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木芙蓉叶的质量标准研究



全 文 :中国药房 2012年第23卷第11期 China Pharmacy 2012Vol.23No.11
木芙蓉叶为锦葵科植物木芙蓉Hibiscus mutabilis L.的干
燥叶,收载于《中华人民共和国卫生部药品标准中药材》(第一
册),其味微辛,性凉,归肺、肝经,具有清肺凉血、散热解毒、消
肿排脓等功效,临床主要用于肺热咳嗽、瘰疬、肠痈、痈疖脓
肿、脓耳、无名肿毒、烧烫伤等的治疗[1]。木芙蓉叶主要化学成
分为黄酮苷(包括芦丁、山柰酚 -3-O-β- 芸香糖苷、山奈
酚-3-O-β-刺槐双糖苷等)、酚类、氨基酸、鞣质、还原糖和甾类
化合物[2,3],其中黄酮苷是其主要活性成分。目前,木芙蓉叶的
质量标准较简单,无鉴别、含量测定项,为了更好地开发利用
这一植物资源,笔者对其质量控制方法进行研究,制订了木芙
蓉叶定性、定量测定方法。
1 仪器与试药
1100Series高效液相色谱(HPLC)仪(美国Agilent公司);
CP224S 精密分析天平(德国 Sartorius 公司);KQ-300DA 超声
波清洗器(功率:300W,频率:40kHz,昆山市超声仪器有限公
司);BX-41生物显微镜(日本Olympus公司)。
芦 丁 对 照 品(中 国 食 品 药 品 检 定 研 究 院 ,批 号 :
100080-20 707,供含量测定用,含量:90.5%)。木芙蓉叶6批,
分别采自广东省广州市、清远市及购自广州清平药材市场,经
笔者鉴定为锦葵科植物木芙蓉H. mutabilis L.的干燥叶。
2 方法与结果
2.1 显微鉴别
取木芙蓉叶,粉碎后过四号筛,取适量置显微镜下观察:
本品粉末灰绿色。非腺毛众多,壁木化,为星状毛或簇生毛,
2~35分枝,每分枝为单细胞,有的从分枝基部处碎断。腺毛
有2种,短柄腺毛近无色,头部由3~4个细胞组成,柄单细胞;
长柄腺毛鲜黄色,头部单细胞,柄15~24个细胞,近基部的细
胞多扁圆状。下表皮细胞垂周壁略呈波状弯曲,气孔不定
式。大型黏液细胞散布于叶肉组织中,内含草酸钙簇晶或方
晶。草酸钙簇晶多见,直径10~33µm。木芙蓉叶粉末显微特
征见图1。
2.2 薄层色谱(TLC)鉴别
取6批木芙蓉叶粉末,每批各1g,加50%甲醇溶液20
mL,超声30min,放凉,摇匀,过滤,取续滤液作为供试品溶液;
木芙蓉叶的质量标准研究
林锦锋1*,曾超贤2,符同浩1(1.广东省药品检验所,广州 510180;2.广州康臣药业有限公司,广州 510530)
中图分类号 R284.2;R282 文献标志码 A 文章编号 1001- 408(2012)11- 025-02
DOI 10.6039/j.issn.1001- 408.2012. 1.25
摘 要 目的:建立木芙蓉叶的质量标准。方法:采用显微鉴别、薄层色谱(TLC)法对木芙蓉叶进行定性鉴别;采用高效液相色谱
法对药材中有效成分芦丁进行含量测定。结果:木芙蓉叶显微特征明显;TLC斑点清晰、分离度好;芦丁进样量在0.018~0.9412μg
(r=0.9996)范围内与峰面积积分值呈良好线性关系,平均加样回收率为97.97%,RSD=1.97%(n=6)。结论:所建标准可用于木
芙蓉叶的质量控制。
关键词 木芙蓉叶;芦丁;质量控制;显微鉴别;薄层色谱法;高效液相色谱法
Study on Quality Standard of Hibiscus mutabilis
LIN Jin-feng,FU Tong-hao(Guangdong Institute for Drug Control,Guangzhou 510180,China)
ZENG Chao-xian(Guangzhou Consun Pharmaceutical Co.,Ltd.,Guangzhou 510530,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish the method for the quality control of Hibiscus mutabilis. METHODS:Microscopic identi-
fication,TLC and HPLC were used to identify H. mutabilis quantitatively. HPLC method was adopted to determine the content of
active component rutin. RESULTS:Microscopic characteristics of H. mutabilis was distinguishing. TLC spots were clear and
well-separated. The linear range of rutin was 0.018~0.9412μg(r=0.9996)with an average recovery rate of 97.97%(RSD=
1.97%,n=6). CONCLUSION:The etablished standard can be used to control the quality of H. mutabilis.
KEY WORDS Hibiscus mutabilis;Rutin;Quality control;Microscopic identification;TLC;HPLC
*主管中药师,硕士。研究方向:中药质量分析。电话:020-
81886161。E-mail:linchina@163.com
图1 木芙蓉叶粉末显微特征
Fig 1 Microscopic characteristics of H. mutabilis power
1.非腺毛;2.短柄腺毛;3.长柄腺毛;4.下表皮细胞和气孔;5.黏液细胞
(内含草酸钙簇晶);6.草酸钙簇晶
1.non-glandular hair;2.short stipitate glandular hair;3.long stipitate glan-
dular hair;4.abaxial epidermal cells and stomata;5.mucous cells;6.drus-
es of calcium oxalate
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China Pharmacy 2012Vol.23No.11 中国药房 2012年第23卷第11期
取芦丁对照品1mg,加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作
为对照品溶液。吸取上述溶液各2μL,分别点于同一聚酰胺
薄膜上,以乙酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶3∶1)为展开剂,展开,取出,
晾干,喷以5%三氯化铝乙醇溶液,105℃加热约5min,置紫外
光灯(365nm)下检视。结果,供试品色谱中,在与对照品色谱
相应的位置上,显相同颜色的
荧光斑点。木芙蓉叶的TLC见
图2。
2.3 含量测定
2.3.1 色谱条件与系统适用性
试验 色谱柱:Dikma Diamon-
sil C18(250mm×4.6mm,5μm);
柱温:30℃;流动相:甲醇-1%
冰醋酸溶液(35∶65);流速:1
mL·min-1;检测波长:257nm;
进样量:10μL。在此条件下,
芦丁能与其他组分的色谱峰达
到基线分离,与其邻近色谱峰
的分离度>1.5,理论板数按芦
丁色谱峰计算应在 4000以
上。色谱见图3。
2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品10.4mg,置
于100mL量瓶中,甲醇定容,摇匀,即得每1mL含芦丁0.9412
mg的对照品溶液。
2.3.3 供试品溶液的制备 取木芙蓉叶粉末1g,精密称定,加
50%甲醇溶液50mL,称定重量,浸泡30min后加热回流1h,
放凉,再称定重量,用50%甲醇溶液补足失重,摇匀,滤过,取
续滤液,即得。
2.3.4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液1、1、1、1、2mL,
分别置于50、25、10、5、5mL量瓶中,加甲醇稀释成不同浓度的
对照品溶液,按上述色谱条件进样分析。以芦丁进样量(X)对
峰面积积分值(Y)进行线性回归,得回归方程为Y=2.0×107X-
189379(r=0.9996,n=6)。结果表明,芦丁进样量在0.018~
0.9412μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。
2.3.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10µL,按上述色谱
条件重复进样5次。结果,芦丁峰面积积分值的RSD=1.27%
(n=6),表明仪器精密度良好。
2.3.6 稳定性试验 取同一供试品溶液适量,按上述色谱条
件分别于0、2、4、8、12、24h进样测定。结果,芦丁峰面积积分
值的RSD=1.44%(n=6),表明供试品溶液在24h内稳定性良
好。
2.3.7 重复性试验 分别精密称取同一批木芙蓉叶样品(购
自广州清平药材市场,样品6)适量,按“2.3.3”项下方法制备供
试品溶液,照上述色谱条件测定。结果,RSD=1.72%(n=6),
表明方法重复性良好。
2.3.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的木芙蓉叶样品
(样品6,芦丁含量为2.9312mg·g-1)适量,共6份,分别精密加
入一定量的芦丁对照品,按“2.3.3”项下方法制备供试品溶
液,照上述色谱条件测定芦丁含量,并计算加样回收率,结果
见表1。
表1 加样回收率试验结果(n=6)
Tab 1 Results of recovery test(n=6)
编号
1
2
3
4
5
6
称样量/g
0.502 1
0.504 4
0.502 9
0.502 9
0.503 5
0.501 9
样品含量/mg
1.471 8
1.478 5
1.474 1
1.474 1
1.475 9
1.471 2
加入量/mg
1.429 9
1.429 9
1.429 9
1.429 9
1.429 9
1.429 9
测得量/mg
2.871 7
2.852 8
2.882 3
2.901 6
2.863 1
2.879 6
回收率/%
97.91
96.11
98.48
99.83
97.02
98.50
x/%
97.97
RSD/ %
1.97
2.3.9 样品含量测定 取各木芙蓉叶样品适量,按“2.3.3”项
下方法制备供试品溶液,照上述色谱条件测定,并计算芦丁含
量。结果,6批样品中,芦丁含量最高为2.9312mg·g-1,最低为
0.2998mg·g-1,平均值为1.7807mg·g-1,详见表2。
表2 木芙蓉叶中芦丁含量的测定结果
Tab 2 Content determination of rutin in H. mutabilis
样品编号
1
2
3
4
5
6
样品来源
采自广州
采自广州(嫩叶)
采自广东清远
购自广州清平药材市场
购自广州清平药材市场
购自广州清平药材市场
芦丁含量/mg·g-1
1.277 2
0.299 8
2.295 2
1.899 4
1.981 2
2.931 2
平均含量/mg·g-1
1.780 7
3 讨论
木芙蓉叶的采集时间应为夏、秋二季,而本试验所用的样
品1和样品2采集时间是春季,含量与其他样品相比明显偏
低。尤其是样品2,因是刚长出的嫩叶,其含量仅约为平均
含量的1/6。样品3为夏季采收,其含量明显高于样品1和
样品2。
购自市场的3批样品均含有不同程度的叶柄,试验中曾试
将样品4、5、6的叶柄单独进行芦丁的含量测定,结果均大大低
于叶片的含量,其平均含量为0.3394mg·g-1,这在一定程度上
支持了其药用部位应为叶片这一传统习惯。
综上,本研究所建标准可用于木芙蓉叶的质量控制。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫
生部药品标准中药材(第一册)[S].1992:16.
[2] 江苏新医学院.中药大词典(上册)[M].上海:上海科学技
术出版社,1986:371-372.
[3] 姚莉韵,陆 阳,陈泽乃.木芙蓉叶化学成分研究[J].中草
药,2003,34(3):201.
(收稿日期:2011-07-22修回日期:2011-09-05)
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图2 木芙蓉叶的TLC
1~6.木芙蓉叶;7.芦丁对照品
Fig 2 TLC of H. mutabilis
1~6. H. mutabilis;7.lutin control
0 10 20 30 40 50min
A
0 10 20 30 40 50min
B
图3 高效液相色谱图
A.芦丁对照品;B.木芙蓉叶样品
Fig 3 HPLC chromatograms
A. lutin control;B. sample of H. mutabilis
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