全 文 ：培养基组成对环草石斛试管苗生长的影响
毛堂芬 1 ,刘作易2, 3＊ ,朱国胜1, 2 ,黄永会 1, 2 　
(1.贵州省生物技术研究所,贵州贵阳 550006;2.贵州省农业生物技术重点实验室 ,贵州贵阳 550006;3.贵州省农业科学院 ,贵州贵阳 550006)
摘要　[目的 ]降低生产环草石斛试管苗的成本 ,为大规模生产种苗提供理论技术依据。 [方法 ]比较白砂糖和分析纯蔗糖、自来水和蒸
馏水以及有机物、微量元素、NAA等各成分对环草石斛试管苗生长的影响。 [结果]自来水和白砂糖代替蒸馏水和分析纯蔗糖对环草石
斛试管苗的生长无显著影响 ,而更有利于苗的生长;去除培养基中的有机物和微量元素对试管苗生长无明显影响;铁盐和 NAA是试管
苗生长不可缺少的成分。 [结论 ]在环草石斛的试管苗生产中 ,自来水可以代替蒸馏水 ,食用白砂糖可以代替分析纯蔗糖 ,同时也可以去
除培养基中的有机物和微量元素等。
关键词　环草石斛;试管苗;培养基成分
中图分类号　S567.23　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)35-17367-02
EffectsofMediumCompositionontheGrowthofDendrobiumloddigesiRolfeTube-seedlings
MAOTang-fenetal　(GuizhouBiotechnologyInstitute, Guiyang, Guizhou550006)
Abstract　[ Objective] TheresearchaimedtoreducetheproductioncostofDendrobiumloddigesiRolfetube-seedlingsandprovidethetheo-
reticaltechnologybasisforthelarge-scaleproductionofseedlings.[ Method] Theefectsofwhitegranulatedsugar, analyticalsucrose, tapwa-
ter, distilledwater, organicmatter, traceelementsandNAAonthegrowthofD.loddigesiitube-seedlingswerecompared.[ Result] Tapwater
andwhitegranulatedsugarthatsubstitutedfordistiledwaterandsucroseresp.hadnosignificanteffectsonthegrowthofD.loddigesitube-
seedlingsandweremorefavorableforthegrowthofseedlings.Theremovaloforganicmaterandtraceelementshadnoobviousefectonthe
growthofseedlings.MalysiteandNAAwereindispensablecomponentsfortheseedlinggrowth.[ Conclusion] IntheproductionofD.loddige-
siitube-seedlings, tapwatercouldsubstitutefordistilledwaterandwhitegranulatedsugarcouldsubstituteforpuresucrose.Andorganicmat-
terandelementsandothersubstancescouldberemovedfromtheculturemedium.
Keywords　DendrobiumloddigesiRolfe;Tubeseedlings;Mediumcomposition
基金项目　贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目 [黔科合中
药专字(2003)45号 ] 。
作者简介　毛堂芬(1970-),女 ,贵州赤水人 ,副研究员 ,从事药用植物
生物技术研究。 ＊通讯作者。
收稿日期　 2009-08-24
　　环草石斛(DendrobiumloddigesiRolfe)为兰科石斛属多
年生草本植物 ,为 2000年版《中国药典 》收载的 5种药用石
斛之一 ,是我国传统的名贵中药材。环草石斛在自然野生状
态下生长及繁殖缓慢 ,且多年来人们均采集野生资源作为药
用 ,造成了生态环境的破坏和资源的枯竭 ,为了可持续开发
利用贵州省环草石斛资源 ,笔者采用野生种子无菌播种萌发
成苗技术对环草石斛进行了系统的研究 [ 1-3] 。在实验室大
量生产种苗的过程中 ,成本的高低是实现种苗产业化生产的
关键 ,为此笔者进行了一些探索试验 ,为实现低成本生产环
草石斛组培苗提供理论技术依据。
1　材料与方法
1.1　试验材料　环草石斛成熟种子无菌播种萌发长成的
小苗 ,具有 2片小叶。
1.2　试验方法
1.2.1　培养基及其配制。各试验的培养基组成成分见表 1。
培养基 pH值均为 5.5 ～ 5.8,用罐头瓶分装培养基 ,每瓶 50
ml,高温高压常规灭菌后备用。
1.2.2　接种及培养条件。挑选生长均一的小苗接种在配制
好的培养基上 ,每处理接种 10瓶 ,每瓶 5株小苗 ,接种后置
于培养室培养。培养温度(25 ±2)℃,光照时间 13 h/d,光
照强度 1 500 ～ 2 000 lx。培养 6个月后 ,对试管苗的有关生
长指标进行测定统计。
2　结果与分析
2.1　碳源对环草石斛试管苗生长的影响　分析纯蔗糖和
食用白砂糖对环草石斛试管苗生长影响对比试验的结果表
明(表 2),用食用白砂糖代替蔗糖对试管苗生长无显著影
响。由表 2可见 ,在以食用白砂糖为碳源的培养基 T-2上 ,试
管苗均长势良好 ,叶色嫩绿 ,根粗壮且多 、较长 ,在叶片数 、根
数及根长上较在 T-1培养基上有优势。由此证明 ,用白砂糖
代替蔗糖是有利于试管苗生长的。
表 1　培养基组成
Table1　 Mediumcomposition
培养基编号Mediumnumber
培养基组成Mediumcomposition
T-1 B5 +NAA2.0mg/L+20.00%香蕉+0.75%Agar+3.00%分析纯蔗糖
T-2 B5 +NAA2.0mg/L+20.00%香蕉 +0.75% Agar+3.00%食用白砂糖
S-1 B5 +NAA2.0mg/L+20.00%香蕉 +0.75% Agar+3.00%食用白砂糖 +蒸馏水
S-2 B5 +NAA2.0mg/L+20.00%香蕉 +0.75% Agar+3.00%食用白砂糖 +自来水
CK B5 +NAA2.0mg/L+20.00%香蕉 +0.75% Agar+3.00%食用白砂糖
J-1 B5(不加有机物)+NAA2.0mg/L+20.00%香蕉 +0.75%Agar+3.00%食用白砂糖
J-2 B5(不加有机物和微量元素)+NAA2.0mg/L+20.00%香蕉 +0.75% Agar+3.00%食用白砂糖
J-3 B5(不加有机物、微量元素和铁盐)+NAA 2.0 mg/L+
20.00%香蕉 +0.75%琼脂粉+3.00%食用白砂糖
J-4 B5(不加有机物、微量元素和铁盐)+20.00%香蕉 +0.75%Agar+3.00%食用白砂糖
J-5 NAA2.0mg/L+20.00%香蕉 +0.75% Agar+3.00%食用白砂糖
2.2　蒸馏水与自来水对环草石斛试管苗生长的影响　环草
石斛小苗在蒸馏水和自来水配制的培养基上的培养结果表
明(表 3), 2种水质培养基培养的试管苗生长虽无明显差异 ,
但在 S-2上试管苗的各项指标均较用 S-1培养基上的好 ,植
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2009, 37(35):17367-17368 责任编辑　李菲菲　责任校对　傅真治
株均长势良好 ,叶色浓绿 ,根多发达。试验表明 ,在环草石斛
试管苗生产中是可以用自来水代替蒸馏水的 ,且更利于试管
苗的生长。
表 2　分析纯蔗糖和食用白砂糖对环草石斛试管苗生长的影响
Table2　Efectofanalyticalsucroseandwhitegranulatedsugaronthe
growthofD.loddigesiitube-seedling
培养基Mediumnumber
苗高∥cmSeedlingheight
茎粗∥mmStemwidth
叶数∥片Leafnumber
根数∥条Rootnumber
根长∥cmRootlength
T-1 3.96 1.50 4.15 5.55 1.96
T-2 4.09 1.90 4.65 6.80 2.60
　注:表中结果为各处理试管苗的平均值。下同。
　Note:Theresultsaretheaveragevaluesoftube-seedlingsundereachtreat-
ment.Thesameasbelow.
表 3　蒸馏水和自来水对环草石斛试管苗生长的影响
Table3　EffectofdistiledwaterandtapwateronthegrowthofD.
loddigesitubeseedlings
培养基Mediumnumber
苗高∥cmSeedlingheight
茎粗∥mmStemwidth
叶数∥片Leafnumber
根数∥条Rootnumber
根长∥cmRootlength
S-1 3.26 1.50 4.38 5.67 1.72
S-2 4.05 1.60 5.19 6.57 2.07
2.3　不加有机物 、微量元素 、铁盐 、激素等对环草石斛试管
苗生长的影响　试管苗在 CK、J-1和 J-2 3种培养基上培养
时 ,植株生长整齐 ,长势较好 ,叶片绿色 ,根系粗壮发达有分
支 、均长 ,统计结果无显著差异(表 4);而在 J-3和 J-4培养基
上培养时 ,植株生长势弱 ,叶色黄绿 ,根少且短细弱;在 J-5和
J-6培养基上培养时 ,大部分试管苗死亡。试验表明 ,在培养
基中不加有机物和微量元素对试管苗的生长无大碍 ,可能是
自来水和香蕉提供了试管苗生长所需的有机成分和微量元
素;但当培养基中不加有机物 、微量元素和铁盐及 NAA时 ,
试管苗表现出明显的缺铁症状且生长不好 ,说明铁盐和 NAA
是环草石斛试管苗培养基中不可缺少的成分。
表 4　不加B5各成分和 NAA对环草石斛试管苗生长的影响
Table4　EfectofnoadditionofB5 andNAAonthegrowthoftube
seedlings
培养基Mediumnumber
苗高∥cmSeedlingheight
茎粗∥mmStemwidth
叶数∥片Leafnumber
根数∥条Rootnumber
根长∥cmRootlength
CK 4.09 1.90 4.65 6.80 2.60
J-1 3.82 1.80 4.20 6.10 2.28
J-2 3.50 1.50 4.90 6.50 2.32
J-3 1.89 1.10 2.68 2.79 0.99
J-4 2.16 1.50 2.95 3.55 1.11
　注:J-5、J-6中试管苗大部分已死亡。
　Note:MostseedlingsonJ-5andJ-6havebeendead.
3　结论与讨论
降低试管苗生产成本是植物组培快繁实现规模化的决
定因素 。我国研究人员对多数植物进行了简化培养基研究 ,
如北海道黄杨 、草莓 、华腺萼木 、铁皮石斛等 [ 4-7] ,均得到较
好的效果。该研究是在环草石斛壮苗培养研究结果基础上
进行的 ,选用 B5作为基本培养基。通过试验可以得出:以价
廉的自来水和食用白砂糖分别代替蒸馏水和分析纯蔗糖(价
格最少是白砂糖的 5倍)以及去除有机物和微量元素对环草
石斛试管苗的生长无显著的影响 ,不但可节约生产成本 ,而
且不影响试管苗的质量。
参考文献
[ 1] 毛秀华 ,金家兴 ,刘作易,等.环草石斛种子萌发培养的研究 [ J] .贵州农业科学, 2004, 32(3):48-49.
[ 2] 毛堂芬 ,刘作易 ,金家兴,等.环草石斛试管苗壮苗培养的研究[ J].种子, 2005, 24(6):22-24.
[ 3] 毛堂芬 ,刘作易 ,金家兴,等.环草石斛组培苗的移栽试验 [ J].贵州农业科学 , 2005, 33(4):74-75.
[ 4] 王小岚.北海道黄杨微体繁殖培养基简化初报 [ J].牡丹江师范学院学报:自然科学版 , 2006, 54(2):23-24.
[ 5] 陈世昌.简化培养基对草莓试管苗生根的影响[ J] .河南农业科技 , 2004(10):67-68.
[ 6] 唐君海.华腺萼木组织培养的简化 [ J].广西热作科技, 1998, 66(1):9-
11.
[ 7] 刘骅,张治国.铁皮石斛试管繁殖降低成本的研究 [ J].中国现代应用药学杂志, 1996, 15(3):15-17.
(上接第 17347页)
上的表现均为叶脉坏死 ,老叶枯死或变红;沿叶脉形成褪绿
条斑 ,后期变为褐色坏死条斑;叶片生长不对称 ,皱缩扭曲 ,
叶柄表面产生坏死斑;幼叶褪绿或黄边 ,卷曲呈环状 ,叶柄缩
短 ,植株矮化 [ 1, 4] 。该研究病毒检测结果显示 ,被检测植株均
未感染上述 4种病毒 ,脱毒率达 100%。
3　小结
在脱毒苗继代繁殖过程中经常会出现玻璃化现象 [ 5-7] 。
当试管内温度超过 31℃,湿度在 85%以上时 ,管内小苗会慢
慢出现水浸状 、植株透明 、脆弱等现象 ,即玻璃化现象。解决
玻璃化的有效途径是降低试管内的温度及湿度 ,加大培养基
中琼脂的含量并使用透气的试管塞 ,控制培养室的温度在 28
℃以内。
参考文献
[ 1] 邓成军,于卓 ,张少华.章姬草莓的脱毒及组培快繁技术研究[ J].内蒙
古农业大学学报 , 2003(2):79-82.
[ 2] 花秀凤 ,陈铣,许玲.草莓茎尖组培脱毒和种苗三级繁育体系的建立
[ J].福建果树, 2006(3):56-57.
[ 3] 裘建荣 ,戚自荣 ,王自锋,等.草莓三代脱毒苗与常规苗对比试验 [ J].
长江蔬菜, 2009(2):51-52.
[ 4] 曹孜义 ,刘国民.实用植物组织培养技术教程 [ M].兰州:甘肃科学技术
出版社 , 1996.
[ 5] 朱海生 ,潘东明 ,林义章,等.草莓高频离体再生体系的研究 [ J] .西北植物学报, 2007(5):919-924.
[ 6] 孙瑞芬 ,李天然 ,李堃.草莓组培快繁及叶片诱导植株再生的研究[ J].
华北农学报 , 2002(3):49-53.
[ 7] 陈琴芳 ,戴良英 ,邹学校.草莓高效离体再生体系的研究 [ J] .湖南农业
科学, 2004(2):19-21.
[ 8] 吴正凯 ,郑晓峰 ,黄刚.法兰地草莓组织培养快繁技术研究[ J].内蒙古
农业科技, 2009(1):32-33.
[ 9] 姜卓俊.丰香草莓的品种特性及丰产栽培[ J].落叶果树 , 2000, 32(3):
37-38.[ 10] 孙瑞芬,石慧芹,林雅珍.内蒙古自治区草莓优良品种及其栽培技术
[ J].内蒙古农业科技, 2002(1):41-42.
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