全 文 ：185※工艺技术 食品科学 2006, Vol. 27, No. 07
亚花松萝多糖的提取与分离工艺的优化
刘丽燕，王 丽，文雪梅, 阿不都拉·阿巴斯*
(新疆大学生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046)
摘 要：本文研究亚花松萝多糖的提取与分离工艺的优化。亚花松萝多糖提取工艺各因素的最佳水平为热水体积
200ml(每4g松萝)、70～80℃提取三次，每次2h。其中对亚花松萝多糖含量影响最显著的因素是提取次数，然而
提取温度在一定范围内无显著影响。乙醇沉淀多糖的最佳浓度为80%一倍，Sevage试剂除游离蛋白时的体积比为
3:1，反复脱蛋白五次，每次振荡30min。多糖的最佳得率为6.86%，总糖含量为76%。
关键词：亚花松萝；多糖；分离工艺；优化
Optimal Design of Extraction and Separation Procedure for the Usnea subflor dana Polysaccharide
LIU Li-Yan，WANG Li，WEN Xue-Mei，Abdulla.ABBAS*
(College of Life Science and Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046, China)
Abstact ：This paper studied the optimum preparation procedure for extraction and septeration of the Usnea subfloridana
polysaccharide. The optimum extraction conditions of S bfloridana polysaccharide are: water 200ml, Us a subfloridana 4g,
extracting-temperature 70～80℃, epeated-times 3 and extracting-time 2h. The results showed that the variance of the factor
reapeated-times assumes statistical significance, whereas the extracting-temperature is not statistically significant. A one-factor
test results indicated that the optimum conditions of precipitating polysaccharide with 70% alcohol, and removing proteins with
sevage agent to gain gratifying effictiveness are as follows: volume ratio 2:1, oscillation-time 30min and repeated times 7 with
polysaccharide yield 6.86% and total sugar content 76%.
Key words：Usnea subfloridana；polysaccharide；experiment extration methodology；optimization
中图分类号：O623.59 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2006)07-0185-03
收稿日期：2006-01-30 *通讯作者
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30460001；30160001)；新疆生物资源基因工程重点实验室资助项目(040080)
作者简介：刘丽燕(1978-)，女，硕士研究生，主要从事地衣学研究。
多糖是一种天然高分子化合物，它是由醛糖或酮糖
通过苷键连接在一起的多聚物。多糖在自然界分布极
广，对动植物的生命极其重要，具有多种生理活性[1,2]。
据国外文献报道，地衣多糖具有很高的抗癌活性，而这
种多糖的抗癌活性是通过提高健康细胞的免疫能力，抑
制癌细胞的病态增殖，从而克服了一些抗癌药物对健康
细胞的损伤副作用，即所谓的“中间宿主免疫性”。因
此，对各种地衣多糖的研究就成为一种趋势[3]。松萝是
子囊地衣纲、茶渍目、松萝科、松萝属的植物。全体
灰绿色。主要生长于山地森林中。松萝资源含量巨大，
目前国内没有对松萝多糖进行系统报道与研究的文献。
本文对松萝多糖的提取工艺进行了系统研究，以确
定松萝多糖提取、沉淀、脱脂、脱蛋白的最佳工艺。
为松萝多糖的分离制备和开发利用提供参考。同时也为
其它地衣多糖的提取提供依据。
1 材料与方法
1.1材料
亚花松萝于2004年5月采自新疆喀纳斯国家级自然
保护区，由阿不都拉·阿巴斯教授鉴定。
1.2实验试剂 均为国产分析纯。
1.3仪器
恒温干燥箱；索氏提取器；电热套；旋转蒸发
器；真空泵；低速离心机；752可见紫外分光光度计；
电子天平。
1.4方法
松萝多糖的提取、分离工艺流程：松萝用清水浸
泡1min(去除杂质与表面灰尘)→烘干→氯仿索提→松萝残
渣热水浸提→水提液离心，减压浓缩→乙醇沉淀多糖→
无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤→Sevage法脱蛋白。
1.4.1提取工艺的优化[4]
松萝多糖属酸性多糖，易溶于热水，影响热水浸
提的主要因素有：热水体积、温度、时间及提取次数。
2006, Vol. 27, No. 07 食品科学 ※工艺技术186
将松萝用清水浸泡1min，恒温干燥箱内40℃烘干，氯
仿索提两次(每次3h)。索提后的松萝残渣平均分成九
份，每份4g，按正交试验L9(34)提取松萝多糖。将浸
提液离心，去除杂质，减压浓缩至40ml。加入80%乙
醇使之沉淀，静置过夜，待沉淀析出，离心，将沉
淀物用无水乙醇、丙酮、乙醚分别洗涤三次，干燥得
松萝多糖粗品。
本实验的目的是确定松萝多糖提取的最佳工艺。松
萝多糖提取的水平因素表(表1)。
水平 热水体积(ml) 时间(h) 温度(℃) 提取次数
1 100 1 70 2
2 200 2 80 3
3 300 3 90 4
表1 水平因素表
Table 1 The level form of factor
1.4.2乙醇沉淀多糖
本实验采用乙醇作为多糖沉淀剂。以上述最优工艺
提取粗多糖，取若干份浓缩液，每份50ml。将此浓缩
液按1:1、1:2、1:3的体积比分别与不同浓度梯度的乙
醇溶液混合，静置过夜，待沉淀析出，离心，将沉
淀物相继用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥得松萝
粗多糖。
1.4.3乙醚脱脂
将乙醇沉淀所得的粗多糖装入滤纸筒后置于索式提
取器中，45℃恒温加热提取至粗脂肪脱尽，挥干残醚
得白色粗多糖。
1.4.4脱蛋白
松萝多糖中含有游离蛋白质，会影响多糖的分离提
纯。因此在提纯前需将游离蛋白除去。目前除去游离
蛋白的最有效方法是Sevage法。在松萝粗多糖中加入
氯仿-正丁醇混合溶液进行充分振荡，将游离蛋白变性
成为不溶性物质，分层去除，通常要反复进行5～8次
才能很好地去除蛋白质，因此本文通过对变性剂与样品
体积比以及处理次数的研究，以确定松萝多糖的最佳脱
蛋白工艺。
称取松萝粗多糖样品0.400g，室温加入少量蒸馏
水，置于电热套上加热溶解，冷却后，转置于200.0ml
容量瓶中稀释至刻度线，摇匀。氯仿-正丁醇溶液预先
配成体积比4:1的混合溶液。粗多糖溶液4.0ml，加氯
仿-正丁醇溶液1.0ml，置于具塞试管中，充分振荡30min
后，离心1min，将氯仿与水相分开。将3.0ml溶液置
于石英比色皿中，用可见-紫外分光光度计测定280nm
处吸收至A。用蒸馏水做对照。测毕将溶液倒回试管
中，按照体积比再加入氯仿-正丁醇溶液，重复上述过
程，至吸光值基本不变。再将样品溶液与氯仿-正丁醇
溶液按照体积比为3:1、2:1、1:1，重复前面的操作。
1.4.5透析
用玻璃纸代替透析袋。玻璃纸的活化：1kg水中加
入0.37224 EDTANa，用10g/L的Na2CO3调pH至9(用去
约100ml Na2CO3溶液)。加入玻璃纸，煮沸30min。按
前面方法操作得到的多糖粉末一定量溶于水，加热，使
多糖完全溶解。溶解后的多糖放入玻璃纸中，扎口，
用蒸馏水透析24h，去除小分子物质。透析过夜后的多
糖溶液再用乙醇沉淀，得到精制的多糖粉末。
1.4.6多糖含量的测定[7]
1.4.6.1标准曲线
精密称取葡萄糖标准品100mg，置于小烧杯中，加
入适量水溶解，定量转移至100ml容量瓶中，加水至刻
度，摇匀做葡萄糖贮备液。准确吸取该液10ml置于
100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释到刻度，摇匀，即为
葡萄糖应用液。分别取0.1g/L的标准葡萄糖溶液0.05、
0.10、 .20、 .30、 .40、 .50、 .60、 .80、1.00ml，
用蒸馏水补足至1ml后，分别加入4ml 2g/L的蒽酮-硫
酸试剂。迅速浸入冰水中冷却，各管加完后，一起浸
入沸水浴中，自水重新沸起，准确煮沸10min，取出
用自来水冷却，室温放置10min左右，在620nm处比
色，以光密度A为纵坐标，糖浓度C为横坐标，得标
准曲线(图2)。
精密称取提取的多糖5.0mg，加热水溶解后定容至
100.0ml，取1.0ml，按照上述方法测定吸光度，查标准
曲线，计算结果。
2 结果与分析
2.1正交试验设计与试验结果
由表2正交试验结果及其效应曲线图(见图1)说明：
亚花松萝多糖提取工艺各因素的最佳水平为热水体积
200ml 、在70～80℃下提取三次，每次2h。
表3方差分析结果表明：亚花松萝多糖提取工艺各
因素中提取次数和热水体积的差异对多糖得率有较大的
187※工艺技术 食品科学 2006, Vol. 27, No. 07
影响，而提取时间和提取温度的差异无明显的影响。
2.2不同体积比、不同乙醇浓度对沉淀多糖的效果
因素
热水体积 提取时间 提取温度 提取 多糖得率
(ml) (h) (℃) 次数 (%)
试验1 100 1 70 1 2.11
试验2 100 2 80 2 2.42
试验3 100 3 90 3 2.83
试验4 200 1 80 3 3.13
试验5 200 2 90 1 2.29
试验6 200 3 70 2 2.77
试验7 300 1 90 2 2.50
试验8 300 2 70 3 3.06
试验9 300 3 80 1 2.37
极差 0.280 0.090 0.127 0.710
表2 正交试验结果
Table 2 The result of orthogonal test
因素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值
热水体积 0.012 2 0.478 4.460
时间 0.010 2 0.040 4.460
温度 0.021 2 0.084 4.460
提取次数 0.853 2 3.398 4.460
表3 方差分析结果
Table 3 Variance results of the experiments
不同浓度梯度的乙醇溶液(%)
体积比
40 50 60 70 80 95
1:1 0.020g0.040g0.024g0.047g0.051g0.012g
1:2 0.017g0.049g0.025g0.041g0.044g0.015g
1:3 0.016g0.043g0.037g0.038g0.030g0.013g
表4 不同体积比,不同浓度的乙醇溶液对沉淀多糖的效果
Table 4 The result of precipitating polysaccharide with different
volume and density alcohol
A值 Sevage法处理的次数
体积比 1 2 3 4 5 6 7
1:1 0.3640.3220.2760.2450.2160.1960.196
2:1 0.3870.3240.2850.2430.2180.1980.198
3:1 0.3210.2850.2140.1720.150.150
4:1 0.3560.3050.2610.2030.160.160
表5 Sevage法不同方式脱蛋白后的吸光度
Table 5 Absorbance of different removing proteins with Sevage
由表4可以看出，不同浓度梯度的乙醇溶液和不同
体积比对多糖得率影响较大。当乙醇浓度为4 0 %、
70%、80%时，随着体积比的增大，多糖得率呈递减
趋势；乙醇浓度为60%时，随着体积比的增大，多糖
得率呈递增趋势；乙醇浓度为50%和95%，体积比在
1:2时，多糖得率最大。而当乙醇浓度为95%时，无
论体积比为1:1、1:2还是1:3，其沉淀出的多糖克数都
是最小的。当乙醇浓度为80%，体积比为1:1时，沉
淀出的多糖克数是最多的。综上所述，松萝多糖的最
佳乙醇沉淀浓度为80%，体积比为1:1。
注：在实验过程中，95%乙醇需要沉淀24h以上
才可以产生沉淀，并且沉淀大片相连，呈薄片状。
2.3Sevage法脱蛋白结果
由表5可知，松萝多糖溶液与Sevage试剂的体积
比为1:1，反复脱蛋白五次，效果最佳。
2.4松萝多糖总糖含量
测得多糖溶液的A620为0.452，从总糖的标准曲线
得松萝多糖的总糖含量为76%。
3 结 论
根据本实验结果分析，松萝多糖的提取工艺各因素
中提取次数对粗多糖得率影响较大，其次为提取时间及
热水体积，提取温度在一定范围内无显著影响。为节
水节力省时，采用少量短时多次提取比较合理，即
200ml(6g)，在70～80℃提取三次，每次2h。乙醇沉淀
多糖的最佳浓度为80%一倍，Sevage试剂除游离蛋白
时的体积比为3:1，反复脱蛋白五次，每次振荡30min。
乙醚脱脂，对蒸馏水透析过夜，能达到良好的提取、
沉淀、脱蛋白、脱脂效果。
参考文献：
[1] 田庚元. 天然多糖的研究和应用(上)[J]. 上海化工, 2000, (10): 29-31.
[2] 周宁娜, 梁晓原, 李其光. 中药多糖的研究近况[J]. 云南中医学院学
报, 1996, 19(3): 19-23.
[3] 叶勇. 植物多糖的分离纯化与制备[J]. 中国食品添加剂, 2001, (5):
29-31.
[4] 吴国欣, 陈密玉, 李永星, 等. 南瓜多糖的提取与分离工艺的优化[J].
海峡药学, 2003, 15(4): 52-55.
[5] 张惟杰. 糖复合物生化研究技术(第二版)[M]. 浙江大学出版社, 1994.
35-250.
[6] 尤献民，金微，邹桂新等.老头草种多糖的含量测定[J]. 时珍国药
研究, 1997, 8(6): 513-514.
[7] 程霜, 崔庆新, 王勇. 水溶性苦瓜多糖的提取与测定[J]. 郑州粮食学
院学报, 2000, 21(2): 53-56.