全 文 ：作者简介：周燕芳（１９７９－），女，韩山师范学院化学系实验师。
Ｅｍａｉｌ：ｚｙｆ０１１９＠ｈｓｔｃ．ｅｄｕ．ｃｎ
收稿日期：２００９－０５－１１
第２５卷第５期
２００９年９月
Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．５
Ｓｅｐ．２００９
ＡＢ８大孔树脂纯化风轮菜黄酮的研究
Ｓｔｕｄｙｏｎｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃａｌａｍｉｎｔｈａｃｈｉｎｅｎｓｉｓｂｅｎｔｈｆｌａｖｏｎｏｉｄ
ｗｉｔｈＡＢ８ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓａｄｓｏｒｄｉｎｇｒｅｓｉｎ
周燕芳
ＺＨＯＵＹａｎｆａｎｇ
李佩华
ＬＩＰｅｉｈｕａ
（韩山师范学院化学系，广东 潮州 ５２１０４１）
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｈｅｍｉｓｔｙ，ＨａｎｓｈａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｏｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ５２１０４１，Ｃｈｉｎａ）
摘要：研究ＡＢ８大孔树脂对风轮菜总黄酮的吸附和解吸作
用，并考察相关的条件。结果表明：采用０．５ｍＬ／ｍｉｎ的流速
上样，３倍树脂床体积的９５％的乙醇进行洗脱，可获得黄酮
纯度为３８．８１％。ＡＢ８大孔树脂可较好的分离纯化风轮菜
黄酮。
关键词：风轮菜；黄酮；ＡＢ８大孔树脂
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｉｓｏｌａｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙｏｆＡＢ８ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓｒｅｓｉｎｆｏｒｔｏｔａｌ
ｆｌａｖｏｎｅｓｏｆＣａｌａｍｉｎｔｈａＣｈｉｎｅｎｓｉｓＢｅｎｔｈｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙｅｘａｍｉｎｇｔｈｅ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆａｄｓｏｒｐｔｉｏｎａｎｄｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ．Ｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｖｅｆｒａｃｔｉｏｎｓ
ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆ
ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎａｎｄｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎｆｏｒｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｗｅｒｅａｓｆｏｌｏｗｓ：ａｄ
ｓｏｒｐｔｉｏｎｒａｔｅ０．５ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅｅｌｕｔｉｎｇｒｅｇｅｎｔ９５％ｅｔｈａｎｏｌ（３ｆｏｌｄｓ
ｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆｔｈｅｒｅｓｉｎ），Ｕｎｄｅｒｔｈｅｓｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆｆｌａ
ｖｏｎｏｉｄｓｏｆｃａｌａｍｉｎｔｈａｃｈｉｎｅｎｓｉｓｂｅｎｔｈｉｓ３８．８１％．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃａｌａｍｉｎｔｈａｃｈｉｎｅｎｓｉｓｂｅｎｔｈ；Ｆｌａｖｏｎｅ；ＡＢ８ｒｅｓｉｎ
风轮菜又名苦地胆、熊胆草、九层塔、蜂窝草、节节草，学
名 Ｃｌｉｎｏｐｏｄｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ（Ｂｅｎｔｈ．）Ｏ．Ｋｕｎｔｚｅ［Ｃａｌａｍｉｎｔｈａ
ＣｈｉｎｅｎｓｉｓＢｅｎｔｈ．］，多年生草本，高２０～６０ｃｍ，茎四方形，多
分枝，全体被柔毛。我国东北，华北，西南各地均有分布，经
植物化学成分分析，风轮菜含有多种有效成分，其中总黄酮
含量达２．６４％［１］。黄酮类化合物具有广泛的生理功能，是许
多中草药的有效成分，具有很高的药用价值。黄酮类化合物
还在食品、化妆品等行业中广泛应用。随着市场需求量的增
加，经济效益的提高，黄酮类化合物提取和分离方法也在不
断的改进和提高［２］。风轮菜中黄酮含量高，具有一定的开发
利用价值。大量的研究［３］表明，用 ＡＢ８大孔树脂从天然植
物中提取黄酮类化合物吸附量大，解析容易，操作简单，产品
纯度高。本试验采用超声波协同提取风轮菜中的黄酮，考察
了ＡＢ８大孔吸附树脂富集风轮菜有效成分的最佳工艺条件
与参数，旨在为风轮菜的进一步开发利用提供理论依据。
１ 材料与方法
１．１ 材料与设备
风轮菜：潮州中草药店，取其茎、叶洗净，于８０℃烘箱内
干燥至恒重，取出，粉碎，备用；
芦丁：生化试剂，上海试剂二厂；
ＡＢ８树脂：南开大学化工厂；
层析柱：１×１０ｃｍ；
可见分光光度计：７２２Ｓ型，上海棱光技术有限公司；
数控超声波清洗器：ＫＱ３２００ＤＢ型，巩义市予华仪器有
限公司；
数显恒流泵：ＢＴ１００Ｂ，上海泸西分析仪器厂；
气浴恒温振荡器：ＥＴＱ型，常州荣冠试验分析仪器厂。
１．２ 方法
１．２．１ 总黄酮含量的测定方法［４］ 以芦丁为标样，通过铝
盐显色法，采用分光光度法测定总黄酮含量。
１．２．２ 风轮菜中总黄酮的提取 称取已洗净烘干的风轮菜
２０．００ｇ于锥形瓶中，加入９０％的乙醇适量（以浸没样品为
准），超声波提取法提取风轮菜黄酮，得到萃取液，过滤，收集
滤液，定容至５００ｍＬ，备用。
１．２．３ 芦丁标准曲线的绘制 按照文献［５］中的方法绘制
标准曲线，得回归方程：
Ｃ＝０．４１６１Ａ＋０．０００５，Ｒ２ ＝０．９９８４
式中：
Ｃ——— 黄酮浓度，ｍｇ／ｍＬ；
Ａ——— 反应液于５１０ｎｍ处的浓度。
表明芦丁在０～０．０４１４ｍｇ／ｍＬ范围内线性关系良好。
１．２．４ 总黄酮含量的测定 按照１．２．３中的测定方法，测
得黄酮提取液中黄酮浓度为１．９４９ｍｇ／ｍＬ。
２８
DOI:10.13652/j.issn.1003-5788.2009.05.002
１．２．５ 回收率试验 采用加样回收试验，准确吸取已知含
量的风轮菜黄酮提取液０．５ｍＬ，分别置于３支２５ｍＬ的比
色管中，分别加入芦丁标准溶液０．３，０．６，０．９ｍＬ，按样品含
量测定的方法测定，每个样品重复测定３次，结果回收率平
均为１０８．７７％。
１．２．６ ＡＢ８大孔树脂的预处理［６］ 用９５％的乙醇充分浸
泡，洗涤，至洗涤液无乳白色，再用蒸馏水洗去乙醇，至洗涤
液无醇味；然后用５％的 ＨＣｌ溶液浸泡３ｈ，用蒸馏水洗至中
性；最后用５％的ＮａＯＨ溶液浸泡３ｈ，用蒸馏水洗至中性。
２ 结果与分析
２．１ 静态饱和吸附量试验
准确称取处理好的ＡＢ８大孔树脂０．２５００ｇ于１００ｍＬ
锥形瓶中，加入２０．０ｍＬ风轮菜黄酮提取液，在室温下静置
２４ｈ，至吸附平衡，吸取上层液体，测定总黄酮浓度，饱和吸
附量按式（１）计算，吸附率按式（２）计算［７］。
饱和吸附量（ｍｇ／ｇ）＝
（起始浓度－平均浓度）×吸附液体积
树脂质量
（１）
吸附率＝
起始浓度－平衡浓度
起始浓度 ×１００％ （２）
由试验计算得出静态饱和吸附量为２６．６７ｍｇ／ｇ。
２．２ 静态洗脱性能试验
将已处理好的树脂，经静态饱和吸附总黄酮后，滤出，置
于烘箱中烘干，用９５％乙醇溶液洗脱，恒温震荡２ｈ后，测定
总黄酮含量，根据洗脱率计算式（３）得到ＡＢ８大孔吸附树脂
对风轮菜总黄酮的洗脱率为７３．２３％［８］。
洗脱率＝
洗脱液黄酮含量
饱和吸附的黄酮含量×１００％ （３）
２．３ 洗脱液浓度的确定
采用不同浓度的乙醇溶液对吸附于树脂上的黄酮进行
洗脱，确定洗脱液浓度。图１结果表明，浓度越低的乙醇溶
液洗脱效果也差，９５％的乙醇溶液洗脱效果最好。因此，后
续试验采用的黄酮洗脱液浓度为９５％。
乙醇浓度
Ethanol concentration/%
洗
脱
率
El
ut
in
g
ra
te
/%
80
70
60
50
40
30
20
10
0
20 30 40 50 60 70 80 90 100
图１ 乙醇浓度对洗脱率的影响图
Ｆｉｇｕｒｅ１ Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｔｈａｎｏｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｔｏｅｌｕｔｉｎｇｒａｔｅ
２．４ ＡＢ８大孔树脂对风轮菜提取液中黄酮动态吸附效果
２．４．１ 上样速度的选择 通过调节恒流泵的流速对上柱
（１×１０ｃｍ的层析柱）样液进行吸附流速的选择，以渗漏点
最迟 出 现 的 吸 附 流 速 为 宜。因 此 在 上 样 浓 度 均 为
１．４４９ｍｇ／ｍＬ，样液体积均为３０ｍＬ的条件下，控制流速分
别为２．０、１．０、０．５ｍＬ／ｍｉｎ进行动态吸附。泄漏情况如图２
所示。
流分
The velocity of flow/mL
流
分
中
黄
酮
浓
度
Fa
vo
no
id
ce
nt
en
to
ff
lo
w/
（ m
g·
m
L-
1 ） 1.2
0
3 6 9 12 15 18 21 24
0.5 mL/min
1.0 mL/min
2.0 mL/min
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
27 30 33
图２ 泄露曲线图
Ｆｉｇｕｒｅ２ Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｖｅｌｏｃｉｔｙｏｆｆｌｏｗｔｏ
ａｄｓｏｒｂｉｎｇｒａｔｅｗｉｔｈｄｙｎａｍｉｃ
从图２中可以看出，流速为０．５ｍＬ／ｍｉｎ时的泄漏点出
现得较晚些。这是因为当流速过快时，树脂尚未及时吸附黄
酮类化合物，黄酮类化合物就已随吸附液流出，因此，上样流
速慢有利于吸附。本试验确定０．５ｍＬ／ｍｉｎ为最佳上样
速度。
２．４．２ 原液浓度的确定 配制不同浓度的黄酮样液，根据
２．４．１的结果选择风轮菜提取液的上样流速为０．５ｍＬ／ｍｉｎ
进行上样吸附，结果见图３。
提取液黄酮浓度
Favonoid content of exterct/（mg·mL-1）
吸
附
率
So
rp
tio
n
ra
te
/%
90
60
85
70
0.5
80
75
65
0 1.0 1.5 2.0 2.5
图３ 原液浓度对动态吸附作用的影响图
Ｆｉｇｕｒｅ３ Ｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｃｏｎｔｅｎｔｏｆｅｘｔｒａｃｔ
ｔｏｓｏｒｐｔｉｏｎｒａｔｅｗｉｔｈｄｙｎａｍｉｃ
由图２可看出，风轮菜提取液的黄酮浓度在１．５ｍｇ／ｍＬ
时，上样吸附后的吸附率最大为８８．６２％。浓度过高或过低
吸附率都有所降低，这主要是由于浓度过低时，黄酮和树脂
的接触机率较少，而浓度过高，黄酮类化合物与树脂接触时
间较短，黄酮类化合物来不及与树脂完全吸附，所以吸附率
较小，造成资源的浪费。
２．４．３ ｐＨ值对动态吸附作用的影响 将提取液调成不同
的ｐＨ值，流速为０．５ｍＬ／ｍｉｎ，测定树脂对黄酮的吸附率。
图４结果表明，提取液ｐＨ值对 ＡＢ８树脂的吸附能力有显
著影响，且ｐＨ≤４．０最适于黄酮类化合物吸附，究其原因可
能是黄酮类化合物为多羟基酚类，呈弱酸性，故要达到良好
３８
提取与活性 ２００９年第５期
的吸附效果，必须在酸性或弱酸性条件下进行。在此ｐＨ值
条件下，黄酮类物质呈分子状态被吸附，吸附量大，吸附率也
高。因此，实际操作中，风轮菜黄酮提取液的ｐＨ 值４．０左
右为宜。
pH
吸
附
率
So
rp
tio
n
ra
te
/%
100
40
70
1
80
0 2 3 4 5
90
60
50
6 7 8 9 10 11
图４ ｐＨ值对动态吸附作用的影响图
Ｆｉｇｕｒｅ４ ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｐＨｖａｌｕｅｓｔｏａｄｓｏｒｂｉｎｇ
ｒａｔｅｗｉｔｈｄｙｎａｍｉｃ
２．４．４ 洗脱剂用量的确定 用９５％的乙醇溶液对吸附于树
脂上的黄酮进行洗脱，分段对流份进行分析，每３ｍＬ收集１
次流份，测定洗脱率。图５结果表明，洗脱剂用量为１８ｍＬ
时风轮菜黄酮大部分被洗脱下来，所以确定洗脱剂用量为树
脂床体积的３倍。
分段流份
Flow/mL
洗
脱
液
中
黄
酮
含
量
Fa
vo
no
id
co
nt
en
to
fd
es
or
pt
io
n/
m
g 6
0
5
2
3
4
3
1
6 9 12 18
2115
图５ 风轮菜黄酮的动态洗脱图
Ｆｉｇｕｒｅ５ Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎｃｏｕｒｓｅｗｉｔｈｄｙｎａｍｉｃ
２．５ ＡＢ８大孔树脂对风轮菜黄酮的纯化效果
将黄酮浓度为１．５ｍｇ／ｍＬ的黄酮提取液１８ｍＬ，将其
ｐＨ值调节为４，通过恒流泵控制流速为０．５ｍＬ／ｍｉｎ进行上
样吸附（树脂床的体积为５ｍＬ），吸附完成后用蒸馏水把附
在树脂表面的样液洗下来，然后用９５％的乙醇１５ｍＬ进行
洗脱，测得洗脱液中黄酮的含量为０．５８ｍｇ／ｍＬ，将洗脱液浓
缩干燥可得黄酮提取物固体粉末和原提取液浓缩干燥物进
行测定比较，结果原始提取液中黄酮含量为５．９３％，而大孔
树脂纯化后黄酮含量为３８．８１％。可见，风轮菜黄酮提取液
经过 ＡＢ８大孔树脂纯化后，其黄酮含量从５．９３％提高到
３８．８１％，分离纯化效果显著。
３ 结论
本试验从吸附率、回收率等方面考察 ＡＢ８大孔树脂对
风轮菜黄酮的吸附性能，结果表明，ＡＢ８大孔树脂对纯化风
轮菜中黄酮起到一定的作用，其最佳条件为：在上样浓度为
１．５ｍｇ／ｍＬ，提取液体积为１８ｍＬ，ｐＨ 值为４，上样流速为
０．５ｍＬ／ｍｉｎ进行上样吸附，然后用３倍树脂床体积的９５％
乙醇进行洗脱，可获得黄酮含量从５．９３％提高到３８．８１％，
分离纯化效果显著。因此，ＡＢ８大孔树脂适合分离纯化风
轮菜提取液中的黄酮。
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第２５卷第５期 周燕芳等：ＡＢ８大孔树脂纯化风轮菜黄酮的研究