全 文 ：大孔树脂富集纯化岗梅根中总皂苷的研究
冯达星1　余楚钦2　钟　鸣3
(1.广州市白云区中医院　广东 广州 510450;2.广东药学院药物研究所　广东 广州 510240;
3.广州汉方现代中药研究开发有限公司　广东 广州 510240)
摘　要　目的:研究大孔树脂富集 、纯化岗梅根总皂苷的工艺条件及参数。方法:以岗梅根总皂苷的洗脱率和精制度为指标
考察了大孔树脂富集 、纯化岗梅根总皂苷的吸附性能和洗脱参数。 结果:岗梅根提取液 47.3 mL上柱 , 依次用 100 mL蒸馏水
洗去水溶性杂质 , 100 mL 70%乙醇洗脱总皂苷 , 总皂苷富集在 70%的部分 , 且去除杂质的能力强。结论:通过大孔树脂富集与
纯化后的总皂苷洗脱率在 90%以上 , 纯化后总固型物中岗梅根总皂苷含量为 62.98%。采用此法可以较好地纯化岗梅根总皂
苷。
关键词　大孔树脂;岗梅根总皂苷;纯化
中图号　R 284.2　文章编号:1006-8783(2004)03-0218-03　文献标识码:A
Study on purification process of total saponin of radix ilicis asprellae with macroreticular resin
FENG Da-xing1 ,YU Chu-qin2 , ZHONG Ming3
(1.TCM Hospital of BaiYunDistrict , Guangzhou ,Guangdong 510450;2.Institute of materiaMedica , GuangdongCollege of Pharmacy ,
Guangzhou ,Guangdong 510240;3.GuangZhou Hangfang NaturalMedicine Research &Development Co., Ltd .Guangzhou ,Guangdong
510240)
Abstract　Objective:to study the technological conditions and parameters of the purification process of total saponin of Radix Ilicis
Asprellae with macroreticular resin.Methods:the adsorptive characteristics and elusive parameters of the process were studied by taking
the elusive and purified ratio of total saponin as reference.Results:47.5mL of the extractive of Radix IlicisAsprellae was purifiedwith
a column of macroreticular resin and washedwith 100 mL of distilledwater , then elutedwith 100 mL of 70%ethanol.Conclusions:with
macroreticular resin to adsorb and purify , the elusive ratio of total saponin was above 90% and the purity reached 62.98%.So
theapplying of macroreticular resin to adsorb and purify total saponin of Radix Ilicis Asprellae is feasible.
Key words　macroreticular resin;saponin;radix ilicis asprellae;purification
作者简介:冯达星 , 男 , 34 岁 ,大学本科 , 主管中药师。
研究方向:中药提取分离。
　　岗梅根系冬青科植物梅叶冬青 Ilex asprella
(Hook.et Arn.)Champ.ex Benth.的根 , 主要产于广
东 、广西 。其性味苦寒 ,主治功用为清热解毒 、生津
活血 ,治热病 、燥渴 、热泻 、咳血 、喉痛等 ,有增加豚鼠
冠脉流量 、加强心肌收缩力等作用[ 1] 。临床报道岗
梅根还可以防治各种感染 。岗梅根常作为药茶的原
料 ,也常制成多种单方或复方制剂 ,其主要成分是皂
甙 、甾体和生物碱[ 2] 。
大孔吸附树脂为一种有机高聚吸附剂 ,具有选
择性吸附有机化合物的能力 ,应用于皂苷类成分的
富集纯化有较好的效果 ,但其吸附性能及其解吸 、纯
化条件参数因化合物的理化性质的不同而不同[ 3] 。
本实验旨在探讨 LSA-20型大孔树脂富集 、纯化药材
岗梅根中总皂苷的工艺条件与参数 。
1　仪器与试药
UV-1601型紫外分光度仪(日本岛津),岗梅根(白
云区中医院药房提供),人参皂苷 Re对照品(中国药
品生物制品检定所),大孔吸附树脂(LSA-20型 ,西安
蓝深交换吸附材料有限公司), 香草醛(AR)、高氯酸
(AR)、冰醋酸(AR)、φ=乙醇95%(食用级)。
2　方法与结果
2.1　含量测定
2.1.1　线性关系考察　精密吸取人参皂苷 Re 对照
品溶液(1.1 mg/mL)10 、40 、80 、120 、160 μL 于比色管
中 ,热风挥干 ,精密加入 5%香草醛—冰醋酸溶液 0.
2 mL 和高氯酸 0.8 mL ,摇匀 ,60 ℃水浴加热 15 min ,
冰水浴中冷却5 min ,加冰醋酸5mL ,摇匀 、以试剂作
空白对照 ,于 554 nm处测定吸收值。经统计分析得
回归方程为:A =3.878 ×10-3ρ-2.17510-3 , r =
0.9999。ρ在 11 ～ 176 μg/mL内呈良好的线性关系 。
218
第 20卷第 3期 广　东　药　学　院　学　报 Vol.20 No.3
2004年 6月 ACADEMIC JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY Jun.2004
2.1.2　岗梅根样品溶液的制备和岗梅根总皂苷的
含量测定　岗梅根粉碎成粗粉 ,用 90%乙醇回流提
取 ,过滤 ,回收乙醇适量 ,水浴蒸发至无醇味 ,加蒸馏
水适量 ,冰箱放置 24 h 后。先用离心机进行离心 ,
然后过滤 ,得岗梅根样品液(每 mL 含生药 0.4 g)。
精密吸取 10 mL 于分液漏斗中 ,用水饱和正丁醇萃
取3次 ,每次 10 mL ,合并萃取液 ,水浴蒸干 ,甲醇定
容至5 mL 作为供试品溶液 ,精密吸取供试品溶液
0.2 mL蒸干 ,以下同“2.1.1”项下测定方法进行操
作。岗梅根样品液的总皂苷含量为 7.632 mg/mL。
2.2　工艺参数的考察与优化
2.2.1　大孔吸附树脂的预处理 、装柱和再生
预处理和装柱:将树脂装入吸附柱中 ,并保持 φ
=95%乙醇面高出树脂表面约 10 mm、浸泡 。用 φ
=95%乙醇洗涤树脂层 ,直到流出液加 2倍蒸馏水
不呈白色浑浊 ,用蒸馏水继续洗到无醇味即可 。再
生:用 φ=95%乙醇洗涤用过的树脂 ,直到洗脱液近
无色 ,用蒸馏水洗涤树脂层至无醇味 ,必要时用 1 ～
2倍树脂体积的 4%NaOH溶液洗涤树脂层 ,用蒸馏
水洗至 pH7 ,即可进行下一周期的使用。
2.2.2　洗脱溶媒的选择
精密吸取岗梅根提取液 50 mL(每 mL 含 0.4 g
生药)上柱 、依次用蒸馏水 200 mL ,30%乙醇 、50%乙
醇 、70%乙醇 、95%乙醇各 100 mL洗脱 ,每 25 mL为
1份 ,测定总皂苷含量和纯度 ,结果总皂苷主要集中
在 30%～ 70%乙醇的洗脱液中 ,占全部醇洗脱液中
总皂苷的 90.8%。由于 30%乙醇洗脱液中 ,其总皂
苷的浓度远较50%和 70%乙醇低 ,而50%和 70%乙
醇中浓度差不多 、但 70%乙醇洗脱速度较快 。95%
的乙醇洗脱液的纯度较低 ,只有 30%～ 40%,是因
其含有较多的脂溶性成分。因此 ,优选洗脱的条件
为先用蒸馏水洗涤 ,后用 70%乙醇洗脱总皂苷 ,收
集 70%乙醇洗脱部分 , 最后用 95%的乙醇再生树
脂 。
2.2.3　吸附容量的确定
吸取岗梅根样品液 50 mL ,上样 ,预吸附 2 h 、过
柱(树脂体积 10 mL)流出液重吸附 1 次 ,收集药液 ,
流速 1.5 mL/min ,用 200 mL 蒸馏水洗涤 ,流速约 3
mL/min ,合并药液和洗涤液 ,平行 3 份。样品液和
上样合并液总皂苷的含量按“2.1.2”项下测定方法
测定 ,并计算吸附容量 ,结果见表 1。
表 1　样品液总皂苷含量及吸附容量的测定
Tab.1　Total saponin of sample and absorption of resin
样品液总皂苷
(m/ mg)
上样合并液
总皂苷(m/mg)
x
(m/mg) RSD/ %
树脂吸附总量
(m/mg)
树脂吸附容量
(ρ/mg·mL)
381.6 20.8
381.6 19.2 20.4±1.1 5.38 361.2 36.12
381.6 21.3
2.2.4　洗脱溶媒量的确定
根据表1确定的洗脱溶媒和吸附容量来进行实
验 ,吸取样品液(7.632 mg/mL)47.3 mL ,各 3份分别
上柱 ,蒸馏水用量分别为 200 mL(条件 1)、150 mL
(条件 2)、100 mL(条件 3)、70%乙醇200 mL ,依次洗
脱 ,分段收集 ,测定皂苷的含量。70%乙醇部分 10
mL样品液水浴蒸干 ,烘干至恒重 ,计算总固形物重
量和测定总皂苷量 ,见表 2。
表 2　洗脱溶媒用量的确定
Tab.2　Determination of capacity of eluting menstruum
　　　项目 条件 1洗脱量/mg 洗脱率/ %
条件 2
洗脱量/mg 洗脱率/ %
条件3
洗脱量/mg 洗脱率/ %
蒸馏水 16.69 4.62 14.02 3.88 13.27 3.68
1号(100 mL) 316.86 87.78 317.95 88.07 319.97 88.63
70%的乙醇 2号(50 mL) 7.83 2.17 8.67 2.40 10.66 3.95
3号(50 mL) 2.13 0.59 2.24 0.62 2.49 0.69
总固形物(m/mg) 524.61 526.18 527.92
总固形物中总皂苷含量(ω/ %) 62.3 62.5 63.1
　　从表 2可知 、随着蒸馏水用量的依次增加 、3种
洗脱条件所得总固形物中总皂苷含量无明显差异 ,
故确定蒸馏水用量为 100 mL。而前 100 mL φ=
70%乙醇洗脱率近 90%,后 100 mL 洗脱率为 2%～
219
第 3期　冯达星 ,等.大孔树脂富集纯化岗梅根中总皂苷的研究
5%,所以确定 φ=70%乙醇的用量为 100 mL。
2.2.5　精制程度考察
根据上述结果 ,按最佳条件 ,精密吸取岗梅根样
品液 47.3mL 上柱 ,依次用 100mL 蒸馏水洗去水溶性
杂质 ,100mL 70%乙醇洗脱总皂苷 ,收集 70%乙醇洗脱
液 ,平行3份。测定 100 mL 70%乙醇洗脱液中总皂苷
量 ,岗梅根上柱前样品液与 70%乙醇洗脱液分别水浴
蒸干 ,烘干至恒重 ,计算总固形物 ,结果见表 3。
表 3　精制程度考察结果
Tab.3　Purified ratio of total saponin
　项　目 实验 1 实验 2 实验 3 平均值
上柱前药液的总固型物(m/g) 6.805 6.792 6.797 6.798
上柱前药液的总皂苷(m/mg) 355.75 360.54 366.65 360.98
上柱前药液的总皂苷(ω/ %) 5.23 5.31 5.39 5.31
70%乙醇的总固型物(m/mg) 512.17 508.29 512.92 511.13
70%乙醇的总皂苷(m/mg) 325.23 323.78 316.83 321.95
70%乙醇的总皂苷(ω/ %) 63.50 63.70 61.77 62.98
精制度/倍 11.96 12.00 11.63 11.86
3　讨 论
岗梅根药材 φ=90%乙醇提取物中皂苷类成分
含量约 5%,富集 、分离 、纯化存在一定的困难 。本
实验尝试了大孔树脂吸附法 ,纯化前总固形物中岗
梅根总皂苷含量为 5.3%,纯化后总固形物中岗梅
根总皂苷含量为 62.98%,精制度达 11.86倍。因而
大孔树脂吸附法适宜于岗梅根总皂苷的分离 、纯化
与富集 ,而且具有吸附快 ,解吸率高 、吸附容量大 、洗
脱率高 、树脂再生简便等优点。该方法在分离 、纯
化 、富集中药材的有效成分方面具有一定的推广价
值 。
参考文献
[ 1] 李敏华 , 俞世杰 ,杜上监 , 等.岗梅根化学成分的研究[ J] .
中草药 , 1997 , 28(8):454.
[ 2] 王宁生 , 冯美蓉 ,赵萍 , 等.岗梅根化学成分定性鉴别及其
方法的探讨[ J] .广州中医学院学报 , 1991(1):28.
[ 3] 侯世样 , 田恒康.大孔吸附树脂在中药复方分离纯化工艺
中的应用[ J] .中药新药与临床药理 , 2000 , 11(3):131.
(2004-03-09 收稿;2004-04-06修回)
(上接第 215页)
3.2　在摇瓶培养过程中 ,振荡频率对菌丝体的生长
也有很大的影响。振荡频率过慢菌球形成数量少 ,
导致单个菌球长势过大 ,菌球中间出现中空状态 ,而
且出现菌丝体自溶现象 ,另一方面培养基内的溶解
氧减少影响菌丝生长 ,结果菌丝体产量降低。振荡
频率过快 ,培养基容易飞溅到棉塞上引起污染 ,造成
不必要的人力 、物力等的浪费 。
3.3　用正交实验方法筛选出了菌丝体生长发育的
浓度和培养基的配方 。适合桑黄菌丝体发酵培养的
培养基配方为:玉米粉5%,麸皮 3%,磷酸二氢钾 0.
3%、硫酸镁 0.15%,维生素 B1 20 μg/100 mL 、维生
素B2 30 μg/100 mL;最适合菌丝体生长发育的理化
因子为:摇瓶发酵的适宜温度为 26 ℃,摇瓶转数为
130 r/min ,pH值为 6.5 ,接种量 15%～ 20%,摇瓶装
液量为 500 mL 装140 mL ,发酵时间为 7 d ,液体种子
的培养时间为 5 d 。
3.4　本实验的结果表明利用液体发酵技术 ,不仅能
在短期内能获得大量的桑黄的菌丝体 ,而且周期短 ,
不受季节和环境的限制。为工业化生产菌丝体提供
了依据。为进一步研究其发酵液的生物活性奠定了
基础 ,且可以大幅度地降低桑黄作为新药开发的成
本 。所以采用液体发酵技术生产桑黄菌丝体将是一
种重要的方法 ,具有广阔的前景 。
参考文献
[ 1] 卯晓岚.中国经济真菌[ M] .北京:科学出版社, 1998.535.
[ 2] 卯晓岚 , 蒋长坪.西藏大型经济真菌 [ M] .北京:科学技术
出版社 , 1993.470.
[ 3] 李国俊 , 吴国用 ,崔基成 , 等.裂蹄目层孔菌菌丝培养及其
应用研究[ J] .中国食用菌 , 1998 , 17(5):11.
[ 4] 徐锦堂.中国药用真菌学[ M] .北京:北京协和医科大学 ,
1997.235-252.
[ 5] 盛骤.线性代数与数理统计[ M] .吉林:吉林科技出版社 ,
1998.293-299.
[ 6] 向世华.食用真菌的营养生理[ J] .中国食用菌 , 1990 , 9
(6):9.
[ 7] 乐银 , 邵伟 ,刘庆刚 , 等.猴头菌液体发酵条件的研究[ J] .
中国食用菌 , 1998 , 18(3):32.
[ 8] 刘锡 , 白金剀 ,译.真菌学基础[ M] .北京:科学出版社出
版 , 1989.3-5.
[ 9] 尉晓宇.食用菌酶学应用研究[ J] .中国食用菌 , 1990 , 9
(5):15.
(2004-03-31 收稿;2004-04-20修回)
220
广东药学院学报(ACAD J GCP)　2004 ,20(3)