全 文 ：EDIBLE FUNGI食用菌 2009（4）
蒽酮-比色法测定灰树花多糖条件的研究
李志军 黄 芳 赵 晨 孟 玲 宋爱荣 *
（山东省应用真菌重点实验室 青岛农业大学药用真菌研究所 山东青岛 266109）
摘 要 为了探讨蒽酮-比色法测定灰树花多糖含量的
最佳条件，试验采用沸水水浴不同时间、冰水冷却后不同
静置时间的前处理方法测定灰树花提取物的总糖含量。
采用酒精浓度为 65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、
100%，酒精倍数为 10倍、25倍、40倍、50倍的稀释浓度，
以蒽酮-比色法测定灰树花提取物还原糖含量。结果：沸
水水浴不同时间处理对样品总糖含量的影响较大，沸水
浴 6min后，冷却所测定的总糖含量最高，总糖含量为
73.74%。静置时间的长短对吸光值影响不大，在静置 4 h
内测定值稳定性好；不同酒精倍数及不同酒精浓度对样
品的还原糖测定结果影响较大。加入 50倍酒精、浓度为
80%的处理，所测得的还原糖含量最高为 15.21%。因此，
在灰树花提取物还原糖含量测定时，采用 80%的酒精定
容至 50倍为宜。
关键词 蒽酮-比色法 总糖 还原糖 酒精 灰树花
文章编号 1000-8357（2009）04-0073-02
多糖具有抗肿瘤、提高人体免疫力等多种生物学活性，备
受人们关注，成为当今生物医药研究和开发的重点，多糖的定
量检测方法因此而备受关注[1]。目前多糖测定的方法有苯酚-硫
酸法、蒽酮-比色法、直接滴定法等[2]，每种测定方法都有特定的
条件。蒽酮-比色法测定总糖含量过程中，沸水水浴时间的长短
是主要的影响因素，还原糖含量的测定主要受酒精倍数及酒精
浓度影响。试验采用蒽酮-比色法对灰树花发酵液提取物的总
糖、还原糖的测定条件进行了研究。现将试验结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 试验材料 ①供试样品：灰树花发酵液提取物，由青岛
农业大学药用真菌研究所提供。②仪器与器材：电子天平、
G751型紫外分光光度计、超声波清洗仪、干燥箱、移液管、恒
温水浴锅等。③实验试剂：0.2%蒽酮硫酸。称取 0.2 g蒽酮，加
入 100 mL 95%的浓硫酸溶解，搅拌均匀，用时现配。
1.2 测定原理 测定灰树花糖含量过程中，糖与硫酸在沸水
浴加热脱水，再与蒽酮缩合生成蓝绿色化合物，其呈色强度与
溶液中糖的浓度成正比，在 610 nm下测定吸光值[3]。
1.3 试验方法
1.3.1 葡萄糖标准曲线的制作 称取 105℃干燥至恒重的葡
萄糖 100 mg，于 100 ml容量瓶中加水溶解并定容，从中吸取
10 mL置于容量瓶中定容至 100 mL。分别吸取葡萄糖标准溶
液 1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，置于 50 mL容量瓶中定容，
从中分别吸取 1 mL加入试管中，并加入 4 mL双蒸水，冰水浴
中沿壁加入 10 mL 0.2%的蒽酮硫酸试剂，振荡摇匀后，沸水
浴处理 6 min，610 nm处测定吸光值[2]-[4]。
1.3.2 沸水水浴样品处理 称取 50 mg样品，置于 50 mL容
量瓶定容，得到 1 mg/mL的样液，从中再吸取 1 mL置于 50 mL
容量瓶中定容。取定容后的溶液 0.5mL加入大试管，再加 4.5mL
的蒸馏水，置冰水中然后缓慢加入 10 mL 0.2%蒽酮硫酸试
剂，摇匀后置沸水中水浴。设定沸水浴时间依次为 4 min、6 min、
8 min、10 min、12 min、14 min，每个处理设置对照组，沸水水浴
后立即置入冰水中冷却至室温，在 610 nm处测定吸光值[4]。
1.3.3 酒精处理样品 取 2 mL样品液，分别加入 65%、70%、
75%、80%、85%、90%、95%、100%的酒精并稀释到 10倍、25倍、
40倍、50倍，静置 24 h，8 000 r/min离心 6 min。取一定量的上
清液并设对照，加一定量的蒸馏水（见表 1），冰水中沿壁加入
6 mL 0.2%蒽酮硫酸试剂，摇匀后置沸水中按水浴时间进行水
浴，然后置于冰水中冷却至室温，在 610 nm处测定吸光值[5]。
1.3.4 总糖测定中冷却时间的设定 将沸水水浴处理后的样
品冷却至室温静置，每隔 1 h取样置 610 nm处测定吸光值。
共取 4次。观察静置时间对总糖测定的影响。
1.3.5 精密度测定 取 1 mg/mL的标准溶液按照 1.3.2处理
进行测定，重复 3次。
1.3.6 回收率测定 吸取 0.5 mL样品溶液，重复 3次，分别
加入 0.5 mL的对照溶液，使其总体积为 1.0 mL，按照 1.3.1测
定标准曲线的方法测定吸光值。
2 结果与分析
2.1 标准曲线的制作 结果见图 1。
表 1 不同酒精倍数各处理试剂加入量
酒精（倍数） 取样量/mL 上清液/mL 蒸馏水/mL 蒽酮-硫酸/mL
50 2 2 1 6
40 2 2 1 6
25 2 2 1 6
10 2 0.5 2.5 6
图 1 葡萄糖标准曲线
收稿日期：2009-04-09
基金项目：山东省农业良种产业化项目资助（2006Lz06）。
*通讯作者。e－mail：airongsong126.com
y=18.805x+0.0032
R2=0.9997
葡萄糖浓度/（mg·mL-1）
吸
光
值
/A
73- -
(下转P76)
EDIBLE FUNGI食用菌 2009（4）
2.2 沸水水浴不同时间对总糖含量的影响 测定结果显示，
沸水水浴不同时间对样品总糖含量的影响较大，沸水浴 6 min
后冷却所测定的总糖含量最高，总糖含量为 73.74%，沸水浴处
理 8min，样品总糖含量为 71.08%，沸水浴处理 4min和 10min，
所测得的总糖含量结果相同为 62.22%，而沸水浴 14 min所
测得的总糖含量最低，仅为 27.21%（表 2）。
2.3 不同酒精倍数和不同酒精浓度对样品还原糖含量测定
的影响 试验结果表明（表 3），在样品中加入不同酒精倍数
和不同酒精浓度对样品的还原糖测定结果影响较大。加入 50倍
酒精、浓度为 80%的处理，所测得的还原糖含量最高为
15.21%；在不同酒精倍数的各处理测定结果中可以看出，酒
精倍数为 50倍时所测得的还原糖含量普遍较高；而酒精倍数
为 25倍的各处理，所测得的还原糖含量普遍较低；在相同酒
精倍数条件下，以 80%浓度的各处理所测得的还原糖含量最
高。因此，在灰树花提取物还原糖含量测定时，采用 80%的酒
精定容至 50倍为宜。
2.4 冷却后不同静置时间对测定结果的影响 详见表 4。沸
水水浴 6 min后，冷却静置不同时间的测定结果显示，静置 1
h测定的吸光值最大为 0.031，静置 2 h与静置 3 h所测得的
吸光值相同为 0.030，而冷却后立即测定的结果与静置 4 h后
测得的吸光值相同为 0.029，因此静置时间的长短对吸光值影
响不大，最大相差 0.002。所以样品在沸水浴处理经冰水冷却
后即可测定。葡萄糖出现的变化趋势同样品的基本相似。
2.5 精密度及回收率的测定结果 精密度测定结果显示，精
密度较高，RSD=0.0016%（表 5）。回收率测定结果，测得的平
均回收率较高，RSD为 0.11%（表 6）。
参考文献
[1] 李明元.真菌粗多糖测定方法的研究[J].食品研究与开发，2007，
（5）：39.
[2] 宋俊英.茶薪菇总糖、还原糖和多糖的测定 [J].中草药，2006，
（9）：56.
[3] 高丽娟.黑木耳中多糖的测定[J].中国医药工业杂志 , 2003，（3）：
144.
[4] 于村，丁钢强，俞莎，等.香菇多糖测定的方法学研究[J].中国公
共卫生，2000，（3）：42.
[5] 管斌，丁友昉，谢来苏，等.还原糖测定方法的规范[J].无锡轻工
大学学报，1999，（3）：14 .
表 2 沸水水浴时间对灰树花总糖含量的影响
水浴时间/min 4 6 8 10 12 14
总糖含量/% 62.22 73.74 71.08 62.22 64.88 27.21
表 3 不同酒精倍数和不同酒精浓度对还原糖测定结果（%）的影响
10 6.53 9.19 7.75 10.04 9.72 8.55 6.00 9.74
25 5.42 6.14 5.29 6.34 5.74 5.54 5.88 6.21
40 7.38 8.44 8.02 11.36 7.06 7.17 11.21 11.23
50 9.36 12.08 9.09 15.21 8.69 11.75 8.56 12.55
酒精倍数
酒精浓度/%
65 70 75 80 85 90 95 100
静止时间/h 0 1 2 3 4
葡萄糖吸光值（A） 0.397 0.043 0.042 0.042 0.040
样品吸光值 （A） 0.029 0.031 0.030 0.030 0.029
表 4 冷却后不同静置时间对测定的影响
表 5 精密度测定结果
样品 1 2 3
吸光值（A） 0.040 0.042 0.041
表 6 回收率测定结果
样品 1 2 3
回收率/% 98.5 96.8 103.4
汽的畅通与否。一般以松散摆放在周转筐灭菌效果好，紧密堆
积在一起，培养基袋与包间的间隙太小，不利于蒸汽的流通，
影响灭菌效果。
3 小 结 使用塑料膜覆盖式常压灭锅首先应注意蒸汽的
发生量，分体式蒸汽发生器水槽的容积与灭菌物质的容积不
大于 1∶22，并保证灭菌锅内有充足的活蒸汽；其次灭菌时间充
分考虑培养基袋与包的大小及紧实度，再者保持 100℃ 14～16 h
的灭菌时间是彻底灭菌的关键；还应考虑培养基的含水量、灭
菌物排放等因素。
参考文献
[1] 黄毅.食用菌栽培［M］.北京：高等教育出版社，2004：151-161.
[2] 李宏伟.黑木耳代料栽培技术［M］.黑龙江哈尔滨：东北林业大学
出版社，2005：58-60.
[3] 李宏伟.黑木耳代料栽培中常见病虫害防治［J］，牡丹江师范学院
学报，2007，（3）：38.
[4] 孙永琴.绿色木霉生物学特性及防治的研究［J］.中国森林病虫，
2007，26（4）：7.
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（上接 P73）

福建省顺昌县高阳乡竹荪价高畅销
素有“雪裙仙子”、“菌中皇后”之美称的竹荪，由于菌体俊美飘逸，
营养丰富，香味浓郁，滋味鲜美，历来深受消费者青睐。 6月份以来，顺
昌县高阳乡的菇农们又逢竹荪收获的季节。
6 月 30 日，笔者在高阳村菇农范毕生的菇棚里，看到畦床上挨
挨挤挤地长满了戴着深绿色菌帽的竹荪， 菇农们正忙于采摘、 脱菌
盖、装篓。在他家的烤房内，菇农们正忙着整理挑选竹荪，然后整齐放
入烤筛中，最后端入烤箱烘干，一片繁忙丰收的景象。 范毕生高兴地
告诉笔者，2008 年顺昌县被评为“中国竹荪之乡”后，竹荪价高畅销，
竹荪价格达 120 元/kg 左右，而且刚一烘干就有许多古田客商前来收
购。 他今年种 1.5 亩竹荪，产量大概达到 150 kg，今年价格特别好，按
120 元/kg 计算，大概有 2 万元左右的收入。
为做大做优食用菌产业，加快农民增收致
富，高阳乡通过大力扶持、搞好优质服务、创新
流通服务组织和流通方式等措施，充分调动农
户的种植积极性。 据悉，预计今年产值将达到
2千万元以上。 （聂伟华 谢世平 文/摄）
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