全 文 ：2010年 3月　第 12卷　第 3期 中国现代中药 ModernChineseMedicine Mar.2010　Vol.12　No.3
质量标准
[通讯作者 ] 　＊胡宗礼 , E-mail:sgu-hu-zl@shou.com
甘木通不同部位总黄酮含量的测定
胡宗礼＊ , 黄晓萍 , 陈珺霞
(韶关学院英东生物工程学院 ,广东　韶关　512005)
[摘要 ] 　目的:建立黄酮类化合物含量的测定方法并分别测定甘木通茎 、 叶中总黄酮含量。方法:以芦丁为对
照品建立标准曲线 , 以 75%乙醇为溶剂在 90℃加热回流提取甘木通茎 、 叶中总黄酮类成分 , 用分光光度法在波长
510nm处测定总黄酮含量。结果:芦丁浓度(C)与吸光度(A)间的关系为 C=0.090 244A-0.000 193 6(r=1.000 0),
回收率为 101.18%, RSD=2.36%(n=5)。甘木通茎和叶中总黄酮含量分别为 0.99%和 1.20%。结论:甘木通叶中总
黄酮含量比茎约高出 21%。
[关键词 ] 　甘木通;总黄酮;分光光度法
甘木通 ClematisfilamentosaDunn俗称眼蛇药 ,
为毛茛科丝铁线莲属植物 , 主要分布在广东 、 广西 、
海南 、 云南等地 , 在粤北乳源山区有较为丰富的野
生资源 , 对心血管疾病(冠心病 、高血压)有显著疗
效 [ 1] 。目前关于甘木通确切的有效成分尚不清楚 ,
其提取物经盐酸镁粉反应及硝酸铝反应均呈阳性 ,
提示甘木通含有黄酮类成分。大量研究证实黄酮类
化合物具有抗心肌缺血 、 降血压 、 抗心律失常等功
效 [ 2] , 结合甘木通及其制剂的临床应用 , 甘木通中
黄酮类化合物是其有效成分之一 , 本实验通过对甘
木通不同部位进行总黄酮含量测定 , 为甘木通药用
部位的选定提供依据 。
1　材料
1.1药材与试药
甘木通药材(广东雷霆国药有限公司), 采收于
2007年 10月 , 经韶关市药品检验所江兰英所长鉴
定为甘木通 ClematisfilamentosaDunn;芦丁对照品
(上海国药集团化学试剂有限公司 , 纯度为 98%);
无水乙醇 、 石油醚 、 醋酸乙酯 、 硝酸铝 、 亚硝酸钠 、
氢氧化钠等均为分析纯。
1.2主要仪器
JA5033型电子分析天平(上海恒平科学仪器有
限公司);725N型紫外可见光分光光度计(上海科
学精密仪器有限公司);101-1B型电热鼓风干燥箱
(上海实验仪器厂);RE-52AA型旋转蒸发器(上海
雅荣生化设备仪器有限公司)。
2　方法与结果
2.1线性考察
精密称取 120℃下干燥至恒重的芦丁对照品
15.00mg, 置于 100mL容量瓶中 , 加 75%乙醇适量
溶解后 , 加 75%乙醇定容至刻度 , 摇匀 , 即得每
1mL含无水芦丁 0.15mg的对照品溶液 。精密量取
0.0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0mL芦丁对照品溶
液 , 分别置于 10mL容量瓶中 , 补充 75%乙醇至
5mL, 摇匀;加 5%亚硝酸钠溶液 0.1mL, 摇匀放置
6min;加入 10%硝酸铝溶液 0.3mL, 混匀放置
6min;加入 10%氢氧化钠溶液 4.0mL, 用去离子水
补加至刻度 , 充分摇匀 , 在显色后 15min以芦丁空
白为对照 , 于检测波长 510nm处测定吸光度值。结
果采用最小二乘法 , 以芦丁浓度(C)-吸光度(A)
进行直线回归 , 得标准曲线方程 C=0.090 244A-
0.000 193 6 , 在芦丁浓度为 0.007 5 ～ 0.06mg·mL-1
线性关系良好(r=1.000 0)。
2.2精密度试验
精密量取 0.5, 2.0, 4.0mL芦丁对照品溶液各
3份 , 分别置于 10mL容量瓶中 , 按 “线性考察 ”
项下方法测定吸光度值 , 代入标准曲线方程计算 SD
和 RSD。结果用分光光度法测定不同浓度的芦丁含
量 , 其 SD和 RSD均较小 , 尤其是在高浓度时 , 说
明实验数据精确 , 见表 1。
表 1　芦丁精密度试验
芦丁浓度
/mg·mL-1
吸光度
1 2 3
平均
吸光度 SD/% RSD/%
0.007 5 0.084 0.085 0.085 0.085 7.07×10-4 0.832
0.030 0.335 0.337 0.336 0.336 1.0×10-3 0.298
0.060 0.664 0.664 0.665 0.665 1.22×10-3 0.184
2.3重现性试验
精密量取 0.5, 2.0, 4.0mL芦丁对照品溶液各
·26·
DOI :10.13313/j.issn.1673-4890.2010.03.008
2010年 3月　第 12卷　第 3期 中国现代中药 ModernChineseMedicine Mar.2010　Vol.12　No.3
3份 , 分别置于 10mL容量瓶中 , 分 3组按 “线性考
察 ” 项下方法测定吸光度值 , 计算 SD和 RSD, 结
果显示重现性良好 , 见表 2。
表 2　芦丁标准曲线的重现性试验
芦丁浓度
/mg·mL-1
吸光度
1 2 3
平均
吸光度 SD/% RSD/%
0.007 5 0.086 0.085 0.086 0.086 4.55×10-4 0.53
0.030 0.334 0.336 0.337 0.336 1.74×10-3 0.52
0.060 0.664 0.665 0.667 0.665 1.74×10-3 0.26
2.4稳定性试验
精密量取 0.5, 2.0, 4.0mL芦丁对照品溶液和
1.0mL供试品溶液各 3份 , 分别置于 10mL容量瓶
中 , 芦丁对照品溶液和同一供试样品溶液在反应体
系形成黄酮 -铝盐络合物后 0, 10, 20, 30, 40,
50 , 60, 80, 100, 120min, 按 “线性考察 ” 项下
方法测定其吸光度。结果显示在 30min内稳定性良
好 , RSD=0.12%, 30min后吸光度逐渐下降且变化
明显 , 提示测定宜在反应显色后 30min内进行 , 本
实验选择测定时间为反应显色后 15min。同时吸取
同一供试品溶液 1.0mL分别在制备后 0, 1, 2, 3,
4, 6, 8h, 按 “线性考察 ” 方法测定总黄酮含量 ,
结果RSD=1.84%, 表明供试品溶液在 8h内基本稳
定 , 测定结果无显著变化 。
2.5加样回收率试验
精密量取 5份已测定总黄酮含量的甘木通叶提
取液供试品各 1.0mL, 置于 10mL容量瓶中 , 依次
加入芦丁对照品溶液 0.5 , 1.0 , 2.0, 3.0, 4.0mL,
按 “线性考察” 项下方法测定吸光度值 , 代入标准
曲线方程计算加样回收率与 RSD, 结果见表 3。
表 3　芦丁加样回收试验
编号 加入对照品量 /mg
测定量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/% RSD/%
1 0.075 0.673 1 99.07
2 0.15 0.750 7 101.27
3 0.30 0.913 1 104.77 101.18 2.36
4 0.45 1.044 0 98.93
5 0.60 1.210 0 101.87
注:样品中总黄酮含量均为 0.598 8mg
2.6样品含量测定
取适量甘木通茎 、 叶 , 在 40℃下烘干至恒重 ,
粉碎 , 分别精确称取 5.0g药材粉末放入烧瓶中 , 用
适量石油醚加热回流直至无色 , 弃去石油醚提取液 ,
于温水浴中挥干残留的石油醚 , 然后加 100mL75%
乙醇于 90℃回流提取 1h, 过滤 , 残渣加 100mL75%
的乙醇继续提取 3次 , 合并 4次滤液减压浓缩 , 用
醋酸乙酯萃取 3次 , 萃取液回收醋酸乙酯后转移至
100mL的容量瓶中 , 加 75%乙醇定容即得供试品溶
液 。精密量取甘木通叶与茎的供试品溶液 1.0mL(各
3份)分别置于 10mL容量瓶中 , 按 “线性考察” 项
下方法测定吸光度值 , 代入标准曲线方程计算叶 、
茎中总黄酮的平均含量 , 结果见表 4。
表 4　甘木通叶与茎的总黄酮含量
样品 吸光度 平均吸光度
黄酮浓度
/mg·mL-1
黄酮含量
/mg·g-1
叶 0.666 0.666 0.665 0.665 7 0.598 8 11.976
茎 0.551 0.550 0.550 0.550 3 0.494 7 9.894
甘木通叶 、 茎中总黄酮含量分别为 11.976mg·
g-1(1.20%)与 9.894mg·g-1(0.99%), 尽管叶比茎
的总黄酮含量高出约 21%, 但二者均可入药。
3　讨论
大量研究表明黄酮类化合物因具有扩张冠状动
脉 、降血压 、降血脂 、抑制血小板聚集 、 降低血管脆
性 、抗菌 、抗癌等作用而引起人们的高度重视[ 2] 。分
析测定黄酮类化合物的方法有许多 , 而目前应用最广
的方法仍是 HPLC法和分光光度法。HPLC法具有分
离效率高 、分析速度快 、检测灵敏度高等优点 , 但设
备昂贵 、操作要求高。采用反相 HPLC法时由于黄酮
类化合物未解离的羟基与固相作用较强而导致拖尾 ,
加酸虽然可以克服拖尾现象 , 但是酸对仪器具有腐蚀
性 [ 3] 。分光光度法根据黄酮类化合物与 Al3+络合显
色的原理进行分析测定 , 所用设备简单 、操作容易 ,
特别适合测定总黄酮的含量 [ 4-5] 。
用甘木通药材生产制剂时是茎 、 叶混合提取 ,
但甘木通确切的有效部位尚不明确 , 以甘木通中的
有效成分黄酮类化合物为检测指标 , 本实验采用分
光光度法测定甘木通叶与茎中总黄酮类化合物的含
量分别为 1.12%和 0.99%, 尽管叶中总黄酮含量比
茎高出 21%, 但是比较接近 , 说明茎 、 叶均可入
药 , 并可以混合在一起提取。此外 , 本实验的精密
度试验和回收率试验均较好 , 在甘木通确切的有效
成分尚不明确而缺乏质量控制标准的情况下 , 该方
法暂可用于甘木通药材及其制剂的质量控制。
参考文献
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的药理研究进展 [ J] .中药材 , 2003, 26(1):46-54.
(下转第 42页)
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2010年 3月　第 12卷　第 3期 中国现代中药 ModernChineseMedicine Mar.2010　Vol.12　No.3
　　川芎的价格从 2002年 1月的 3.4元一直以波动
的方式一直上升到 2006年 8月的 24元左右 ,然后大
趋势下跌逐渐波动到 2009年 10月的 17元左右。在
市场价和短线的对比上 ,市场价于 2005年 1月到
2006年 9月高于短线。在 1996年 1月左右 ,市场价
线和短线 、长线交汇 ,随后在较长一段时间内市场价
格线高于短线 ,短线高于长线 ,市场价大趋势上升 ,在
2009年底附近 ,从动向线动量线指标在 0轴上方呈
上升趋势 ,反映市场信心 ,价格走势看好 。
4　川芎价格趋势预测
结合川芎的基本情况分析和技术解读 ,川芎的库
存减少 。 2009年大买家因没买彭州片区新货 ,消化
了一些存货 , (全国 2010年 1月库存比 2009年同期
少约 3 000 t),产地彭山的川芎的死苗率较高 ,而且
由于川芎的种植面积大规模减少 (统建点 、川西大
道 、天然气管道占用川芎田),总产量低于 2009年川
芎总产量。市场和产地的不少商家对川芎的未来行
情看好 ,从抚芎的价格来看 ,目前鲜抚芎的价格为
3.5元左右 , 而 2009年抚芎的价格为 1.5元左右。
结合长线 、短线 、动量线 、动向线等技术指标 ,如果没
有不可抗力因素 ,川芎的价格将可能在未来较长一段
时间内有较好上涨的趋势 。
(上接第 27页)
[ 3] 赵晓莉 , 岳红 .黄酮类化合物分析方法概述 [ J] .盐湖研
究 , 2005, 13(2):34-38.
[ 4] 魏永生 , 王永宁 , 石玉平 , 等 .分光光度法测定总黄酮含
量的实验条件研究 [ J] .青海大学学报(自然科学版),
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酮的含量 [ J] .辽宁大学学报 , 2005, 32(2):101-104.
(收稿日期　2009-10-20)
DeterminationofTotalFlavonoidsContentsfromLeavesandStemofClematisFilamentosaDunn
HuZongli, HuangXiaoping, ChenJunxia
(YingdongSchoolofBioengineering, ShaoguanUniversity, ShaoguanGuangdong512005, China)
[ Abstract] 　Objective:TodeterminatethecontentsoftotalflavonoidsfromleavesorstemofClematis
filamentosaDunn.Methods:ThetotalflavonoidsfromClematisfilamentosaDunnwereextractedwith75%alcoholat
90℃.Takingrutinascomparisonproducttomakestandardcurve, thecontentofflavonoidswasdeterminatedby
spectrophotomertywiththedetectionwavelengthof510nm.Results:RegressionequationwasC=0.090 244A-
0.000 193 6 (r=1.000 0).Thelinearconcentrationwasintherangeof0.007 5 ～ 0.060mg·mL-1 forrutin.The
averagerecoverywas101.18%, RSDwas2.36% (n=5).Theaveragecontentsoftotalflavonoidsfromleavesor
stemofClematisfilamentosaDunnwere1.20% and0.99% respectively.Conclusion:Thetotalflavonoidscontent
fromleavesofClematisfilamentosaDunnwashigherover21% thanonefromtheirstem
[ Keywords] 　ClematisfilamentosaDunn;Totalflavonoids;Spectrophotomerty
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