全 文 ：收稿日期:1999-06-30
基金项目:内蒙古自治区自然科学基金资助项目(No.9713031)
作者简介:巴根那(1960～ ),男(蒙古族),内蒙古通辽市人;副教授 ,研究方向:蒙药新药开发。
正交设计研究广枣总黄酮提取工艺
巴根那 , 　吉林白乙 , 　白玉霞 , 　李宝山
(内蒙古蒙医学院 ,内蒙古 通辽 028041)
摘要:目的:为广枣总黄酮提取工艺提供依据。方法:采用正交设计方法。结果:最佳提取工艺组为 A 1B1C2D2 , 即加药材
8 倍量的 70%乙醇 ,回流提取 1h ,共提取 2 次;考察结果显示 , 提取次数 2 次时广枣总黄酮提取率提高到 92.28%。 结
论:乙醇提取法优于水提取法 , 乙醇浓度和溶剂倍量因素对总黄酮溶出含量影响极大 , 应加以控制。
关键词:广枣;总黄酮;提取工艺;正交设计
中图分类号:R944　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2000)04-0253-03
Study on Extracting Technology of Total Flavone of Mongolian Medicine Fructus
Choerospondiatis with Orthogonal Design
Bagenna , 　Jilinbaiyi , 　BAI Yu-xia , 　LI Bai-shan
(In ner Mongol ia College of Trad it ional Mongolian Medicine , Tong liao 028041 , China)
Abstract:Objective:To provide a basis fo r the optimum extracting technology of total flavone of t raditional
mongolian medicine Fructus Choerospondiatis.Methods:The o rthogonal design w as used.Results:The opt i-
mum extracting condition w as A1B1C2D2.That is adding eight times amount of 70% alcohol and refluxing and
ex tracting for 1 h(to tally ext racting for 2 times).The result indicated that 2-time ex t raction could raise the ex-
traction rate to 92.28%.Conclusion:The alcohol-ex t raction method is superior to w ater-ex t raction method.
The alcohol concentrat ion and amount should be strictly controlled becasuse of their large influences on the disso-
lution of to tal flavone.
Key words:Fructus Choerospondiatis;total flavonids;orthogonal design;ext racting technology
　　广枣为漆树科植物南酸枣 Choerospondias axil-
laris(Roxb.)Burtt et Hill的干燥成熟果实 ,系蒙古
族习用行气活血 、养心安神的药材[ 1] 。广枣味甘 、
酸 ,性平 、腻 、重 、柔;有清心火行气活血 ,养心 ,安神
功能 。主要用于气滞血瘀 ,胸痹作痛 ,心悸气短 ,心
神不安等病症[ 2] 。现代药理学研究证实 ,广枣所含
槲皮素 、柑桔素和山萘酚-0-7-葡萄糖等黄酮类化合
物 ,能明显降低鼠耗氧速度和耗氧量 ,提高耐氧能
力 ,扩张冠状动脉;改善血液流变学各项指标 ,清除
自由基 ,提高心脏组织中 SOD的活性[ 3] 。临床上多
配方用 ,并研制成注射液[ 4] 、片剂[ 5]等新制剂 。我
们曾对广枣总黄酮提取液抗自由基作用进行研究 ,
结果证明广枣有很强的清除和抑制自由基的作
用[ 6 , 7 , 8] 。为探索广枣总黄酮提取条件 ,以总黄酮含
量为考察指标 ,采用正交实验等方法对广枣总黄酮
提取工艺进行了系统研究。
1　材料与仪器
药材由内蒙古蒙药制药厂提供 , 属中国药典
(1995年)载漆树科植物南酸枣 Choerospondias ax-
il laris(Roxb.)Burt t et Hill的干燥成熟果实。芦丁
对照品由中国药品生物制品检定所提供 ,批号为
0080-9504 ,其它化学试剂均为 AR级 ,实验用水为
亚沸提纯水 。
日立 557双波长双光束分光光度计 , 754分光
光度计(上海三分厂), FA2204电子天平(上海天平
仪器厂)。
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2　实验方法
2.1　实验条件的选择
2.1.1　最大吸收波长及稳定性考察　精密量取芦
丁对照品液和样品液各 5.0ml ,分别置 25ml量瓶
中。加水至 6ml , 加 5%亚硝酸钠液 1.0m l , 放置
6min。加 10%硝酸铝试液 1.0ml , 放置 6min , 加
10%氢氧化钠试液 10ml ,加水至刻度 ,摇匀 。
放置15min后 ,以相应试剂作空白 ,于557双光
束/双波长分光光度计上进行全波长扫描 ,最大吸收
波长为 λmax 500nm ,同时 ,在 500nm 波长处进行
时间扫描。
结果见表 1 ,显示 150min内基本稳定 。
表 1　 放置时间对吸收度的影响
放置时间(min) 5 10 15 20 25 30 45 60 100 150
对照品(A) 0.057 0.057 0.056 0.056 0.056 0.057 0.056 0.056 0.056 0.057
供试液(A) 0.228 0.227 0.225 0.223 0.223 0.221 0.220 0.217 0.213 0.206
2.1.2　标准曲线的制备[ 1] 　精密称取在 120℃减
压干燥至恒重的芦丁对照品 10.9mg ,加甲醇溶解 ,
转入 50ml量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度摇匀 ,即得对
照品液(0.218mg/ml)。精密吸取该液 0.0 , 0.1 , 2.
0 ,3.0 ,4.0 , 5.0 , 6.0m l ,分别置 25ml量瓶中 ,加水
至6ml ,加 5%亚硝酸钠试液 1.0ml ,放置 6min ,加
10%硝酸铝试液 1.0ml ,放置 6min ,加 10%氢氧化
钠试液 10ml ,加水至刻度 ,摇匀 ,放置 15min以相应
试剂作空白 ,于 500nm 处测定吸光度 。结果见表 2。
以浓度(c)与吸光度(A)进行直线回归 ,得回归方程
为 Y=0.2190-0.0036X , r=0.9997。在0.20mg ～
1.30mg范围内呈线性关系。
表 2　 芦丁对照品浓度与吸光度
浓度(mg/ml) 0.218 0.436 0.654 0.872 1.090 1.308
吸光度 A 0.046 0.089 0.142 0.185 0.235 0.284
2.1.3　加样回收率测定　称取广枣粗粉 5.0g ×3
份 ,精密称定 ,分别精密加入芦丁对照品 ,按样品制
备法制备 ,并照标准曲线制备方法测定 ,计算其回收
率 ,结果见表 3。
表 3　 加样回收率测定结果
编号 样品总黄酮量(mg)
加入量
(mg)
测的值
(mg)
回收率
(%)
x±s
(%)
RSD
(%)
1 133.89 6.7 141.55 99.97
2 134.19 6.1 141.09 100.60 99.98±0.62 0.62
3 133.38 6.7 139.22 99.36
2.2　提取方法的选择
2.2.1 　水提取法 　称取广枣粗粉 5.0g , 加水
200ml ,浸泡30min ,煮沸60min ,过滤。共煎煮3次。
合并滤液定容至 50ml备用。
2.2.2　乙醇提取法　称取广枣粗粉 5.0g ,加乙醇 ,
水浴回流 1h ,过滤 。共提取 3 次。合并滤液定容至
50ml备用。
2.2.3　样品液总黄酮含量测定　精密吸取样品液
3.0ml ,置 25ml 量瓶中 , 按标准曲线制备方法测定
吸光度 ,计算含量 。结果见表 4。
表 4　 广枣提取条件与含量关系(n=3)
试验号 　提取条件 含量m g/m( x ±s) RSD
1 水提取法 21.263±0.238 1.12
2 乙醇提取法 34.331±0.152 0.44
　　t=65.008 , t 0.01(1 , 1)=63.657。
2.3　乙醇提取参数的考查
从表 3可知 ,乙醇提取法优于水提取法 ,采用正
交实验设计 ,选用乙醇浓度 、提取时间 、提取溶剂加
倍量及提取次数 4个因素 ,每个因素选择 2个水平 ,
用 L8(27)正交表进行实验设计优选 。结果见表 5 ～
表 7。
表 5　 因素水平表
水平 因　　　素
A乙醇浓度(%)B提取时间(h)C溶剂倍量 D 提取次数
1 60 1.0 6 1
2 70 2.0 8 2
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表 6　 正交试验设计及结果分析
表头设计 A B A×B C A×C B×C D 试验结果
列号 1 2 3 4 5 6 7 总黄酮含量(mg/ g)
1 1 1 1 1 1 1 1 28.0387
2 1 1 1 2 2 2 2 35.7937
3 1 2 2 1 1 2 2 31.0481
4 1 2 2 2 2 1 1 36.7414
5 2 1 2 1 2 1 2 31.1388
6 2 1 2 2 1 2 1 40.8028
7 2 2 1 1 2 2 1 29.9919
8 2 2 1 2 1 1 2 34.8258
Ⅰ 65.81 67.89 64.33 60.11 67.35 65.37 67.79 G=268.38
Ⅱ 68.38 66.31 69.87 74.08 66.84 68.82 66.41 CT=G 2/ 8
R 5.18 3.19 11.05 27.92 1.02 6.86 2.79 Q=1/ 2 ∑ I2
S 3.29 1.22 15.38 97.57 0.14 5.94 0.73 S=Q-CT
F 31.81 11.78 148.35 940.90 1.32 57.25 11.35 Se=SA×C+S D
优水平 A2 B1 C2 D 1
表 7　 方差分析
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F 值 显著性
A 3.2987 1 3.2987 31.81 2
B 1.2222 1 1.2222 11.78 1
A×B 15.3841 1 15.3841 148.35
C 97.5715 1 97.5715 940.90 2
A×C 0.1373 1 0.1373 1.32
B×C 5.9366 1 5.9366 57.25
D 1.1767 1 1.1767 11.35 1
S e 0.7257 7 0.1037 —
　　注:2:极显著 F0.01(1 , 7)=12.25 , 1:显著 F 0.05(1 , 7)=3.59
2.4　提取时间 、次数的跟踪考察
为了解提取时间和次数对总黄酮溶出的影响 ,
进行跟踪考察。结果见表 8 。
表 8　 时间 、次数对广枣总黄酮溶出的影响(n=3)
第 1次
1h 2h
第 2次
1h 2h
第 3次
1h 2h
未浸泡 144.45 175.97 49.79 49.71 18.11 22.07
得率(%)(68.02)(71.03) (23.45)(20.06) (8.53)(8.91)
浸泡得 153.36 194.38 42.09 59.06 16.34 18.83
率(%)(72.41)(71.39) (19.87)(21.17) (7.72)(6.92)
3　讨论
结果表明 , 乙醇提取法优于水提取法(P <
0.01)。乙醇提取参数的正交设计最佳方案是
A2B1C2D1 ,即用 8倍量的 70%乙醇回流提取 1h ,共
提取 1次 。
乙醇提取工艺对广枣总黄酮含量的主要影响因
素为溶剂用量 ,其次是乙醇浓度。对提取次数和提
取时间的跟踪考察结果表明 ,提取 2 次把总黄酮的
得率提高到 90%以上。但时间的延长 ,对有效成分
的溶出无影响。
综上所述 ,广枣总黄酮的最佳较合理的提取工
艺方案是A2B1C2D2 ,即用 8倍量的 70%乙醇回流提
取 1h ,共提取 2次 。可充分利用低浓度乙醇 、用量
小 、降低生产成本 、提高得率 、简便等优点 。
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