全 文 ：含量。结果见表 2。
表 1 原儿茶酸回收率试验测定结果
样品含量
/(g /g)
取样量
/ g
对照品加
入量 /mg
实际测定
含量 /mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
0. 082 0. 470 8 0. 322 2 0. 697 25 96. 5
0. 082 0. 477 6 0. 322 2 0. 702 90 96. 6
0. 082 0. 520 4 0. 402 7 0. 824 99 98. 9
99. 1 2. 47
0. 082 0. 490 8 0. 402 7 0. 800 38 98. 8
0. 082 0. 570 4 0. 483 3 0. 960 46 102. 0
0. 082 0. 524 2 0. 483 3 0. 923 04 102. 0
表 2 12 批烫狗脊原儿茶酸含量测定结果
产地 批号 原儿茶酸的含量 /(mg /g)
云南 081206 0. 21
福建 081007 0. 54
广西 0802001 0. 43
福建 080621 0. 15
湖南 080703 0. 82
四川 0709008 0. 26
江西 071225 0. 30
成都 081124 0. 40
广西 20081128 0. 23
广东 080704 0. 43
福建 080315 0. 54
广西 080702 0. 15
3 讨论
3. 1 薄层鉴别对照品的选择
狗脊化学成分研究表明，其主要含有为酚类、糖、蛋白
质、挥发油等成分。但是糖类成分和蛋白质成分目前没有可
供定性鉴别使用的合适的对照品。而其酚类成分中以原儿
茶醛和原儿茶酸的含量较高，而且二者的活性与狗脊的功效
相近，这也是 2005 年版中国药典狗脊定性鉴别项下采用原
儿茶酸和原儿茶醛作为对照品的主要原因。鉴于狗脊砂烫
后，原儿茶醛和原儿茶酸含量明显增高，因此本实验在建立
烫狗脊的薄层定性鉴别时，采用原儿茶醛和原儿茶酸为对
照品。
3. 2 薄层色谱展开剂的选择
经对多批药材反复试验，选定分离度较好的三氯甲烷-
乙酸乙酯-甲醇-甲酸(12 ∶ 2 ∶ 1 ∶ 0. 8)为展开剂。该展开剂
对原儿茶酸和原儿茶醛分离好，而且毒性小。通过三个厂家
硅胶 G预制板的平行实验，供试品色谱均有很好的分离度。
3. 3 薄层鉴别显色剂的确定
原儿茶酸和原儿茶醛均为酚性成分，与三氯化铁-铁氰
化钾显色灵敏。因此显色剂确定为 2%三氯化铁-1%铁氰化
钾(1 ∶ 1)溶液。由于该显色剂长时间放置后，容易产生沉
淀，因此最好预先分别配置 2%三氯化铁水溶液和 1%铁氰
化钾水溶液，临用时现配制成 1 ∶ 1 的溶液。
本研究建立的烫狗脊的定性、定量检测方法具有简便快
速、灵敏度高、重复性好、准确的特点，为烫狗脊的质量控制
提供可靠的方法。
参考文献:
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维药瘤果黑种草子质量标准研究
王园姬， 陈 文* ， 骆从艳， 慕春海， 李超鹏
(新疆石河子大学药学院教育部重点实验室，新疆 石河子 832000)
收稿日期:2009-08-12
基金项目:国家科技支撑计划课题(2007BAI48B00)
作者简介:王园姬(1984 －)，女，硕士研究生，研究方向为药物新制剂与新剂型。E-mail:wangyuanji123@ 126. com
* 通讯作者:陈 文(1967 －)，男，硕士，教授，从事药物新制剂与新剂型研究。Tel:13179930326 E-mail:chen-wen2000@ 126. com
关键词:瘤果黑种草子;常春藤皂苷元;HPLC;TLC
摘要:目的:建立瘤果黑种草子的质量标准。方法:采用 TLC法对瘤果黑种草子药材中常春藤皂苷元进行定性鉴别:硅胶
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G板，以苯-甲醇-甲酸(17 ∶ 6 ∶ 1)为展开剂进行展开。采用 HPLC 测定瘤果黑种草子中常春藤皂苷元的含量:Kroma-
sil100-5C18(250 mm ×4. 6 mm，5. 0 μm)色谱柱，乙腈-0. 05%磷酸水(68 ∶ 32)为流动相，柱温 20 ℃，检测波长为 208 nm，
流速为 1. 0 mL /min。结果:通过薄层色谱可鉴别常春藤皂苷元。常春藤皂苷元在 0. 252 ～ 10. 08 μg /mL(r = 0. 9999，n =
6)与峰面积具有良好的线性关系，平均回收率为 100. 7%(RSD = 2. 3%)。结论:所建立的瘤果黑种草子质量标准研究
方法可行，重复性好，能有效的控制该药材的质量。
中图分类号:R284. 1 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2010)07-1268-03
黑种草为毛茛科植物瘤果黑种草(Nigella glandulifera
Freyn)的干燥成熟种子。秋季采收成熟果实，除去泥沙及果
皮，晒干［1］。目前作为药用的有 3 个种，分别为瘤果黑种草
(Nigella glandulifera Freyn)，又名腺毛黑种草;果黑种草(Ni-
gella sativa Linn)，又名家黑种草;以及黑种草(Nigella dama-
scene L.)［2］。
瘤果黑种草子为新疆维吾尔族和西双版纳傣族习用药
材，别名斯亚旦。其功效为利尿、活血、解毒、通乳;还可乌
发、延缓衰老［3］。化学成分主要有黄酮、皂苷、脂肪酸、挥发
油和生物碱等［4］。国外有文献报道其生物活性主要为抗氧
化、降血糖［5］、抗肿瘤等［6］。已有研究证实瘤果黑种草子中
含有多种常春藤皂苷类化合物［7，8］，并有对其中总黄酮测定
的研究［9］，但尚未见有关于常春藤皂苷元含量测定的报道。
原药材的质量标准也仅有性状鉴别。本实验建立了其薄层
鉴别的方法，并进一步建立了 HPLC测定瘤果黑种草子中常
春藤皂苷元含量。实验结果表明该方法准确、快速、专属性
强，为瘤果黑种草子药材质量标准的修订提供了实验依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Waters 600 型高效液相色谱仪，Waters2996 检测
器;UV-2401 型紫外可见光分光光度计(日本岛津);Sartorius
(BP211D)电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);超
声波提取器。
1. 2 试药 瘤果黑种草子对照药材(中国药品生物制品检
定所，批号 121428-200501);常春藤皂苷元对照品(中国药品
生物制品检定所，批号 820-20002);硅胶 G(青岛海洋化工有
限公司)。水为自制超纯水;乙腈为色谱纯试剂，其他溶剂为
分析纯试剂。瘤果黑种草子(购自新疆乌鲁木齐市二道桥药
材市场)，由新疆石河子大学药学院成玉怀副教授鉴定为瘤
果黑种草子(Nigella glandulifera Freyn)。
2 方法与结果
2. 1 薄层色谱鉴别 称取常春藤皂苷元对照品适量，用甲
醇溶解配制成 0. 16 mg /mL 的溶液，作为对照品溶液。称取
瘤果黑种草子药材粉末(过 30 目筛)与对照药材各约 0. 5 g，
分别加 70%乙醇加热回流提取 1 h，常压过滤。滤液分别作
为供试品溶液和对照药材溶液。照薄层色谱法试验，用毛细
管分别吸取供试品溶液、对照药材溶液及常春藤皂苷元对照
品溶液适量，点于同一硅胶 G薄层板上，以苯-甲醇-甲酸(17
∶ 6 ∶ 1)为展开剂，展开、取出、晾干，喷以 10%的硫酸-乙醇
试液，105 ℃烘至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材
及常春藤皂苷元对照品色谱相应的位置上，显示清晰可见的
紫色斑点。见图 1。
2. 2 HPLC测定
2. 2. 1 色谱条件与系统适用 色谱柱:Kromasil100-5C18
(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)，流动相:乙腈-0. 05%磷酸水(68
∶ 32);检测波长:208 nm;柱温:20 ℃;流速:1. 0 mL /min;进
样体积:20 μL。理论板数按常春藤皂苷元峰计不低于
4 000。对照品及样品色谱图见图 2。
1.瘤果黑种草子样品 2.瘤果黑种草子对照药材
3.常春藤皂苷元对照品
图 1 瘤果黑种草子 TLC薄层图
A
B
图 2 常春藤皂苷元(A)对照品和瘤果黑种
草子药材(B)HPLC图谱
1.常春藤皂苷元
2. 2. 2 对照品溶液的制备 精密称取减压干燥至恒重的常
春藤皂苷元对照品适量，加甲醇制成 0. 21 mg /mL 的溶液，
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即得。吸取此对照品溶液 1 mL 到 10 mL 量瓶中，甲醇稀释
至刻度，得浓度为 0. 021 mg /mL的对照品溶液。
2. 2. 3 供试品溶液的制备 称取本品粗粉(过 30 目筛)约
2. 0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇 50 mL，超声提取
30 min，滤过，残渣再加甲醇 50 mL，超声提取 30 min，甲醇适
量清洗残渣，合并滤液与洗液，减压挥干溶剂。残渣加 10
mL水溶解，水饱和正丁醇萃取 3 次，每次 20 mL，合并萃取
液，减压挥干溶剂。残渣加甲醇 20 mL，盐酸 4 mL，70 ℃加
热水解 4 h。水解产物加水 10 mL，氯仿萃取 2 次，每次 20
mL，合并萃取液，减压挥干溶剂。残渣用甲醇溶解并转移至
50 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，过 0. 22 μm的微孔滤
膜，取续滤液，即得。
2. 2. 4 线性关系考察 按上述色谱条件，精密吸取 0. 021
mg /mL对照品溶液 3 mL 于 5 mL 量瓶中，得浓度为 12. 6
μg /mL对照品溶液。分别精密吸取 12. 6 μg /mL 的对照品
溶液 0. 1、0. 2、0. 5、1. 0、2. 0、4. 0 mL到 5 mL量瓶中，甲醇稀
释至刻度(浓度分别为 0. 252、0. 504、1. 26、2. 52、5. 04、10. 08
μg /mL)，分别精密吸取 20 μL，注入高效液相色谱仪，测定
峰面积。以峰面积 Y积分值为纵坐标，常春藤皂苷元的浓度
C(μg /mL)为横坐标，绘制标准曲线，常春藤皂苷元的回归方
程为:Y =208 596 × C －10 088(r = 0. 999 9)，表明常春藤皂苷
元进样量在 0. 252 ～10. 08 μg /mL范围内线性关系良好。
2. 2. 5 精密度试验 精密吸取对照品溶液(浓度为 5. 04
μg /mL)20 μL，按上述色谱条件重复进样 6 次，测定峰面积，
常春藤皂苷元峰面积的 RSD为 0. 24%(n = 6)。
2. 2. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液在 0、2、4、6、8、12 h
后，依法测定，常春藤皂苷元峰面积的 RSD 为 2. 0%。表明
供试品溶液在 12 h内稳定。
2. 2. 7 重复性试验 称取瘤果黑种草子药材 5 份，每份约
1. 0 g，分别精密称定，制备成供试品溶液，测定峰面积，常春
藤皂苷元峰面积的 RSD为 1. 3%(n = 5)。
2. 2. 8 加样回收率试验 称取已知含量的瘤果黑种草子药
材 9 份，每份各约 0. 03 g，分别精密称定，加入常春藤皂苷元
对照品溶液(10. 08 μg /mL)0. 8 mL、1. 0 mL、1. 2 mL，制备成
供试品溶液，进样测定峰面积，计算加样回收率。结果见
表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n =9)
测定
次数
称样量
/mg
含有量
/μg
加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
%
平均回
收率 /%
RSD
/%
1 32. 70 11. 10 8. 064 19. 05 98. 60
2 32. 70 11. 10 8. 064 19. 11 99. 20
3 32. 70 11. 10 8. 064 19. 18 100. 2
4 32. 70 11. 12 10. 08 21. 43 102. 2
5 32. 70 11. 12 10. 08 21. 75 105. 4 100. 7 2. 3
6 32. 70 11. 12 10. 08 21. 21 100. 1
7 35. 60 12. 09 12. 10 24. 48 102. 4
8 35. 60 12. 09 12. 10 24. 27 100. 6
9 35. 60 12. 09 12. 10 23. 94 97. 90
2. 2. 9 样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液和供试品
溶液 20μL，注入液相色谱仪，测定 5 份药材样品。测定结果
见表 2。
表 2 样品测定结果(n =5)
样品号 常春藤皂苷元 /(mg /g) 常春藤皂苷元 /‰ RSD /%
1 0. 3366 0. 3366
2 0. 3361 0. 3361
3 0. 3470 0. 3470 1. 2
4 0. 3416 0. 3416
5 0. 3411 0. 3411
3 讨论
3. 1 本实验建立的薄层色谱鉴别方法，分离度好，显色后斑
点颜色清晰。
3. 2 瘤果黑种草子中的三萜皂苷以常春藤皂苷元为苷元。
由于三萜皂苷极性较大，先用甲醇进行超声提取;根据皂苷
在水饱和正丁醇中溶解性较好的性质，再用水饱和正丁醇提
取皂苷，然后加酸水解。由于三萜皂苷水解成常春藤皂苷
元，极性变小，所以用极性小的有机溶剂氯仿提取常春藤皂
苷元。在各步萃取过程中，注意两相之间的静置分层，尤其
是第一步水饱和正丁醇萃取时，切勿剧烈振摇，避免乳化现
象，使分层不明显，影响含量测定结果的准确性。
3. 3 常春藤皂苷元分子结构中无共轭体系，属于末端吸收，
紫外吸收较弱。根据文献采用高效液相-二极管阵列检测器，
确定检测波长为 208 nm。此波长下常春藤皂苷元的峰与其他
峰分离良好，峰面积最大，故选择 208 nm作为检测波长。
3. 4 在含量测定过程中，考虑到常春藤皂苷元处于末端吸
收，且甲醇本身就对其测定有干扰，故选择乙腈-0. 05%磷酸
作为流动相，进行等度洗脱，常春藤皂苷元的峰能与其它相
邻峰达到很好的分离，且基线较平稳，峰型好。
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