全 文 ：·药理与药化 ·
收稿日期:2006-02-10
核桃仁提取物抗脑衰老作用的实验研究
毕　敏1 ,尹　政2
(1.安徽医科大学附属医院 ,安徽 合肥 230022;
2.安徽省中药研究与开发重点实验室 ,安徽合肥 230039)
　　摘要:目的　比较三种核桃仁提取物的抗衰老作用。方法　颈背皮下注射 5%D-半乳糖(0.5 mL/ d)建
立衰老模型 , 用自制的核桃仁水提物 、乙醇提物 、丙酮提物(4 g/ kg)连续给小鼠灌胃用药 30 d , 并用灌胃生理
盐水组作正常对照。结果　核桃仁丙酮提物能显著提高脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性(P<0.01),
明显提高过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)的活性(P <0.05), 同时能明显减少脑组织中过氧化脂质
(LPO)的形成。结论　核桃仁丙酮提物具有较好的消除自由基 、抗衰老的作用。
　　关键词:核桃仁;抗衰老;过氧化脂质;超氧化物歧化酶;过氧化物酶
　　中图分类号:R285　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1004-2199(2006)03-0035-03
Study on Antiaging Effect of Brain from the Extracts of Semen Juglandis
BI Min
1 , YIN Zheng2
(1.Dept.of Pharmacy , Affiliated Hospi tal of Anhui M edical Unive rsity , Hefei 230022 , China;
2.Anhui Provinc ial Key Laborato ry of R &D of Chinese Medicine , Hefei 230039 , China)
　　Abstract:Objective　To compare ant iag ing ef fect of brain from three ex tracts o f Semen juglandis.
Methods　T he brain aging model w as established by subcutaneous injection o f 5.0 % D-galacto se on the
back near neck of mice(0.5 mL·d-1).The model g roup w as t reated by oral administ rated the ex tracts of
w ater , e thano l and ace tone of Semen juglandisat , respectively , in the amount of 4.0 g daily per ki lo of
body weight fo r 30 day s.The control g roup w as given NS succe ssively fo r 30 day s.Results　The result
show ed that the acetone ex t ract could significantly increase the activi ty o f SOD and w as capable of in-
creased the activit ies of CA T and POD , it could also decrease the contents of LPO in the blood and brain.
Conclusion　It indicated that the acetone ex tract could scavenge oxygen free redicals and have ant iag ing
ef fect.
　　Key words:Semen juglandis;ant iag ing ;lipid peroxides(LPO);supero xide dismutase(SOD);peroxi-
dase(POD)
　　核桃(Jug lans regia L)是胡桃科核桃属多年生
落叶乔木 ,有“木本油料王”之称。自古以来 ,核桃被
公认为是健脑益智 、抗衰老的佳品[ 1 , 2] 。中医认为
它有强肾填精 、补脑益智 、延年益寿之功效;如今 ,市
场也出现很多核桃保健品 。但许多保健食品并没有
从核桃仁的不同成分入手 ,对其补脑作用进行分别
研究的报道 ,因而我们粗提了核桃仁中的三大类成
分 ,从自由基过氧化作用的角度 ,我们利用采用皮下
注射 D-半乳糖建立了小鼠衰老模型对核桃仁三类
物质进行抗脑衰老作用研究 。
1　材料与方法
1.1　药品与试剂　核桃仁水提物 、乙醇提物 、丙酮
提物自制 ,用蒸馏水配成实验所需浓度 ,置于4 ℃备
用;SOD试剂盒由南京建成生物制品研究所提供;
D-半乳糖由上海试剂二厂提供 。
1.2　实验动物　昆明种小鼠 ,体重(20±2)g ,由安
—35—现代中药研究与实践 2006 年第 20 卷第 3 期Resea rch and Prac tice o f Chinese Medicine s
DOI :10.13728/j.1673-6427.2006.03.011
徽省医学检验所提供 ,合格证号为皖医动准字 01
号。
1.3　实验方法　小鼠 50只 ,雌雄各半 ,体重(20±
2)g ,将小鼠随机分为 5 组 ,每组 10只 。 ①正常对
照组 , ②D-半乳糖衰老模型组 , ③④⑤组分别为核桃
仁水提物组 、核桃仁醇提物组和核桃仁酮提物组 。
除第①组外 , 其他四组动物均每日颈背皮下注射
5%D-半乳糖 0.5 mL ,正常组小鼠则颈背皮下注射
生理盐水 0.5mL 。于注射 D-半乳糖的第 10 d ,第③
④⑤组动物分别灌胃(ig)给予核桃仁水提物 4 g ·
kg
-1 、核桃仁醇提物 4 g ·kg-1和核桃仁酮提物 4 g
·kg-1组 ,正常对照组小鼠和衰老模型组动物则每
日 ig 等体积生理盐水。连续用药 30 d。于最后一
天灌胃和注射 D-半乳糖 2 h后 ,眼眶取血 ,肝素抗凝
(4 ℃保存)用于血清中过氧化脂质(LPO)含量的
测定 ,然后断头处死动物 ,取出脑组织制成匀浆用于
过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧
化物酶(POD)的含量测定。
2　结果
2.1　核桃仁提取物对脑衰老小鼠血清内 CAT 活
性的影响-紫外分光光度法[ 3 , 4] 　表 1显示 ,在 D-半
乳糖的作用下 ,模型组动物脑组织中的 CAT 活性
显著下降 ,与正常对照组相比 ,差异十分显著 。而灌
胃核桃仁丙酮提物组的小鼠血液中 CA T 活性明显
上升(P<0.05),高于模型组;但灌喂核桃仁水提物
组与灌喂核桃仁醇提物组的小鼠血液中的 CA T 活
性无明显提高 ,说明核桃仁丙酮提物可能对 CAT
活性有保护作用 。
表 1　核桃仁提取物对小鼠血清内 CAT活性的影响(X±SD)
Tab.1　Effects of the extracts on activi ty of CAT in serum of mice(X
+ SD)
组别 动物数 蛋白质含量/mg/mL CAT(k/ gH b)
正常对照组 10 0.750 80.19±23.77
衰老模型组 10 0.717 73.14±21.35
核桃仁水提物组 10 0.732 70.18±11.72
核桃仁醇提物组 10 0.688 80.20±14.27
核桃仁酮提物组 10 0.701 90.83±8.16 ＊
　　注:与模型组比较 ＊ P<0.05 , ＊ ＊ P <0.01。
2.2　核桃仁提取物对脑衰老小鼠脑组织内 LPO 的
影响-组织匀浆 MDA 比色法[ 3] 　表 2 显示 ,连续
皮下注射 5%半乳糖水溶液 ,小鼠脑组织中的 LPO
含量明显高于正常对照组 ,说明 D-半乳糖可使细胞
膜发生脂质过氧化作用 ,而核桃仁丙酮提物可使小
鼠脑组织中的 LPO 含量下降 ,与模型组比较差异明
显(P<0.05),提示它有抑制脂质过氧化的作用 ,而
核桃仁水提物与核桃仁醇提物则对小鼠脑组织中的
LPO 含量无明显影响。
表 2　核桃仁提取物对小鼠脑组织内 LPO的影响(X±SD)
Tab.2　Effects of the extracts on content of LPO in brain of mice(X
+ SD)
组别 动物数 MDA(nmol/mg prot)
正常对照组 10 1.073±0.337
衰老模型组 10 1.131±0.175
核桃仁水提物组 10 1.045±0.161
核桃仁醇提物组 10 1.023±0.109
核桃仁酮提物组 10 1.032±0.124 ＊
　　注:与模型组比较＊ P<0.05。
2.3　核桃仁提取物对脑衰老小鼠脑组织内 SOD活
性的影响-光还原NBT 法[ 3] 　表 3显示 ,灌喂核桃
仁醇提物与核桃仁丙酮提物的小鼠脑组织内 SOD
活性与模型组比较显著提高(P <0.01);而灌喂核
桃仁水提物的小鼠脑组织内 SOD活性无明显变化。
提示核桃仁醇提物与丙酮提物对衰老小鼠脑组织中
的 SOD活性有明显的增强作用。
表 3　核桃仁提取物对小鼠脑组织内 SOD活性的影响(X±SD)
Tab.3　Effects of the extracts on activity of SOD in brain of mice(X
+ SD)
组别 动物数 SOD活力(u/m g prot)
正常对照组 10 5.393±1.444
衰老模型组 10 3.504±1.473
核桃仁水提物组 10 4.648±1.492
核桃仁醇提物组 10 5.234±1.424 ＊＊
核桃仁酮提物组 10 6.252±1.366 ＊＊
　　注:与模型组比较＊ ＊ P<0.01。
2.4　核桃仁提取物对脑衰老小鼠脑组织内POD活
性的影响-愈创木酚比色法[ 3] 　表 4显示 ,核桃仁
丙酮提物可使小鼠脑组织中的 POD含量明显升高 ,
与模型组比较差异明显(P <0.05);而核桃仁水提
物与桃仁醇提物则对小鼠脑组织中的 POD含量无
明显影响。
表 4　核桃仁提取物对小鼠脑组织内 POD活性的影响(X±SD)
Tab.4　Effects of the extracts on activi ty of POD in brain of mice(X
+ SD)
组别 动物数 [ Ag +](×0.787m g/mL) POD 活力(u/m g p rot)
正常对照组 10 3.907 4.074±0.627
衰老模型组 10 3.847 3.028±0.775
核桃仁水提物组 10 4.051 3.188±0.669
核桃仁醇提物组 10 3.886 3.058±0.805
核桃仁酮提物组 10 4.798 3.771±0.443＊
　　注:与模型组比较 ＊ P <0.05。
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3　讨论
自由基理论在机体衰老中的作用目前已受到人
们的高度重视。自由基(f ree radical)又称游离基 ,
是指在最外层轨道中含有未配对电子的原子 、原子
团或特殊状态的分子 ,也就是具有未配对的原子 、原
子团 、分子或离子叫自由基。如 H ·(氢自由基)、
OH ·(羟自由基)、H 3C ·(甲基自由基)、LO ·(烷
氧基自由基)、LOO ·(过氧自由基)、O 2 -·(超氧阴
离子自由基)等 。其化学性质活泼 ,有极强的氧化反
应能力 ,可使各种生物膜的不饱和脂肪酸发生过氧
化 ,形成过氧化脂质[ 4] 。在正常情况下 ,机体既可产
生自由基 ,但体内也有一套清除自由基的机制 ,内源
性的清除自由基的酶系有 SOD 、CA T 、POD 等 ,外
源性的清除剂有维生素 A 、C 等。正常情况下 ,两者
处于动态平衡之中 ,只有在疾病情况下 ,由于防御自
由基机制失衡 ,导致自由基的大量产生 ,对机体产生
毒害 。可导致细胞膜渗透性改变 、膜脂类过氧化 、
DNA 变性 、蛋白质交联等一系列病理改变[ 5 , 6] 。D-
半乳糖是机体的正常营养成分 ,当半乳糖过多时 ,可
由半乳糖氧化酶催化生成醛糖和过氧化氢 ,产生超
氧阴离子自由基 。过量的氧自由基可引起神经元细
胞的损伤 ,使脑内总 RNA 和蛋白质含量下降 , 脑内
神经元密度降低 ,造成动物学习记忆能力下降及机
体的衰老 。
核桃仁水提物的主要成分是皂苷等极性水溶性
物质;乙醇提取物主要是黄酮类 、生物碱;而核桃仁
丙酮提取物主要含有多不饱和脂质和维生素 E[ 7] 。
本次实验共检测了不同提取物对小鼠血液中的
CA T 活性 、脑组织中的过氧化脂质(LPO)含量 、超
氧化物歧化酶(SOD)活性 、过氧化物酶(POD)活性
的影响 。结果表明 ,给小鼠分别灌喂核桃仁水提物 、
醇提物与丙酮提物后发现 ,核桃仁水提物与醇提物
在实验中作用表现不明显 ,说明其中抗衰老的有效
成分含量较少;核桃仁丙酮提物能明显提高血液中
过氧化氢酶的活性 ,降低脑组织中过氧化脂质含量 ,
提高脑组织中超氧化物歧化酶及过氧化物酶的活
性 ,说明其中含大量有效成分。通过实验研究 ,我们
初步认为核桃仁丙酮提物在抗氧化 、抗衰老过程中
确有一定的作用 ,我们推断核桃仁的脂溶性成分如
亚油酸 、亚麻酸 、花生四烯酸等多不饱和脂肪酸与维
生素 E发挥了抗衰老的主要作用。有关这一问题
尚需我们进一步深入研究。
参考文献
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