全 文 ：— 48 — 现代中药研究与实践2014年第28卷第3期Chin Med J Res Prac,2014 Jun.Vol.28 No.3
基质混合的顺序、温度及搅拌速度对巴布剂的质
量也有影响，经反复试验得到的结果是下列物料依次
混合并搅拌均匀：溶胀好的明胶、阿拉伯胶、聚乙
烯醇，保湿剂，羧甲基纤维素钠，聚维酮，高岭土，
原料药；温度控制在 50℃～ 55℃；搅拌速度要适宜。
此方法在制作过程对基质搅拌容易，膏体无颗粒团
块，无拉丝，涂展性好；制得的巴布剂膏面平整光滑、
色泽均匀，无气泡（或气泡很少），黏度适宜。
参考文献
[1]　国家药典委员会 . 中国药典 [S]. 一部 . 北京 : 中国医药科技出版社 ,2010.
[2]　朱东芳，杨大凯 . 消炎镇痛巴布膏剂的制备研究 [J]. 中国实验方剂学杂
志，2010，16（10）：26-29.
[3]　林以宁，钱 方 . 复方黄柏抗炎止痛巴布剂的基质处方优选 [J]. 中国实验
方剂学杂志，2012，18（22）：56-58.
半仿生酶法提取拐枣七总生物碱工艺研究
薛璇玑，郭增军 *，戴柳江，席　可，李梦怡
（西安交通大学医学部药学院，陕西 西安 710061）
摘　要：目的　研究半仿生酶法从拐枣七中提取总生物碱的最佳工艺。方法　分别使用酶解法（选用
纤维素酶、β-葡聚糖酶、提取复合酶进行比较）、半仿生法和半仿生酶法对拐枣七中总生物碱进行提取，
以浸膏重量、总生物碱含量为指标，对比分析其提取效率。设定不同梯度提取料液比、水浴温度和提取时
间建立正交试验，考察最佳工艺参数。结果　半仿生酶法在拐枣七的总生物碱提取中得到的浸膏重量和提
取的生物碱含量都最高，具有高效、环保的特点，其最优提取条件为料液比 1:18，水浴温度 70℃和提取时
间 1.5h。结论　采用半仿生酶法提取拐枣七总生物碱方法高效可行，环保安全。
关键词：酶法 ; 半仿生法 ; 半仿生酶法 ; 总生物碱
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2014)03-048-04
Optimum Semi-Bionic Enzyme Extraction for Alkaloids from Hylomecon Japonica
XUE Xuan-ji,GUO Zeng-jun*,DAI Liu-jiang,XI Ke,LI Meng-yi
(School of Pharmacy of Xian Jiaotong University,Xian 710061,China)
Abstract:Objective Aim at optimizing the semi-bionic enzyme extraction method of total alkaloids from
Hylomecon japonica. Methods The extraction quantity of total alkaloids regarded as the investigated index,three
extraction methods of semi-bionic extraction,enzymic treatment and semi-bionic enzyme extraction were
收稿日期：2014-03-19
基金项目：国家自然科学基金（No.81172957）
作者简介：薛璇玑（1990-），女，在读硕士研究生，主要从事天然药物研
究工作。E-mail: xuanji0423@126.com。
* 通讯作者：郭增军（1963-），教授，博士生导师，主要从事中药及天然
药物资源及活性成分研究工作。Tel: 029-82655133 ；E-mail: guozj@mail.xjtu.
edu.cn。
DOI:10.13728/j.1673-6427.2014.03.019
— 49 —现代中药研究与实践2014年第28卷第3期Chin Med J Res Prac,2014 Jun.Vol.28 No.3
compared and the optimized extraction condition was investigated by orthogonal design. Results The extraction
quantity of total alkaloids from semi-bionic enzyme extraction was higher than those from other two extraction
methods and the optimum extracting condition was as follows:the total alkaloids were extracted with the solid-
liquid radio of 1:18,extraction time of 1.5h and extraction temperature of 70℃.Conclusion The optimum
technology is stable and suitable for the extraction of total alkaloids from Hylomecon Japonica.
Key words: semi-bionic extraction;enzymic treatment;semi-bionic enzyme extraction;total alkaloids
拐枣七是一种陕西山区民间流传较广的以“七”
字作俗名的草药，以其形状似拐枣而得名。来源于罂
粟科 (Papaveraceae) 荷青花属植物荷青花Hylomecon
Japonica(Thumb.) prantl var. subincisa, Fedde 的根，别
名为荷青花根；味苦，平 [1]；具有祛风湿，舒筋活络，
散瘀消肿，止血，止痛的功效；民间主要用于治疗风
湿性关节炎，跌打损伤等 [2]。
半仿生酶法是将半仿生法和生物酶结合起来提
取天然产物有效成分的一种新方法，通过设置不同
的 pH梯度，达到模拟药物在体内运转吸收的目的。
在提取的过程中加入适量的生物酶，生物酶作为一种
生物催化剂，对中草药细胞壁进行破坏，降低传质阻
力，同时生物酶最适反应温度为 50~60℃，温度相对
较低，对有效成分破坏较小，酶解后更加提高了提取
的效率 [3]。
目前，关于拐枣七生物碱提取的报道文献甚少，
仅有本课题组采用阳离子交换树脂提取总生物碱的
研究报道 [4]。为深入研究拐枣七总生物碱提取工艺，
本文采用半仿生酶法对其总生物碱进行提取工艺研
究，以酸性染料比色法测定的总生物碱含量为指标 [5,6]，
对比分析酶法和半仿生法 ，并采用正交试验方法
对半仿生酶法提取拐枣七总生物碱的工艺进一步优
化，为拐枣七总生物碱的提取工艺提供新的方法，并
为其进一步开发利用提供思路和依据。
1　仪器与试药
SHZ-D(III) 循环水式真空泵（河南省巩义市英
峪予华仪器厂）; 紫外分光光度计 UV-1800（日本
岛津公司）;KQ3200B 型超声波清洗器（昆山市超
声仪器有限公司）; 电热恒温水浴锅 ( 北京科伟永兴
仪器有限公司 );AE240S SNR 1221254114 电子天平
(METTLER TOLEDO)。
一水合柠檬酸 ( 分析纯 , 广东光华化学厂有限公
司 ); 柠檬酸三钠 ( 分析纯 , 西安化学试剂厂 ); 溴酚蓝
( 分析纯 , 天津市津北精细化工有限公司 ); 无水硫酸
钠 (分析纯 , 西安化学试剂厂 );白屈菜红碱对照品 (中
国药品生物制品检定所，批号 :111718-200501); 二氯
甲烷 ( 分析纯 , 广东光华化学厂有限公司 ); 硫酸 ( 分
析纯 , 北京试剂厂 ); 蒸馏水 ( 自制 ); 拐枣七药材 ( 购
于陕西柞水，经本课题组检定为罂粟科荷青花属植物
荷青花的根 )。
2　方法及结果
2.1　拐枣七总生物碱的提取
拐枣七中含有大量生物碱，如隐品碱、小檗碱等
[2]，为研究不同提取方法对生物碱提取效率的影响，
分别采用了酶法、半仿生法及半仿生酶法，对拐枣七
总生物碱进行了提取，方法如下：
2.1.1　酶法　　取粉碎后的拐枣七药材 10g 于 250mL
圆底烧瓶中，加入 0.05g 提取用酶，加入 100mL 磷
酸氢二钠 -柠檬酸缓冲溶液，调节 pH为 4.5 左右，
50℃水浴酶解 2 h，酶解后滤过，药渣加入磷酸氢
二钠 - 柠檬酸缓冲溶液，60℃水浴提取 2 次，每
次 2h，合并滤液，回收溶剂得流浸膏，将流浸膏于
80℃真空干燥，得干浸膏 1。
将上述方法中提取用酶分别更换为β-葡聚糖
酶和纤维素酶依次进行试验，分别得到干浸膏 2和干
浸膏 3。
2.1.2　半仿生法　　取粉碎后的拐枣七药材 10g 于
250mL 圆底烧瓶中，加入 100mL 磷酸氢二钠 -柠檬
酸缓冲溶液作为浸取剂，模拟胃肠道 pH，先调节 pH
值为 2.0，充分震荡摇匀，在 60℃下水浴提取 2h，过
滤。取滤渣加入磷酸氢二钠 -柠檬酸缓冲溶液，调
节 pH值为 7.5，充分震荡摇匀，在 60℃下水浴提取
2h，过滤。再取滤渣加入磷酸氢二钠 -柠檬酸缓冲
溶液，调节 pH值为 8.3，充分震荡摇匀，在 60℃下
水浴提取 2h，过滤。合并 3 次提取液，回收溶剂得
总流浸膏，将流浸膏于 80℃真空干燥，得干浸膏 4。
2.1.3　半仿生酶法　　取粉碎后的拐枣七药材 10g 于
250mL 圆底烧瓶中，加入 100mL 磷酸氢二钠 -柠檬
酸缓冲溶液作为浸取剂，调节 pH 为 2.0，充分震荡
均匀，60℃水浴 2h 后过滤。在滤渣中添加磷酸氢二
钠 -柠檬酸缓冲溶液，调节 pH为 4.5，加入 0.05g 提
取复合酶，充分震荡均匀，60℃水浴 2h 后过滤。在
滤渣中添加磷酸氢二钠 -柠檬酸缓冲溶液，调节 pH
为 7.5，60℃水浴 2h 后过滤。在滤渣中添加磷酸氢二
— 50 — 现代中药研究与实践2014年第28卷第3期Chin Med J Res Prac,2014 Jun.Vol.28 No.3
钠 -柠檬酸缓冲溶液，调节 pH为 8.3，60℃水浴 2h
后过滤。合并四次滤液，回收溶剂得到总流浸膏，将
流浸膏于 80℃真空干燥，得到干浸膏 5。
将上述方法中提取用酶分别更换为β-葡聚糖
酶和纤维素酶，分别试验，依次得到干浸膏 6和干浸
膏 7。
2.2　总生物碱含量测定
2.2.1　试液配制
溴酚蓝试液：0.1g 溴 酚 蓝 加入 0.05mol/L 的
NaOH 3mL，稀释至 200mL，即得。
柠檬酸 -柠檬酸钠缓冲液配置：将一水合柠檬
酸（210.14g/mol）与柠檬酸钠（294.10g/mol）配成 0.1mol/
L 溶液，再以 9.2:10.8 的比例混合即可得柠檬酸 -柠
檬酸钠缓冲液。
2.2.2　标准液制备
白屈菜红碱 1.0mg 置于 10mL 的量瓶中，用盐
酸 -70%甲醇（0.5:100）（v/v）定容，即得标准品溶液。
2.2.3　供试品制备
分别称取各干浸膏 8mg，溶于 6mL的 0.010 3mol/
L 的盐酸 -70% 甲醇（0.5:100）（v/v）中，即得供试
品溶液。
2.2.4　最大吸收波长的确定
分别取 0.5mL 标准液与供试液，加 5mL 柠檬酸 -
柠檬酸钠缓冲试液，2mL 溴酚蓝试液和 9.5mL 二氯
甲烷，分取二氯甲烷层，用无水硫酸钠脱水后，以二
氯甲烷作为对照，在 200~800nm 扫描波长，发现二
者均在 287nm 处有最大吸收。
2.2.5　方法学考察
2.2.5.1　白屈菜红碱线性试验　　分别取 0.5mL,1.0mL,
2.0mL,5.0mL,10mL 标准液至 10mL 量瓶中，用二氯甲
烷定容，分别取 0.5mL，加 5mL 柠檬酸 - 柠檬酸钠
缓冲试液，2mL 溴酚蓝试液和 9.5mL 二氯甲烷，取二
氯甲烷层，用无水硫酸钠脱水后，在 287nm 波长下
以二氯甲烷为空白对照测定吸光度。以吸收度 A(Y)
对白屈菜红碱浓度 C(μg/mL)（X）回归，得到方程为：
Y=0.134 9X+0.000 2，R²=0.999。
2.2.5.2　重复性试验　　精密吸取供试品溶液 0.5mL
五份，加 5mL 柠檬酸 - 柠檬酸钠缓冲试液，2mL 溴
酚蓝试液和 9.5mL 二氯甲烷，取二氯甲烷层，用无
水硫酸钠脱水后，在 287nm 波长下以二氯甲烷为空
白对照测定吸光度，得到RSD 为 0.193%, 说明重复
性良好。
2.2.5.3　加样回收率试验　　精密吸取供试品溶液
0.5mL 五份，加 5mL 柠檬酸 - 柠檬酸钠缓冲试液，
2mL 溴酚蓝试液和 9.5mL 二氯甲烷，取二氯甲烷层，
用无水硫酸钠脱水，分别取 3mL，加入 0.5mL 的标
准品 (2.5μg)，在 287nm 波长下以二氯甲烷为空白
对照测定吸光度，计算回收率，得到平均回收率为
98.90%，RSD 为 1.45%。
2.2.5.4　精密度试验　　取标准品溶液五份，分别取
0.5mL，加 5mL 柠檬酸 -柠檬酸钠缓冲试液，2mL 溴
酚蓝试液和 9.5mL 二氯甲烷，取二氯甲烷层，用无
水硫酸钠脱水，在 287nm 波长下以二氯甲烷为空白
对照测定吸光度，得到RSD 为 1.15%，证明仪器精
密度良好。
2.2.5.5　稳定性试验　　取标准品溶液 0.5mL，加
5mL 柠檬酸 - 柠檬酸钠缓冲试液，2mL 溴酚蓝试液
和 9.5mL 二氯甲烷，取二氯甲烷层用无水硫酸钠脱
水，分别放置 0,2,4,6,8h，在 287nm 波长下以二氯甲
烷为空白对照测定吸光度，得到RSD 为 1.95%，证
明稳定性良好。
2.2.6　样品含量测定
精密称取干浸膏 0.5mg 置于 5mL 量瓶中，用盐
酸 -70% 甲醇（0.5:100）（v/v）定容，得到样品液。
量取 5mL 样品液，向其中分别加 5mL 柠檬酸 -柠檬
酸钠缓冲试液、2mL 溴酚蓝试液和 9.5mL 二氯甲烷，
取二氯甲烷层，用无水硫酸钠脱水后，以二氯甲烷作
为参比，在 287nm 处测定吸光度。将所测定的吸光
度值带入到方法学考察中公式 Y=0.134 9X+0.000 2，
以白屈菜红碱为对照计算浸膏中总生物碱的含量。
2.3　不同方法提取拐枣七总生物碱结果比较分析
对半仿生法、酶法和半仿生酶提取法所提取的浸
膏称重及其总生物碱含量进行测定，得到数据结果见
表 1。
表 1 提取方法的比较结果
Tab.1 Comparison of extracting methods
提取方
法
标准半
仿生
提取复
合酶
纤维素
酶
β-葡
聚糖酶
半仿生
酶法（提
取复合
酶）
半仿生
酶法（纤
维素酶）
半仿生
酶法
（β-
葡聚糖
酶）
浸膏总
重（g） 5.5821 4.0919 4.9835 3.7264 7.2564 6.3274 6.1639
总生物
碱含量
（mg/g）
3.7 4.1 3.4 2.4 4.8 4.0 3.8
上述数据可以看出，无论是浸膏重量还是提出
的总生物碱的含量，半仿生酶法的效率都明显高于其
他几种方法。半仿生 -提取复合酶法得到的总生物
碱含量比半仿生法提高了 29.3%，比提取复合酶提取
法提高了 15.4% ；半仿生 -纤维素酶法得到的总生物
碱含量比半仿生法提高了 6.3%，比纤维素酶提取法
— 51 —现代中药研究与实践2014年第28卷第3期Chin Med J Res Prac,2014 Jun.Vol.28 No.3
提高了 15.2% ；半仿生 -β- 葡聚糖酶法得到的总生
物碱含量比半仿生法提高了 3.9%，比β-葡聚糖酶
法提高了 58%。由此可见，半仿生酶辅助提取法有
效地提高了总生物碱的提取率，显现了这种新型方法
提取的优越性。
而在酶的筛选上，半仿生 -提取复合酶法总生
物碱的提取含量明显高于半仿生 -纤维素酶法和半
仿生β-葡聚糖酶法的提取含量，因此选择使用提
取复合酶作为半仿生酶法的正交试验的提取用酶。
2.4　半仿生酶法提取拐枣七总生物碱的工艺优化
在对提取用的生物酶进行初步选择后，选定水浴
温度、提取时间和料液比作为考察的 3 个因素，每
个因素各取 3个水平 : 水浴温度 (50、60、70℃ )，提
取时间 (1.0、1.5、2.0h)，料液比 (1:10、1:14、1:18 )。
采用 L9(34) 正交表进行试验，以总生物碱提取率为考
察指标，考察因素间的最佳配比。设定参数及结果见
表 2。
表 2 半仿生酶法正交试验及其结果
Tab.2 Orthogonal design and results of Semi-Bionic enzyme extraction
试验号 A料液比 B水浴温度(℃ )
C 提取时间
（h）
总生物碱提取
含量（mg/g）
1 1:10 50 1.5 2.1
2 1:10 60 2.0 2.0
3 1:10 70 1.0 1.9
4 1:14 50 1.0 1.7
5 1:14 60 1.5 2.4
6 1:14 70 2.0 6.9
7 1:18 50 2.0 2.1
8 1:18 60 1.0 4.4
9 1:18 70 1.5 6.1
K1 2.0 2.0 4.5
K2 3.7 2.9 3.3
K3 4.2 5.0 2.1
R 2.2 3.0 2.4
由 表 2 的 极 差 分 析 可 以 清 晰 地 看 出，
RB>RC>RA，表明各因素对总生物碱提取率的影响从
大到小分别为：水浴温度、料液比、提取时间。半仿
生酶法最佳提取条件为料液比 1:18，水浴温度 70℃
和提取时间 1.5h，在此条件下，用半仿生酶法提取拐
枣七中总生物碱具有最大提取率。
2.5　最优条件验证试验
为验证正交实验结果，按照其优选的最佳条件进
行了 2次验证试验，结果得到拐枣七总生物碱提取率
分别为 0.73% 和 0.71%，平均提取率为 0.72%，证明
此工艺条件下生物碱提取率高，优选的工艺条件合
理，稳定可行。
3　结论
拐枣七是罂粟科荷青花属植物荷青花的根，其中
含有大量的生物碱，每种生物碱都有其重要的药理活
性。本文从提取拐枣七中总生物碱的角度出发，引用
了一种新型的提取技术，即半仿生酶法，这种技术经
过与其他几种方法进行比较，发现具有环保、高效的
特点。在确定半仿生酶法的优越性之后，我们对其
提取条件进一步进行了正交试验，发现不同的温度、
料液比以及提取时间值对提取效果影响较大，我们
选出了最适宜的一组条件，即料液比 1:18，水浴温度
70℃和提取时间 1.5h。这既节约了药材的使用量，又
使总生物碱能够充分的富集，这对于研究拐枣七内生
物碱化学成分及活性成分提供了一定的参考价值，并
进一步对于半仿生酶法用于其他植物提取有很重要
的影响和参考意义。
参考文献
[1]　郭增军 . 陕西七药 [M]. 西安 : 陕西科学技术出版社 ,2003,15(6):189-190.
[2]　程虎印 , 程江雪 , 卫　昊 , 等 . 太白七药拐枣七的研究进展 [J]. 陕西中医
学院学报 ,2011,34(4):94-95.
[3]　孙福东 , 孙秀梅 , 张兆旺 , 等 . 半仿生 -酶法提取半夏白术天麻汤中的
天麻素的含量测定 [J]. 中华中医药学刊 ,2008,26(8):1823.
[4]　韩燕霞 , 郭增军 , 张　卉 , 等 . 阳离子交换树脂提取拐枣七中总生物碱
的工艺研究 [J]. 中国现代应用药学 ,2012,29(7):624-626.
[5]　夏成才 , 肖玉良 , 王彩云 , 等 . 白屈菜总生物碱的提取工艺研究 [J]. 时珍
国医国药 ,2010,2(12):3216-3217.
[6]　徐国良 , 熊友文 , 孙立波 , 等 . 酸性染料比色法测定黄连中总生物碱的
含量 [J]. 江西中医学院学报 ,2010,22(4):32-34.
（责任编辑：金　欣）