全 文 ：(N H4 ) 2 C2O4溶液产生 Ca C2O4沉淀 ,在酸性条件下
( pH小于 4) , Ca C2O4溶于水 ,滴加 50%氨水调节
pH5～ 6,置冰箱放置过夜 ,使沉淀析出完全 ,用
0. 1% NH4 C2O4溶液洗涤沉淀 2～ 3次 ,再以水洗至
无 CL离子 ,除去多余的杂质。调节 pH12～ 13前 ,没
有加三乙醇胺 2滴 ,因为草酸高铁盐溶于水 ,已被洗
去。调 pH至硷性时 ,已无絮状沉淀。滤纸炭化不完
全 (有黑色 ) ,不影响滴定结果。滤液中再加草酸铵溶
液已无沉淀 ,样品中钙离子已提取完全。
参考文献
〔 1〕江苏新医药学院编 . 中药大辞典〔M〕 ,下册 ,上海:人民出版社 ,
1977, 1659.
〔 2〕国家药典委员会编 . 中国药典〔 J〕 , 2000年版 ,一部 ,二部 ,北京:
化学工业出版社 .
〔 3〕北京工业大学分析化学编 . 分析化学〔M〕 ,南京:南京大学科技
出版社 , 253.
〔 4〕南京大学分析化学编 .分析化学〔M〕 ,南京: 南京大学科技出版
社 , 320.
比色法测定广枣醇提物中总黄酮的含量
花仲卉 1 ,安雪梅 2 ,王伟内 3 ( 1. 厦门中山医院药学部 厦门 361004; 2. 内蒙医学院第一附属医院 呼和浩特
010059; 3. 蒙古药品检验所 呼和浩特 010020)
摘要: 目的　探讨广枣醇提物中总黄酮的含量测定方法。方法　用紫外分光光度法。 结果　用最小二乘法计算回归方程 Y= 0. 0029+
0. 0106X, r= 0. 9999,线性范围 0. 2～ 1. 2mg,稳定性试验 10min内测得值的 RSD符合试验要求 ,在 10min内完成测定时结果准确。 重现性试验
结果表明重现性良好。结论　广枣醇提物中总黄酮的含量测定用比色法是可行的。
关键词: 广枣 ;总黄酮 ;紫外分光光度法 ;含量测定
中图分类号: R978. 1　文献标识码: B　文章编号: 1006-3765( 2003) 06-0036-03
　　广枣为蒙医习用药材 ,有着悠久用药历史。广枣
以性平、味甘酸 ,用于治疗心疾病症。现代研究认为 ,
广枣可行气、活血、养心、安神 ,用于血瘀、气滞、胸痹
作痛、心悸气短、心神不安〔 1〕。广枣的有效成份为黄
酮类化合物。本文用醇提工艺对广枣中有效成分进
行提取 ,并对醇提物中总黄酮建立了含量测定方法 ,
为醇提物中总黄酮的含量以及动物实验给药剂量提
供了定量依据。
1　仪器和试药
1. 1　仪器　 UV-12-02型可见-紫外分光光度计 (日
本岛津 ) ; UV-250型可见-紫外分光光度计 (日本岛
津 )。
1. 2　试药　芦丁对照品 (中国药品生物制品检定
所 ,批号 090- 9002) ;广枣药材 (内蒙古蒙药采购供
应站购入 ) ; 广枣总黄酮 (自制 ,批号: 000323、
000412、 000421) ;所用试剂均为分析纯。
2　对照品溶液及供试品溶液的制备
2. 1　对照品溶液的制备　称取在 120℃干燥至恒重
的芦丁对照品约 50mg ,精密称定 ,置 25mL容量瓶
作者简介: 花仲卉 ,男 1960年生 , 1982年内蒙古医学院药学系毕业。
副主任药师 ,注册执业药师。 从事临床药学 ,医院制剂工作。 联系电
话: 0592- 2292280
中 ,加甲醇 15mL,置水浴上微热使溶解 ,放冷 ,加甲
醇稀释至刻度 ,摇匀。精密吸取 5mL,置 50mL量瓶
中 ,加水稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对照品溶液。
2. 2　供试品溶液的制备　将供试品研细 ,称取
0. 25g ,精密称取 ,置具塞锥形瓶中 ,加甲醇 35mL,浸
泡约 1h,振摇 ,使充分溶解。滤过置 50mL量瓶中 ,用
甲醇少量多次洗涤锥形瓶及滤纸 ,洗液并入滤液 ,加
甲醇至刻度 ,摇匀 ,得溶液Ⅰ 。精密吸取溶液Ⅰ 20mL
置 50mL量瓶中 ,用水稀释至刻度 ,摇匀 ,即得供试
品溶液。
3　测定波长的选择
图 1　广枣总黄酮测定波长选择的吸收光谱图
A、以 1号溶液做空白测 4号溶液　 B、以 1号溶液做空白测 3号溶液
C、以 3号溶液做空白测 4号溶液　 D、以 1号溶液做空白测芦丁对照品溶液
精密吸取对照品溶液 0. 0和 3. 0mL及供试品
溶液 15. 0和 15. 0mL,分别置 25mL量瓶中 , 4份溶
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海峡药学　 2003年　第 15卷 第 6期
液分别标记为 1、 2、 3、 4号 ,以下操作同标准曲线制
备 ,其中 3号不加 NaOH试液。在 UV-250型可见 -
紫外分光光度计上 ,以吸收度 ( A)为纵坐标 ,波长 (λ)
为横坐标 ,在 370～ 700nm之间绘制吸收曲线 (见图
1)。
由实验确定 ,测定波长为 500nm。 对照品测定
时 ,以 1号溶液为空白 ,测定 2号溶液曲线吸收度
值 ;供试品测定时 ,以 3号溶液为空白 ,测定 4号溶
液的吸收度值。
4　标准曲线的制备
精密吸取对照品溶液 0. 0、 1. 0、 2. 0、 3. 0、 4. 0、
5. 0、 6. 0mL, 分别 置 25mL 量瓶 中 ,各 加水 至
6. 0mL,加 5% NaNO2 ,溶液 1. 0mL,使混匀 ,放置
6min,加 10% Al ( NO3 ) 3 ,溶液 1. 0mL,摇匀 ,放置
6min,加 NaOH试液 10mL,加水至刻度 ,摇匀 ,放置
15min,在 500nm处测定吸收度值。 以吸收度 ( A)为
纵坐标 ,浓度 ( C)为横坐标 ,绘制标准曲线〔2〕 (见图
2)。
图 2　 T FC中总黄酮测定标准曲线
　　浓度 ( C)及测得相应吸收度 ( A)如下:
C(μg· mL- 1 )　 8　 16　 24　 32　 40　 48
A　 0. 088　 0. 171　 0. 255　 0. 346　 0. 427
用最小二乘法计算回归方程: Y= 0. 0029+
0. 0106X, r= 0. 9999( Y代表吸收度 , X代表浓度 ) ,
线性范围: 0. 2～ 1. 2mg。
5　精密度试验
5. 1　对照品溶液精密度　精密吸取对照品溶液
0. 0mL和 8份 3. 0mL,以下操作同标准曲线制备 ,
结果 (见表 1)。
5. 2　供试品溶液精密度　精密吸取供试品溶液
10. 0m L9份 ,以下操作同标准曲线制备 ,其中 1份不
加 NaOH试液作空白 ,结果 (见表 1)。
表 1　精密度试验结果
序号 1 2 3 4 5 6 7 8 RSD(% )
对照品 A 0. 251 0. 249 0. 25 0. 250 0. 25 0. 251 0. 251 0. 250 0. 302
供试品 A 0. 281 0. 280 0. 282 0. 279 0. 280 0. 281 0. 279 0. 280 0. 369
6　稳定性试验
精密吸取供试品溶液 10mL两份 , 1份不加
NaOH试液作为空白 ,以下操作同标准曲线制备 ,间
隔一定时间测吸收度 ,结果 (见表 2)。
表 2　供试品的稳定性试验结果
时间 ( min) 0 5 10 15 20 10min内
RSD(% )
20min内
RSD(% )
吸收度 ( A) 0. 281 0. 280 0. 279 0. 277 0. 274 0. 36 0. 61
含量 (% ) 3. 89 3. 88 3. 86 3. 83 3. 79 0. 39 0. 70
　　从表中数据可知 , 10min内测得值的 RSD符合
试验要求 ,认为在 10min内完成测定时结果准确。
7　重现性试验
按“供试品溶液的制备”的方法 ,制 5份供试品
溶液 ,各精密吸取 10. 0mL两份 ,以下操作同标准曲
线制备 ,其中 1份不加 NaOH试液作为空白 ,测每一
份的吸收度并计算含量 ,结果表明重现性良好 (见表3)。
表 3　供试品溶液的重现性试验
序号 称样量 ( g ) 吸收度 ( A) 含量 (% ) RSD(% )
1 0. 4995 0. 281 3. 37
2 0. 4993 0. 280 3. 37 0. 33
3 0. 5004 0. 281 3. 35
4 0. 5007 0. 281 3. 38
5 0. 5013 0. 280 3. 37
8　加样回收率试验
将供试品研细 ,称取约 0. 12g ,精密称定 ,精密加
入对照品约 4. 0mg ,以下操作同供试品含量测定 ,结
果 (见表 4) ,平均回收率为 98. 9% , RSD为 0. 35%。
表 4　加样回收率试验 (供试品批号 000323)
序号
称样量
( g )
供试品中含
总黄酮 ( mg )
测得总黄
酮 ( mg )
对照品加
入量 ( mg )
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
1 0. 1198 4. 04 7. 94 3. 96 98. 5
2 0. 1203 4. 05 8. 06 4. 06 98. 8
3 0. 1234 4. 06 8. 19 4. 06 99. 3 98. 9 0. 35
4 0. 1200 4. 04 8. 05 4. 06 98. 8
5 0. 1199 4. 04 8. 07 4. 06 99. 3
9　供试品含量测定
将供试品研细 ,称取约 0. 25g ,精密称定 ,按“供
试品溶液制备”方法制备供试品溶液 ,精密吸取对照
品溶液 0. 0和 3. 0mL,及供试品溶液 10. 0mL两份。
以下操作同标准曲线制备 ,其中 1份不加 NaOH试
液的供试品溶液作空白 ,在 10min内测定吸收度。在
实验的线性范围内 ,用两点法计算含量 ,结果 (见表
5)。
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Strai t Pharmaceutical Journal Vo l 15 No. 6 2003
表 5　供试品含量测定结果
批号 称样量 ( g ) 含量 (% ) 平均含量 (% ) RSD(% )
0. 2498 3. 36
000323 0. 2487 3. 38 3. 37 0. 34
0. 2507 3. 36
0. 2513 3. 86
000412 0. 2512 3. 90 3. 90 0. 68
0. 2535 3. 91
0. 2540 3. 89
000421 0. 2520 3. 88 3. 90 0. 53
0. 2496 3. 92
10　讨论
10. 1　在测定供试品溶液的吸收度时 ,以同法操作
只是不加 NaOH试液的一份供试品溶液作为空白 ,
以消除背景颜色及溶剂颜色对测定的干扰。
10. 2　本文测得的是广枣醇提物中总黄酮的含量 ,
以芦丁作为对照品 ,计算总黄酮相当于芦丁的百分
含量 ,其中二氢黄酮类在测定中也能与 Al3+ 络合 ,络
合产物的颜色为蓝绿色〔3〕 ,在本实验的测定波长
500nm处没有吸收 ,不能被检测出来。
参考文献
〔1〕国家药典委员会编 .《中华人民共和国药典》 ,北京:化学工业出版
社 , 2000年版一部〔 J〕 , 32.
〔2〕国家药典委员会编 .《中华人民共和国药典》 ,北京:化学工业出版
社 , 2000版一部〔 J〕 , 291.
〔 3〕姚新生主编 .《天然药物化学 》第二版〔M〕 ,北京: 人民卫生出版
社 , 1997, 199.
乙酰螺旋霉素标准品 4个组分的百分含量总和商榷
卢文斌 (泉州市药品检验所 泉州 362000)
摘要:目的　采用高效液相色谱法测定乙酰螺旋霉素标准品 4个组分的百分含量总和。 方法　采用 ZORBAX SB-C18柱 ( 4. 6mm× 250mm,
5μm);流动相为乙腈 -0. 1mol· L- 1醋酸铵溶液 ( 60∶ 40)用醋酸调节 pH值至 7. 2± 0. 1;流速 1. 0m L· min- 1,检测波长 232nm;进样量 10μL。结
论　用标准品在药典规定色谱条件下测定 P1代入公式中计算样品 P值与实际更接近 ,结果更准确。
关键词: 高效液相色谱法 ;乙酰螺旋霉素标准品 ; 4个组分的百分含量
中图分类号: R978. 1　文献标识码: A　文章编号: 1006-3765( 2003) 06-0038-03
　　乙酰螺旋霉素对金葡菌、表皮葡萄球菌和链球
菌属的抗菌活性与红霉素相似。对淋球菌、脑膜炎球
菌、流感杆菌、百日咳杆菌、白喉杆菌以及支原体等
也有较强的抑制作用。 主要成分为单乙酰螺旋霉素
Ⅱ 、单乙酰螺旋霉素Ⅲ 、双乙酰螺旋霉素Ⅱ、双乙酰
螺旋霉素Ⅲ等 4个组分。 中国药典乙酰螺旋霉素
片〔 1〕检查项目乙酰螺旋霉素组分测定过程中 ,标准
品标示 4个组分的百分含量总和 (简称为 P)为
90. 2% ,标准品在药典规定色谱条件下实际测定的
四个组分的百分含量总和 (简称为 P1 )平均为
72. 7% 。通过对 3个厂家 3批乙酰螺旋霉素片中乙
酰螺旋霉素组分测定 ,分别用 P和 P1代入公式计
算 ,实验如下。
1　仪器与试剂
1. 1　仪器　 Agi lent LC1100高效液相色谱仪包括:
真空脱气机 ,四元梯度泵 ,自动进样器 ,二级阵列检
测器 ( DAD检测器 ) , Agilent Chemistation数据处
理系统 (美国 Agilent公司 )。
作者简介:卢文斌 ,男 , 1965年出生。主管药师 ,从事药物分析与检验。
联系电话: 0595- 2128206
1. 2　试剂　乙酰螺旋霉素标准品由中国药品生物
制品检定所提供 ,醋酸铵、醋酸为分析纯 ,乙腈为色
谱纯 ,重蒸馏水 ,样品 (市售 )。
2　色谱条件
色谱柱: ZO RBAX SB-C18柱 ( 4. 6mm× 250mm ,
5μm);流动相为乙腈 - 0. 1mol· L- 1醋酸铵溶液 ( 60
∶ 40)用醋酸调节 pH值至 7. 2± 0. 1;流速 1. 0mL·
min- 1 ,检测波长 232nm;进样量 10μL。
3　实验方法和结果
3. 1　溶液的制备
3. 1. 1　对照品溶液　精密称取乙酰螺旋霉素标准
品约 50mg ,置 50mL量瓶中 ,加流动相溶解并稀释
至刻度 ,摇匀 ,备用。
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海峡药学　 2003年　第 15卷 第 6期