全 文 ：第 卷 第 期
年 月
沈 阳 药 科 大 学 学 报
垃
文章编号 一 一
大孔树脂纯化核桃揪皮总黄酮工艺
杜瑞娟 , 张聪璐 , 梁 宁 , 李金凤 , 侯晓虹
沈阳药科大学 制药工程学院 ,辽宁 沈阳
摘要 目的大孔树脂纯化核桃揪皮总黄酮的工艺优化。方法 以大孔树脂 一 、妞 一 、 一
和 一 对总黄酮的吸附率和解吸率为指标筛选树脂种类 ,并对优选树脂的吸附特性和各影响
因素进行研究 ,优化工艺条件 。结果 一 具有较好的吸附率和解吸率 ,最佳纯化工艺为上样液
的 为 ,总黄酮质量浓度为 · 一`,上样流速为 · 一 ,洗脱溶剂为体积分数为
的乙醇 ,洗脱体积为 。经 一 大孔树脂纯化 次后 ,核桃揪皮总黄酮含量提高至原来
的 倍 。结论 一 大孔树脂能较好地用于核桃揪皮总黄酮的纯化 。
关键词 核桃揪皮 总黄酮 大孔树脂 纯化
中图分类号 文献标志码
核桃揪皮 为
胡桃科胡桃属植物核桃揪
的树皮 ,味苦性寒 ,具有清热解毒 、止痢
明目的功效 〔〕。 《中华本草 》中有核桃揪皮 “气
微 ,味微苦 、涩 ,清热燥湿 、泄肝明目。主治湿热下
痢 、带下黄稠 、目赤肿痛 、麦粒肿 、迎风流泪 、骨结
核 ”的表述 “ 。国内外对核桃揪皮化学成分的研
究已有较多报道 ,其主要成分为醒类 一 、黄酮
类 〔」、多酚川 、挥发油 〕`及昔类等 。黄酮类化合
物主要包括榭皮素 、山奈酚 、袖皮素及昔类等 。现
代研究表明 ,黄酮类化合物有抗肿瘤 、降血糖血
脂 、降压 、抗心律失常 、保护肝肾组织 、抗凝血等药
理作用 〔〕。大孔树脂具有物理化学稳定性高 、吸
附容量大 、选择性好 、解吸条件温和 、再生处理方
便等优点 ,常用于天然药物化学成分的分离纯
化 。一川 。作者以核桃揪皮为研究对象 ,考察了大
孔树脂分离纯化核桃揪皮总黄酮的工艺 ,为核桃
揪皮的开发利用提供科学依据 。有关大孔树脂对
核桃揪皮总黄酮进行纯化的研究国内外未见报道 。
生科技有限公司 。
一 、 一 、 一 、 一 大孔树脂
沧州宝恩吸附材料科技有限公司 ,芦丁 批号
为 一 ,中国食品药品检定研究院 ,乙
醇 分析纯 ,天津市富宇精细化工有限公司 。
核桃揪皮采于辽宁省辽阳市 ,经沈阳药科大
学中药学院贾英副教授鉴定为胡桃科胡桃属植物
核桃揪 的树皮 。
仪器与材料
一 紫外一可见吸收光谱仪 日本
公司 , 电子天平 日本
公司 , 一 型电热恒温水浴锅 上海森信
实验仪器有限公司 , 旋转蒸发仪 上海申
方法与结果
核桃揪皮总黄酮含量测定方法
取 芦丁对照品 ,精密称定 ,置
量 瓶 中 , 用 乙 醇 溶 解 并 稀 释 至 刻 度 , 得
· 一的芦丁对照品储备液 。
精密量取芦丁对照品储备液 、 、 、
、 、 、 ,分别置于 个 具塞
比色管中 ,各加体积分数为 的乙醇至 ,
摇匀 。加人质量分数为 的亚硝 酸钠溶 液
,摇匀 ,放置 加人质量分数为
的硝酸铝溶液 ,摇匀 ,放置 再加人
质量分数为 的氢氧化钠溶液 ,补加体积
分数为 的乙醇至刻度 ,摇匀 ,放置 巧 而 ,分
别得 、 、 、 、 、 · 一的
芦丁对照溶液 。以未加芦丁的溶液为空白 ,于
波长处测定吸光度 。以对照溶液 的质量
收稿 日期 一 一
作者简介 杜瑞娟 一 ,女 汉族 ,河南郑州人 ,硕士研究生 , 通讯作者 侯晓
虹 一 ,女 汉族 ,辽宁沈阳人 ,教授 ,博士 ,主要从事药物分析和环境分析的研究 , 一 , 一
。
第 期 杜瑞娟等 大孔树脂纯化核桃揪皮总黄酮工艺
浓度 · 一` 为横坐标 ,吸光度为纵坐标 ,绘制
标准 曲线 , 得 回归方 程 为
, ,线性为 一 · 一 。
核桃揪皮总黄酮粗提液的制备
取核桃 揪皮药材粉末 过 林 筛 约
,精密称定 ,加人 巧倍量的体积分数 的
乙醇 , ℃水浴加热回流 次 ,每次 ,得醇
提液 。减压蒸干 ,用水超声分散溶解 ,离心沉淀除
去不溶物 ,上清液转移至 量瓶中 ,用水
定容至刻度 。按 “ ”条下方法测定 ,总黄酮质
量浓度为 · 一 。
大孔树脂的预处理
取大孔树脂 ,用无水乙醇浸泡过夜 ,湿法装
柱 ,用无水乙醇洗至流出液与水混合不呈现白色
乳浊现象即可 ,然后用水洗净柱中乙醇 ,水浸泡备
用 。
不同型号大孔树脂的吸附与解吸
取预处理好的 种大孔树脂各 ,置于
具塞三角瓶中 ,加人 巧 粗提液 ,室温
下置空气浴振荡器中 , ·而 一震摇 ,使
粗提液中的总黄酮被充分吸附 ,过滤 ,按 “ ”条
下方法测定滤液中剩余黄酮的浓度 ,按式 计
算各树脂的吸附率 。将静态吸附的树脂抽干 ,加
人 体积分数为 的乙醇 ,将三角烧瓶置
于空气浴振荡器中 , ·而 一震摇 ,充分
解吸后过滤 ,按 “ ”条下方法测定滤液中总黄
酮的浓度 ,按式 计算各树脂的解吸率 。结果
见表 。
静态吸附解吸公式
由表 可知 , 佗 的吸附率最高 , 一 次
之 , 一 的解吸率最高 , 一 次之 ,综合考虑 ,
采用 一 大孔树脂纯化核桃揪皮总黄酮 。
上样 值的考察
取预处理好的 一 大孔树脂 ,置于 个
具塞三角瓶中 ,分别加入 值调为 、 、
、 、 、 的粗提液 巧 ,室温下置空气浴振荡
器中 , ·而 一震摇 ,使粗提液中的总黄
酮被充分吸附 ,过滤 ,按 “ ”条下方法测定滤液
中剩余黄酮的浓度 ,按式 计算吸附率 ,结果见
图 。
艺﹄︻勺月﹃。﹄口﹃认勺的公
` 人 孟 二
图 值对吸附率的影响
由图 可知 , 为 时 ,核桃揪皮总黄酮的
吸附率达到最大 ,故上样液的 值选为 。
动态吸附曲线的绘制
取预处理好的 一 大孔树脂 ,湿法装
柱 ,加核桃揪皮总黄酮粗提液 · 一 于
柱顶 ,以 一的流速进行动态吸附 ,每
收集 个流份 ,按 “ ”条下方法测定每一
流份中总黄酮的浓度 ,绘制泄漏曲线 ,结果见图 。
切日、定
、,了,子、`吸附率 一
解吸率 。一 ,
式中 。和 分别为吸附前后核桃揪皮总黄酮的
质量浓度 · 一 , 为解吸液中核桃揪皮总黄
酮的质量浓度 · 一 , , 为解吸液的体积 ,
为粗提液的体积 。
表 种大孔吸附树脂的吸附 解吸性能
一
一
一
。刚 , 以 ,
而 一
图 一 动态吸附曲线
由图 可知 ,随着上样量的增加 ,流出液中总
黄酮的量也随之增加 ,当上样量达到 时 ,
即总黄酮上样量为 时 ,流出液中总黄酮达
到稳定 ,即大孔吸附树脂达到动态吸附饱和 ,由此
确定动态最大上样量 。
沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 卷
上样液质量浓度的考察
质量浓度为 、 、 、 · 一的
总黄酮粗提液分别以 一的流速上样 ,
收集流出液 ,按 “ ”条下方法测定流出液中总
黄酮的浓度 ,按式 计算不同上样浓度下树脂
的吸附率 ,结果见图 。
器中 , · 一`震摇 ,使粗提液中的总黄
酮被充分吸附 。吸附结束后抽滤 ,将树脂转移至
另外 个 具塞三角瓶中 ,分别加人
体积分数为 、 、 、 的乙醇 ,室温
下置空气浴振荡器中 , ·而 一震摇 ,使
总黄酮被充分解吸 ,过滤 ,按 “ ”条下方法测定
滤液中总黄酮的浓度 ,按式 计算解吸率 ,结果
见图 。
次
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图 上样液质量浓度对吸附率的影响
由图 可知 ,随着上样液质量浓度的增加 ,总
黄酮的吸附率先升高 ,而后降低 ,上样液质量浓度
为 · 一时 ,吸附率最高 ,故上样液质量浓
度选为 · 一`。
上样流速的考察
采用质量浓度为 · 一的总黄酮粗提
液 ,在相同试验条件下 ,将上样液分别以 、
、 而 一的流速通过树脂柱进行动态
吸附 ,考察不同上样流速下树脂对总黄酮的吸附
率 ,结果见图 。
一一 二 工 `
印
图 乙醇浓度对解吸率的影响
由图 可知 ,体积分数为 的乙醇解吸率
最大 ,但与体积分数为 的乙醇相比 ,二者的
解吸率相差不大 ,从节省原料的角度考虑 ,选择体
积分数为 的乙醇作为洗脱溶剂 。
洗脱体积的考察
采用质量浓度为 · 一的总黄酮粗提
液 ,调节其 值为 ,以 · 一的
流速通过树脂柱 ,吸附 后 ,先用水洗至无色 ,
再用体积分数为 的乙醇进行洗脱 ,按树脂床
体积收集洗脱液 ,按 “ ”条下方法测定洗脱液
中总黄酮的浓度 ,按式 计算解吸率 ,结果见图
。
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· 一
图 上样流速对吸附率的影响
由图 可知 ,吸附率随着上样流速的增大而
下降 ,但流速过低影响工作效率 ,综合考虑吸附效
果和工作效率 ,采用 一的流速较适
生「
洗脱溶剂的考察
取预处理好的 名 大孔树脂 ,置于 个
具塞三角瓶中 ,分别加人 巧 为
的粗提液 · 一 ,室温下置空气浴振荡
` 目 一一 习
图 一 大孔树脂洗脱流量的考察
由图 可知 ,在起始阶段 ,随着洗脱剂的增
加 ,总黄酮解吸率较快增加 ,当洗脱剂用体积为
倍柱体积 时 ,解吸率增加缓慢 ,基本
达到解吸平衡 ,故选择 作为洗脱体积 。
第 期 杜瑞娟等 大孔树脂纯化核桃揪皮总黄酮工艺
验证试验
取核桃揪皮药材粉末约 ,精密称定 ,加
人 巧倍量的体积分数为 的乙醇 , ℃水浴
加热回流 次 ,每次 ,得醇提液 。将醇提液
减压回收乙醇得浸膏 ,将浸膏转移至已称重的蒸
发皿中水浴蒸干 ,得提取物总质量为 。
提取物用水溶解 ,离心除去不溶物 ,上清液转
移至 量瓶中 ,用水定容至刻度 。按 “ ”
条下方法测得总黄酮质量浓度为 · 一 ,则
总黄酮纯化前的含量质量分数为 。
按上述确定的条件进行放大验证试验 ,待上
样液充分吸附后 ,用体积分数为 的乙醇洗
脱 ,得体积分数为 的乙醇洗脱物 ,按 “ ”条
下方法测定洗脱物中总黄酮浓度 ,计算总黄酮的
含量质量分数为 ,可知纯化后的提取物
中总黄酮的含量提高至原来的 倍 。
进行纯化 ,上样液 值为 ,上样液质量浓度为
· 一 ,上样流速为 一 ,洗脱溶
剂为体积分数为 的乙醇 ,洗脱用体积为
。验证试验结果表明 ,纯化后的提取物中
总黄酮的含量提高至原来的 倍 。
结论与讨论
大孔树脂是近年来发展起来的一种不溶
于酸 、碱及各种有机溶剂的有机高分子聚合物吸
附剂 ,通过吸附和分子筛两种机制发挥分离纯化
作用 。其吸附性是范德华力或者生成氢键的结
果 ,分子筛作用则是由其本身多孔性结构决定的 。
核桃揪皮中的黄酮化合物多为黄酮醇及黄酮醇
昔 ,分子极性不一 ,故选择 种不同极性的大孔树
脂进行实验 。结果表明 ,弱极性的 一 大孔树
脂对核桃揪皮中的总黄酮具有较好的吸附和解吸
性能 。采用 一 纯化核桃揪皮总黄酮稳定性
好 、解吸条件温和 、容易再生 、且可多次反复利用 ,
相对于其它分离材料具有较好的优势 。
通过对大孔树脂纯化核桃揪皮总黄酮工
艺的研究 ,确定纯化工艺为 采用 一 大孔树脂
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3 02 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 卷
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