全 文 ：文章编号:1005-4014(2001)02-0109-03　
核桃楸叶提取液对肿瘤细胞的抑制作用
宋　华 , 包永明 , 张红梅 , 安利佳
(大连理工大学 生物工程系 ,辽宁 大连　116012)
关键词:抑制作用;肿瘤细胞;核桃楸提取液
摘要:将核桃楸叶子的乙醇提取物按极性分别用石油醚-氯仿-乙酸乙酯萃取 , 通过萃取液和不同
肿瘤细胞共同体外培养 ,来检测不同浓度提取液对肿瘤细胞增殖作用的影响。结果表明:在对人
正常细胞株无杀伤作用的浓度范围内 ,核桃楸叶子的乙酸乙酯提取液对人的多种肿瘤细胞具有较
强的增殖抑制作用 ,说明核桃楸中低脂性部位可能含有直接作用于肿瘤细胞的活性成分.
中图分类号:R730.52;R282.71　　　文献标识码:A
Inhibition effect of Juglans mandshwrica leaves extracts on tumor cells
SONG Hua , BAO Yong-ming , ZHANG Hong-mei , AN Li-jia
(Dept.of Biochemistry , Dalian Univ.of Technol., Dalian 116012 , China)
Key words:inhibition ef fect;tumor cells;ex tracts of Juglans mandshwrica
Abstract:We have investigated the effect of ethanol ext racts of Juglans mandshwric leaves , separated w ith
pet roleum ether , chloroform , and ethyl acetate according the polar difference , on the proliferation of tumor
cells under dif ferent concentrat ion and co-culturing the ex tracts w ith dif ferent tumor cells.The results show
that the ethy l acetate part of ex tracts , in the scope of no lesion the HLF(human lung of fetus), have no-
table influence on tumor cells proliferating.It may possibly have ef ficient components for tumo r cells in low
lipid parts.
　　目前有关中草药有效成分的抗肿瘤研究国内
已有大量的报道 ,并且传统中草药在肿瘤临床上
已得到广泛应用 。近年来 ,随着细胞生物技术的
发展 ,对一些常用抗癌中草药的研究已取得突破
性的进展 ,对其直接或间接的抗癌作用也有了更
深的认识 ,这些为临床选药及应用提供了依据。
本文研究了中药核桃楸叶的有效成分对肿瘤细胞
的抑制作用。
1　植物及来源
核桃楸(Juglans mandshwrica)落叶乔木 ,树
皮及叶可药用 ,采集方便 ,具有清热解毒 、抗癌等
作用 。树皮 、外果皮味苦含单宁 ,内果皮可制活性
炭 ,叶可作驱虫剂。
原料采自大连开发区大黑山附近 ,以叶片和
嫩芽为主 ,干重 5 kg 。
2　试剂及仪器
2.1　试　　剂
柱层析-G60硅胶(中国青岛海洋化工集团公
司);三氯甲烷(沈阳市新西试剂厂);甲醇(山东省
禹王实业有限禹城化工厂);石油醚(沈阳市华工
试剂厂);乙酸乙酯(沈阳市试剂五厂),以上试剂
均为分析纯。
RPM I 1640胎牛血清 ,胰蛋白酶 ,小牛血清 。
2.2　仪　　器
旋转蒸发器 RE-52(上海亚荣生化仪器厂);
SJZ-D循环水式真空泵(河南巩义市英峪华中仪
器厂);CO2 培养箱 (TABAI ESPEC CORP.
JAPAN )BNA-311;液氮罐(沈阳新光动力机械公
司);SHJ-系列净化工作台(上海净化设备厂)。
第 20 卷第 2 期
2 0 0 1 年 6 月
　　　 　　　　　大 连 轻 工 业 学 院 学 报　　　　 　　　　
Journal of Dalian Institute of Light Industry
Vol.20 , No.2
Jun.2 0 0 1
收稿日期:2001-05-16
作者简介:宋　华(1974 ～ ), 女 ,检验师 , 硕士研究生.
3　实验方法
3.1　药物制备
将采集的原料以 95%的乙醇 10倍量浸泡过
夜 ,水浴回流多次后 ,回收乙醇 ,得浓缩液为棕褐
色粘稠物 ,留存备用 。将总浓缩液悬浮于适量水
中 ,水液采用石油醚-氯仿-乙酸乙酯梯度洗脱[ 1] 。
先用石油醚萃取 10次 ,每次 500 mL ,回收石油醚
萃取层留存;余下液体用氯仿萃取 10 次 ,用量同
上 ,回收氯仿层;再以乙酸乙酯萃取 10次 ,回收乙
酸乙酯层;余下液层留存[ 2] 。将已得到的乙酸乙
酯萃取液浓缩后 ,再以超纯水配成按原生药计一
定浓度的储备液 ,过滤除菌 ,备用。
3.2　细胞筛选试验
细胞株:乳腺腺癌(耐药株 MCF7/ADR),大
细胞肺癌(NCI-H460),慢性髓原白血病(K562),
人胚肺(HLF),宫颈癌(HeLa)
所选细胞均参照美国国立肿瘤研究所药物筛
选用细胞株选取。
3.3　实验方法
细胞分别用含有 10%小牛血清(胎牛血清)
的 1640培养液将浓度调为 1.2×105/mL ,接种于
24孔细胞培养板中 1 mL/孔(每个浓度 4 个复
孔),放于 CO2 孵箱中 37 ℃静置培养 ,在细胞呈
对数 增殖 时 期加 入不 同 浓度 , 相 同 剂量
(0.05mL/孔)含药培养液 ,以加入相同剂量无药
培养液的细胞孔为空白对照。通过细胞计数 ,进
行每种细胞不同浓度的加药组与空白组之间细胞
存活率的比较 ,从而观察提取液在 24 h 内对不同
肿瘤细胞的作用结果见图 1。
图 1　药物作用效果图
4　结果与讨论
4.1　结　　果
实验中核桃楸叶的乙酸乙酯提取液对细胞作
用结果采用加药后 24 h 观察 。经 3次重复实验 ,
利用活细胞计数的方法 ,得出结果见表 1 、图 2。
110　　　　　　　　　　　大　连　轻　工　业　学　院　学　报　　　　　　　　　　　　　第 20卷
　　　表 1　不同药物浓度下的肿瘤细胞存活数　　　　　×104 mL-1
肿瘤细胞 药物浓度/(ng·mL-1)
0 0.05 0.15 0.25 0.35 0.45 0.50 LC50/(ng·mL
-1)
NC I-H460 12.00 11.50 10.50 8.25 4.50 2.00 0 0.31
K562 12.00 11.00 10.25 8.00 5.75 2.75 0 0.33
MCF7/ADR 12.00 11.75 11.00 9.00 6.50 3.50 0 0.37
HLF 12.00 12.00 12.00 12.00 12.00 11.50 11.25
　　由表 1可见 ,(1)给药 24 h后 ,以空白组为对
照 ,加药组的药物浓度为 0.05 mg/L ,肿瘤细胞增
殖开始受到抑制并出现死亡;(2)药物浓度为
0.5 mg/L , 肿瘤细胞 100%死亡 , 因 此确定
0.5 mg/L浓度为肿瘤细胞的最大致死剂量;
(3)由LC50值可以看出肿瘤细胞对提取液的作用
敏感程度从高到低依次为 NCI-H460 、 k562 、
MCF7/ADR。
图 2　不同药物浓度下肿瘤细胞的存活情况
由图 2可见 ,在同条件下以提取液对HLF 作
用结果为参照 ,在相同作用时间内 ,提取液在浓度
小于 LC50范围内 ,对 K562增殖抑制作用要明显
强于对NCI-H460 、MCF7/ADR的增殖抑制作用;
而在浓度大于 LC50范围内 , 提取液则对 NCI-
H460的增殖抑制作用相对明显[ 3] 。
4.2　讨　　论
抗肿瘤药物的研究 ,一般采用细胞培养或动
物实验方法研究其抗肿瘤作用 。实验结果证明核
桃 楸 提 取 液 对 选 用 的 NCI-H460 、 K562 、
MCF7/ADR 3种肿瘤细胞的生长均有明显的抑
制作用 ,其中对 NCI-H460 、K562 在不同的浓度
范围内作用更为明显 ,同时在有效剂量范围内 ,对
HLF 无明显杀伤作用。
通过实验结果说明 ,核桃楸提取液在对人体
的正常细胞不具杀伤力的有效剂量范围内 ,其抗
肿瘤作用是直接抑制体外培养肿瘤细胞的增殖并
进一步杀死肿瘤细胞 。
本文仅对核桃楸叶所含化学成份做了初步分
离 ,细胞活性实验证实了其对肿瘤细胞增殖的抑
制作用 。动物实验及提取物有效成份的分离 、结
构鉴定尚在进行中。
参考文献:
[ 1] 吴乃居 ,陈鸿英 ,王振国.核桃楸叶化学成份研究[ J] .
中草药 , 1994 , 25(1):10-1.
[ 2] 李敬芬 , 王建农 , 谷艳玲 , 等.核桃楸叶化学成份研
究[ J] .佳木斯医学院学报 , 1994 , 17(6):1-3.
[ 3] 张野平 ,杨志博 ,景永奎 , 等.胡桃醌抗肿瘤作用的研
究[ J] .沈阳药学报 , 1993 , 10(4):271-274.
111第 2期　　　　　　　　　　　宋　华等:核桃楸叶提取液对肿瘤细胞的抑制作用