制氧自由基
(OFR)引起的脂质过氧化反应 , 使丙二醛(MDA)生成减少 , 从而
对肝组织起保护作用 , 使大鼠肝纤维化减轻 , 提示抗脂质过氧化
作用可能是其抗肝纤维化的作用机理之一。
迄今为止,国内外对黄根各个方面的研究都很少 ,其仍处于待深
入研究开发的状态,且其现研究重点主要集中在矽肺的治疗上,对其
抗肝纤维化作用的研究很少有人涉及,因此本研究具有创新性,将为
开发抗肝纤维化的新药提供科学依据。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.6 时珍国医国药 2008年第 19卷第 6期