全 文 ：Abstract Objective:To study the effects of keaixin and its components on the tumo r g row th in tumo r-bearing mice.Methods:The
inhibitory effect on tumo r gr ow th w as observed by the models of implanted sarcoma180(S180)and hepatoma 22(H22)in mice.Result:
At do sage of 150 and 300 mg · kg-1 , the inhibitor y ra te of Keaixin is 38.52% and 47.88% fo r S180 , 32.17% and 40.18% fo r H22 ,
respectiv ely.The effect s of Keaixin were superior to its components(P<0.01 o r P<0.05).Conclusion:Keaixin exhibited significantly
anti-tumo r syner gistic effect , its prescription is reasonable.
Key Words:Keaixin;Tumor-bearing mice;S180;H22
红毛毡提取物体外抗肿瘤的实验研究
黄秀华1 　张丹2 　邓国兵2
(1.电子科技大学生命科学与技术学院分子生物学实验室 ,成都　610051;
2.成都恩威集团四川恩威中医药研究开发有限公司药理室 ,成都　610041)
　　摘　要　目的:探讨红毛毡提取物的体外抗癌作用。方法:用 M TT 法检测红毛毡提取物对 13 种肿瘤细胞株体外生长的抑
制作用。结果:红毛毡提取物对所试肿瘤细胞株的体外生长均具有较强的抑制作用 ,其中对急性 T 细胞白血病细胞 Jurkat 、人肾癌
细胞 OS-RC-2 、人慢性髓质白血病细胞 K562 、人肺癌细胞 A549 和人乳腺导管癌细胞 MDA-MB-435s 的作用强 , 半数抑制浓度
(IC50)分别为 9.25±3.68 、10.75±2.40、10.90±3.74、11.21±3.07 和 12.66±1.19 μg ·ml-1 , 其次是对人食管癌细胞 Eca-109、人
胰腺癌细胞 PANC-1、人黑色素瘤细胞 A375、人肝癌细胞 QGY-7703 和人胃癌细胞 SGC-7901 , 半数抑制浓度(IC50)分别为 14.36±
2.26、15.36±6.73、15.48±1.98 、17.21±10.32 和 19.01±5.95 μg ·ml-1 。结论:红毛毡提取物具有广谱抗肿瘤作用。
关键词:红毛毡提取物;MT T;广谱;IC50
作者简介:黄秀华(1970-),女 ,助理研究员 ,硕士 ,主要从事体内外抗菌
抗肿瘤和基因毒性方面的研究。 Email:huangxh 1130@sina.com。
　　红毛毡(Ardisia mamillata), 又名佛光江 、老虎舌 、红毛走
马胎 、红地毡 、虎舌红 , 属紫金牛科植物 ,是一种广泛分布于中
国南方地区的草本植物 ,具有清热利湿 , 活血和瘀的功效 , 常用
于治疗痢疾 ,肝炎 , 胆囊炎 ,风湿 , 跌打劳伤 ,咳血 , 吐血 , 妇女痛
经 ,血崩 , 小儿疳积 ,疮疖痈肿疼痛[ 1] 。其叶和茎的皮层和髓部
有分泌组织 ,内含红棕色树脂类物质 、岩白菜内酯 、挥发油 、黄
酮类 、甙类 、鞣质和苯醌等[2] , 使其具有广泛的生物学活性 , 为
考察红毛毡提取物的体外抗肿瘤作用 ,我们采用 MTT 法检测
红毛毡提取物对 13 种肿瘤细胞株体外生长的抑制作用 , 以筛
选出敏感肿瘤类型 ,了解其作用强度 , 为体内试验提供参考。
1　材料和方法
1.1　试剂及设备
红毛毡提取物由本公司工艺室提供 , 顺铂注射液购自由云
南个旧生物药业有限公司 , PMI-1640 、DMEM 、L-15、胰蛋白酶
均为 Gibco 产品 ,M TT 、台盼蓝为 Sigma 产品 , DMSO 为成都科
龙化工试剂厂产品 , 小牛血清购自成都哈里生物工程有限公
司 ,胎牛血清购自 Hyclone公司 , 酶联检测仪 , BIORAD 550 型 ,
BIORAD公司产品 , CO 2培养箱 , Thermo 371型 , 美国热电公司
产品 ,倒置显微镜 , CK40-F200 型 , 日本 OLMPUS 产品。
1.2　细胞培养
SGC-7901 , 人胃癌细胞;QGY-7703 ,人肝癌细胞;A549 , 人
肺癌细胞;K562 , 人慢性髓质白血病细胞;PC-3 , 人前列腺癌细
胞;H T-29 ,人结肠癌细胞;OS-RC-2 , 人肾癌细胞;MDA-MB-
435s ,人乳腺导管癌细胞;HO-8910 , 人卵巢癌细胞;A375 , 人黑
色素瘤细胞;PANC-1 , 人胰腺癌细胞;Jurkat , 急性 T 细胞白血
病细胞;Eca-109 , 人食管癌细胞;购于中科院上海生命科学研究
院细胞库。分别培养于 RPMI-1640 +10%小牛血清 , RPMI-
1640+10%胎牛血清 , DMEM+10%胎牛血清 , L-15+10%胎
牛血清 , 1% L-glutamine , 1×105 U · L-1青霉素和 100 mg ·
L-1链霉素的各培养液中 , 在 37℃, 5% CO 2培养箱培养。
1.3　体外抗癌试验
1.3.1　贴壁细胞
贴壁细胞经常规传代培养至对数生长期 , 弃旧培养液 , 加
入 0.25%胰酶+0.02% EDTA 消化 ,待细胞变圆成单个时 , 加
入完全培养液 , 轻轻吹打 , 使其形成单细胞悬液。收集细胞至
离心管中。 1000rpm ·min-1离心 5min。弃去上清 , 沉淀加入
培养基悬浮混匀。台盼蓝排斥法进行细胞计数 ,调整细胞浓度
至 1×105细胞·ml-1的细胞悬液。取 96 孔板 , 每孔用移液器
加入细胞悬液 200μl , 使每孔细胞数为 2.0 ×104个。 置 37℃、
5%CO 2培养箱中培养 24h 后取出 96 孔板 , 移液器小心吸去上
清液 , 每孔分别加入用完全培养液配制的药物溶液 200μl , 每个
浓度设三个复孔。细胞对照组加 200μl的完全培养液 , 阳性对
照加入顺铂药液 200μl , 每个浓度三个复孔。置 37℃、5%CO2
培养箱中培养 48h 后取 96孔板 ,直接加 20μl M TT 溶液 , 37℃、
5%CO 2培养箱继续培养 4h , 吸去上清液 , 每孔加入二甲亚砜
150μl , 充分振荡 5min 溶解 , 酶标仪 490nm 处测定去空白 OD
值 , 参比波长 655nm。
1.3.2　悬浮细胞
悬浮细胞经常规传代培养至对数生长期 ,直接用吸管轻轻
吹打 , 使其形成单细胞悬液。收集细胞至离心管中 , 1000 rpm
·min-1离心 5min。台盼蓝排斥法进行细胞计数 , 调整细胞浓
度至 2×105细胞·ml-1的细胞悬液。取 96 孔板 ,每孔用移液
器加入细胞悬液 100μl , 每孔细胞数为 2.0×104 , 每孔分别加入
用完全培养液配制的药液 100μl , 每个浓度设三个复孔。 细胞
对照加 100μl培养液 ,阳性对照加入顺铂药液 100μl , 每个浓度
三个复孔。置 37℃、5%CO2培养箱中培养 48h 后 , 每孔加入
5mg·ml -1 M TT 溶液 20μl , 37℃、5%CO 2培养箱继续培养 4h
后 , 1000 ～ 1500 rpm·min-1离心 10 ～ 15min ,小心吸去上清液 ,
149四川生理科学杂志 2009;31(4)
每孔加入二甲亚砜 150μl , 充分振荡 5min 溶解 ,酶标仪 490nm
处测定去空白 OD 值 ,参比波长 655nm。
1.4　数据处理
由 OD 值计算抑制率 , 公式为:细胞生长抑制率 IR=(对
照组 OD 值-实验组 OD值)/对照组 OD 值×100%。半数抑
制浓度 IC50 =细胞生长抑制率为 50%的药物浓度 , 并 IC50软件
求得 IC50值。
2　结果
表 1　红毛毡提取物以及顺铂注射液对 13 株
人肿瘤细胞株的体外生长抑制作用(x±s , n=3)
细胞株 IC50(μg·ml-1)红毛毡提取物 顺铂注射液
SGC-7901 19.01±5.95 1.62±0.18
OS-RC-2 10.75±2.40 3.66±0.73
QG Y-7703 17.21±10.32 0.29±0.24
K 562 10.90±3.74 2.90±0.56
A549 11.21±3.07 1.97±0.71
HT-29 25.51±0.83 51.79±0.98
PC-3 27.50±9.58 15.00±3.33
M DA-MB-435s 12.66±1.19 46.26±1.03
HO-8910 32.42±12.47 2.98±1.94
A375 15.48±1.98 0.94±0.15
PANC-1 15.36±6.73 9.67±11.62
Eca-109 14.36±2.26 0.72±0.19
Jurka t 9.25±3.68 0.50±0.11
　　红毛毡提取物体外具有强抗肿瘤活性 , 对其敏感的肿瘤细
胞有急性 T 细胞白血病细胞 Jurka t 、人肾癌细胞 OS-RC-2、人
慢性髓质白血病细胞 K562、人肺癌细胞 A549和人乳腺导管癌
细胞 MDA-MB-435s , IC50 值分别为 9.25 ±3.68 、10.75 ±
2.40、10.90±3.74、11.21±3.07 和 12.66±1.19μg · ml-1 , 其
中红毛毡提取物对 MDA-MB-435s 的活性约为顺铂注射液的 4
倍。对所试肿瘤细胞中最不敏感的细胞是人卵巢癌细胞 HO-
8910 , 但红毛毡提取物对其 IC50 值也低至 32.42±12.47μg ·
ml-1 。红毛毡提取物对人结肠癌细胞 H T-29 的 IC50值虽然不
是最低的 ,其 IC50值低于顺铂注射液对该细胞的 IC50值 ,分别为
25.51±0.83μg ·ml-1和 51.79±0.98μg·m l-1 。见表 1。
3　讨论
紫金牛科紫金牛属(Ardisia Sw)植物全世界约有 300 种 ,
其主要提取物有苯酚类 、皂苷类 、香豆素类和苯醌类 , 其中苯酚
类 、皂苷类有较强的抗肿瘤活性 ,岩白菜素有良好的 抗 H IV 病
毒作用[ 3-5] 。 虎舌红中也含有丰富的生物碱[ 6] , Jing Huang
等[ 7]从其中提取到两种新的三帖烯皂甙 , 提示红毛毡有潜在的
抗肿瘤活性 , 但国内目前无相关抗肿瘤作用的实验研究。 本文
的检测结果表明了红毛毡提取物体外具有强抗肿瘤活性 , IC50
低至 10μg ·ml-1 , 而且其抗癌谱广 , 对其敏感的肿瘤细胞有急
性 T 细胞白血病细胞 、人肾癌细胞 、人慢性髓质白血病细胞 、人
肺癌细胞和人乳腺导管癌细胞等 ,这为临床抗肿瘤治疗提供了
新的选择。不过 , 红毛毡提取物的体内抗肿瘤作用效果如何 ,
其作用机制怎样都还有待进一步研究。
参考文献
1　曾云英.野生植物赍源虎舌红的研究进展[ J] .北方园艺 , 2008 ,
(1):61-66.
2　卢其能.虎舌红的生物学特性与组织培养研究[ J] .江西林业科技 ,
2002 , 1:5-6.
3　赵亚 ,刘合刚.紫金牛属植物研究近况[ J] .中草药 , 1999 , 30(3):
228-231.
4　H orgen FD , Guinaudeau H , Pezzuto JM , et al.Isolation and s t ru c-
ture elucidation of ardis enone:a new , cy totoxic alkenylphenol f rom
Ardisia iw ahigensi s[ J] .J Nat Prod , 1997 , 60(5):533-5.
5　Piacen te S , Pizza C , De Tomm asi N , et al.Const ituents of Ardisia
japonica and thei r in vit ro ant i-HIV activi ty[ J] .J Nat Prod , 1996 ,
59(6):565-9.
6　凌育赵 ,杨妙贤.酸性染料比色法测定虎舌红中总生物碱的含量
[ J] .时珍国医国药 , 2007 , 18(7):1597-1598.
7　Jing H uang , H ao Zhang , Norik o Shimizu , et al.Ardisim ami llosides
G and H , tw o new t rit erpenoid saponin s f rom Ardisia mamil lata[ J] .
Chem Pharm Bul l , 2003 , 51(7):87-877.
(收稿日期:2009-10-10)
Antitumor activities of Ardisia mamillata extract in vitro
Huang Xiu-hua1 , Zhang Dan2 , Deng Guo-bing2
(1.Labo rato ry o f Molecular Biolog y , Co llege o f Life Sicence and Techno lo gy ,
Univer sity o f Electronic Science and Techno log y o f China , Chengdu 610051;
2.Labo rato ry of Pharmaco lo gy , Sichuan Enwei Institute o f T raditional Chinese medicine , Enwei G roup , Chengdu 610041)
Abstract Objective:To investiga te the antitumor activities of the A rdisia mamillata ex tract in vitro.Methods:To eva luate the
gr ow th inhibition effects o f the A rdisia mamillata ext ract on 13 kinds o f cancer cells with M TT assay.Results:The ext ract o f A rdisia
mamillata showed potent g row th inhibition activities to all the invo lv ed cancer cells in this study , especially to Jurkat , OS-RC-2 , K562 ,
A549 and MDA-MB-435s cell line s , the IC50 w ere 9.25±3.68 , 10.75±2.40 , 10.90±3.74 , 11.21±3.07 and 12.66±1.19g ·ml-1 re-
spectively , the fo llowing w as to Eca-109 , PANC-1 , A375 , QGY-7703 and SGC-7901 , the IC50 w ere 14.36±2.26 , 15.36±6.73 , 15.48
±1.9 , 17.21±10.32 and 19.01±5.95μg ·ml-1 respectiv ely.Conclusions:The ex tract o f A rdisia mamillata has broad-spectrum anti-
tumo r activities.
Key Words:Ex tract;Ardisia mamillata;M TT assay;Broad-spectrum;IC50
150 四川生理科学杂志 2009;31(4)