全 文 ：流感病毒血凝素能与细胞膜上的蛋白结合，使得
病毒进入细胞，故病毒血凝效价在一定程度上能够反
映病毒的数量和毒力。因此，血凝试验可用来判定病
毒滴度［7］。通过对小鼠肺悬液血凝滴度的测定了解肺
内流感病毒增殖程度。结果显示，锦带花乙酸乙酯及
乙醇提取物的低、中、高三个剂量及正丁醇提取物的
中、高剂量组小鼠肺组织内流感病毒血凝滴度明显低
于病毒对照组，说明能有效抑制小鼠肺组织内流感病
毒的增殖。综上所述，锦带花各有效部位中，乙酸乙酯
提取物能够较好地抑制甲型流感病毒的增殖，可视为
对抑制流感病毒起主要作用的有效部位。本研究为临
床上治疗甲型流感病毒感染提供了药效学依据。
收稿日期:2013 － 01 － 03
作者简介:刘长松(1987 －) ，男，山东青岛人，硕士研究生，研究方向:药
效组分及质量控制。
通讯作者:张贵君(1954 －) ，教授，博士研究生导师，研究方向:中药鉴
定方法学;中药药效组分及药效组分质量评价体系研究。
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大孔树脂对零陵香总黄酮的富集与纯化工艺研究
刘长松，张贵君，张智圆
(北京中医药大学中药学院，北京 100102)
摘 要:目的:研究用大孔树脂富集与纯化零陵香总黄酮工艺条件，为建立质量评价指标和中药药效组分新药研究
奠定基础。方法:通过静态吸附和解吸附方法筛选大孔树脂，通过动态单因素考察确定零陵香总黄酮富集与纯化工艺。
结果:D101 大孔树脂对零陵香总黄酮有良好的富集纯化效果。其动态富集纯化工艺条件为:零陵香总黄酮上样浓度为
1 g /mL，树脂和药液的体积比为 1∶ 1，吸附流速为 1 mL /min，用 3 BV50%的乙醇以 1 mL /min的流速洗脱，零陵香总黄酮
的纯度由 1． 2%提高到 18． 4%。结论:D101 大孔树脂用于零陵香总黄酮的富集与纯化，可提高纯度 15 倍。
关键词:零陵香;总黄酮;D101 大孔树脂;富集与纯化;药效组分
中图分类号:R284 文献标志码:A 文章编号:1000 － 1719(2013)07 － 1424 － 03
Study on Accumulation and Extraction of Total Flavonoids of Herba
Lysimachiae Foenum-graeti with Macroporous Resin
LIU Changsong，ZHANG Guijun，ZHANG Zhiyuan
(School of Materia Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China)
Abstract:Objective:To study the technique condition for accumulating and extracting the total flavonoids of Herba Lysimachi-
ae Foenum-graeti with macroporous resin，to establish the quality of evaluation index and Chinese medicines active components a-
lignment，which laid the foundation of new drug development． Methods:The macroporous resin was chosen by the static adsorption
and absorption method，determining the technique condition for accumulating and extracting the total flavonoids of Herba Lysima-
chiae Foenum-graeti through the dynamic single factor investigation． Results:The D101 macroporous resin has good effects to accu-
mulate and extract the total flavonoids of Herba Lysimachiae Foenum-graeti． The dynamic technique condition for accumulating
and extracting was as follow:the water solution concentration of Herba Lysimachiae Foenum-graeti that passed through macro-
porous resin was 1 g /mL． The volume ratio of macroporous resin and liquid medicine was 1∶ 1． The speed that sample flow through
macroporous resin was 1 mL /min，and the total flavonoids absorption on macroporous resin can be eluted by 50% ethanol of 3
BV，the elution speed was 1． 0 mL /min． The purity of the total flavonoids of Herba Lysimachiae Foenum － graeti was increased
from 1． 2% to 18． 4% ． Conclusion:The purity can improve the yield of 15 times when the D101 macroporous resin is used to ac-
cumulate and extract the total flavonoids of Herba Lysimachiae Foenum-graeti．
Key words:Herba Lysimachiae Foenum-graeti;total flavonoid;D101 macroporous resin;accumulate and extract;active com-
ponents alignment
·4241· 辽宁中医杂志 2013 年第 40 卷第 7 期
DOI：10.13192/j.ljtcm.2013.07.150.liuzhs.071
零陵香为报春花科植物灵香草 Lysimachia foenum-
graetum Hance的干燥地上部分，始载于《嘉佑本草》，其
味甘、淡，性平;行气止痛，驱蛔。临床用其配伍的煎剂
治疗伤寒、感冒头痛、胸腹胀满、鼻塞、牙痛等［1］。研究
表明:灵香草粗提物对 10 种植物病原菌具有强的抑制
活性，其药效组分很有可能包括黄酮类化合物［2］，但未
见对其进行系统研究报道。本研究采用 D101大孔吸附
树脂分离纯化零陵香黄酮类化学组分结果满意［3 －4］，为
其药效组分研究和质量评价奠定基础。
1 仪器与材料
Anke DL －5 － B离心机(上海安亭科学仪器厂) ，
水浴恒温振荡器(荣华 SHA － CA) ，日立 U － 3010 紫
外分析仪，Sartorious BP 110S 分析天平，AB － 8，D101，
D3520，D4020，X －5，NKA －9。
D101 大孔树脂(天津市海光化工有限公司) ，芸
香苷 Rutin(四川省维克奇生物科技有限公司，批号
110405) ，其他试剂均为分析纯。零陵香:为报春花科
植物灵香草 Lysimachia foenum-graetum Hance． 的干燥
地上部分，市售品。北京中医药大学张贵君教授鉴定。
2 方法与结果
2. 1 标准曲线的建立 精密称取 105℃减压干燥至
恒重的芦丁标准品 10. 07 mg 于 50 mL 容量瓶中，用
60%的乙醇进行定容，溶解摇匀作为标准溶液。精密
吸取标准品溶液 0、0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3. 0 mL，分
别置于 10 mL容量瓶中加 60%乙醇至 3 mL，各加 5%
亚硝酸钠溶液 0. 5 mL摇匀，放置 6 min，再各加 10%硝
酸铝溶液 0. 5 mL摇匀，放置 6 min，最后各加 4%氢氧
化钠溶液 5 mL，加水至刻度摇匀，放置 12 min。以试
剂为空白，照分光光度法，在 510 nm处测定吸光度，以
吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。回归
方程为:Y = 11. 836X + 0. 0041(r = 0. 9997) ，结果表
明:芦丁在 0. 01007 mg /mL ～ 0. 06042 mg /mL 浓度范
围内。
2. 2 大孔树脂预处理 将大孔树脂置于圆底烧瓶中，
分别加入 95%乙醇浸没，于水溶锅内加热回流 24 h，
湿法装柱，分别用大量蒸馏水冲洗，直至流出液无醇味
为止，备用。
2. 3 上样液的制备 精密称取一定量的零陵香全草，
加 20 倍的水煎煮 2 次，每次 50 min，过滤合并滤液，浓
缩至适量离心除去杂质，继续浓缩至每毫升溶液中含
有 1 g原药材，取 1 mL溶液稀释用上述方法测定其吸
光度，备用。
2. 4 静态吸附实验 精密量取经过预处理的不同型
号的树脂各 10 mL，置于 250 mL 具塞锥形瓶中，分别
加入 30 mL已经浓度的零陵香浓缩液，室温下摇床震
摇 24 h(75 次 /min) ，完全吸取余液稀释用 2. 1 方法计
算黄酮含量，得吸附量和吸附率。再向锥形瓶中分别
加入 95%乙醇各 30 mL同等条件下进行 24 h解析附，
完全吸取余液稀释用 2. 1 方法计算黄酮含量，得解析
附率和回收率。结果见表 1。计算公式［5 － 6］:比吸附量
=(初始浓度 －平衡浓度)×溶液体积 /树脂体积;吸
附率 =(初始浓度 －平衡浓度)×溶液体积 /初始浓度
×溶液体积;解析附率 =解析附浓度 ×溶液体积 /(初
始浓度 －平衡浓度)×溶液体积;回收率 =解析附浓
度 ×解吸液体积 /初始浓度 ×吸附液体积。由数据分
析选择吸附和解吸附均较好的 D101 树脂对零陵香中
的总黄酮进行纯化富集，见表 1。
表 1 不同型号树脂对零陵香总黄酮的吸附及解吸附情况
树脂型号
比吸附量
(mg /mL)
吸附率
(%)
解吸附率
(%)
回收率
(%)
AB －8 19. 89 56. 3 46. 5 26. 2
D101 22. 30 63. 1 46. 3 29. 2
D3520 13. 18 37. 3 47. 2 17. 6
D4020 20. 27 57. 4 38. 9 22. 3
X － 5 24. 96 70. 6 31. 2 22. 0
NKA －9 14. 32 40. 5 50. 9 20. 6
2. 5 上样浓度的选择 将零陵香水煎液分别浓缩至
0. 50、0. 75、1. 00 g /mL(生药材质量 /溶液体积) ，即 3
种不同浓度的上样液。将上述 3 种上样液各 30 mL在
三根 D101 树脂柱(16 mL，径高比为 1∶ 6)上进行上样
吸附，吸附流速 1 mL /min，完全收集洗脱液，定容至
250 mL，按照 2. 1 方法测定吸光度。计算比吸附量。
结果上样浓度为 0. 50、0. 75、1. 00 g /mL 时，D101 对零
陵香中总黄酮的比吸附量分别为 8. 60、11. 27、12. 98
g /L。可见上样浓度较大时有利于总黄酮的吸附，故上
样浓度选择为 1. 00 g /mL。
2. 6 吸附流速的选择 分别将 30 mL浓度为 1. 00 g /
mL的上样液加在 D101 树脂柱上(16 mL，径高比为 1
∶ 6) ，调节流速分别为 1. 0、1. 5、2. 0 mL /min吸附，完全
收集洗脱液，定容至 250 mL，按照 2. 1 方法测定吸光
度，计算比吸附量。结果吸附流速为 1. 0、1. 5、2. 0
mL /min时，D101 对零陵香中总黄酮的比吸附量分别
为 13. 63、12. 05、9. 99 g /L。可见吸附流速越小，吸附
量越大，故吸附流速选择为 1. 0 mL /min。
2. 7 泄露曲线的绘制 准备一个径高比为 1 ∶ 6 的
D101 树脂柱(树脂床体积为 16 mL) ，取浓度为 1. 00
g /mL的上样液 30 mL，以 1 mL /min 的流速加入树脂
柱中进行吸附，分段收集流出液，每 2 mL作为一份，按
照 2. 1 方法测定吸光度，从而绘制出泄露曲线，见图
1。由泄露曲线可知，零陵香水煎液在此条件下最大上
样体积为 16 mL为宜。
图 1 泄露曲线
2. 8 水洗体积的选择 取一根径高比为 1∶ 6 的 D101
树脂柱(树脂床体积为 16 mL) ，用浓度为 1 g /mL的上
样液 16 mL 以 1 mL /min 上样，完全吸附后，用蒸馏水
以 1 mL /min进行洗脱，每 1 BV收集作为一份，蒸干称
重得图 2，由此可知水洗体积为 4 BV为宜。
·5241·辽宁中医杂志 2013 年第 40 卷第 7 期
图 2 水洗体积
2. 9 洗脱溶剂的选择 取一根径高比为 1∶ 6 的 D101
树脂柱(树脂床的体积为 16 mL) ，用浓度为 1 g /mL的
上样液 16 mL以 1 mL /min 上样，吸附平衡后用 4 BV
的蒸馏水洗脱后分别加入 3 BV 的 30%、50%、70%、
95%的乙醇共 12 BV洗脱剂，每 1 BV作为一份进行收
集，最后 3 BV合并为一份，定容后按照 2. 1 的方法测
定吸光度，计算黄酮洗脱量(图 3)。由此可知选择
30%乙醇或 50%乙醇为宜。
图 3 洗脱曲线
再分别准备两个同样的的 D101 树脂柱，用浓度
为 1 g /mL的上样液 16 mL 以 1 mL /min 上样，吸附平
衡后用 4 BV的蒸馏水洗脱后分别用 4 BV的 30%乙醇
和 50%乙醇进行洗脱，收集洗脱液定容按 2. 1 方法测
定吸光度再计算黄酮洗脱量，得图 4，由此可知用 50%
乙醇洗脱为宜。
图 4 50%乙醇(1)与 30%乙醇(2)洗脱量比较
再在同样条件下，用 50%乙醇进行洗脱，每 1BV
作为一份进行收集，定容后按 2. 1 方法测定吸光度计
算黄酮洗脱量得图 5，由此图知用 50%洗脱体积以 3
BV为宜。
图 5 50%乙醇洗脱体积的选择
2. 10 验证实验 按照上述最佳工艺条件:D101 大孔
树脂，径高比为 1∶ 6(树脂床体积为 16 mL) ，上样浓度
为 1 g /mL，最大上样量 16 mL，上样流速 1 mL /min，4
BV蒸馏水除杂后，用 3 BV50%乙醇洗脱。平行实验 3
次，对零陵香水煎液中的总黄酮进行富集纯化，干燥后
计算总黄酮的含量和纯度。结果通过大孔树脂富集纯
化后，零陵香总黄酮的含量均值为 109. 3 mg，RSD 值
为 1. 92%，纯度也大幅提高，均值为 18. 4%，RSD值为
2. 03%，达到预期的实验目的。
3 讨 论
大孔吸附树脂是一类有机高聚物吸附剂，兼具吸
附和分子筛分离原理，对有机化合物具有良好的吸附
分离性能，已较多地应用于植物药的化学成分提取分
离，是分离纯化中草药成分有效的方法［7］。本实验选
取了具有代表性的非极性、弱极性和极性的六种大孔
树脂，进行了静态吸附考察实验，最终确定 D101 大孔
树脂对零陵香总黄酮的富集纯化效果更佳。中药药效
组分理论［8］是在传统水煎液的基础上考察中药在临床
中实际发挥疗效的有效组分的比例，是符合中医药自
身特点的理论，能有效的解决中药发展过程中的问题。
本实验通过静态吸附和解吸附方法筛选了大孔吸附树
脂，最后采用 D101 大孔树脂动态吸附富集纯化的方
法使零陵香水煎液中的总黄酮纯度提高了 15 倍，考察
了富集工艺并验证了其可行性，为之后研究其药效组
分和对其质量的评价奠定了基础。
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125 － 126．
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·6241· 辽宁中医杂志 2013 年第 40 卷第 7 期