全 文 :※工艺技术 食品科学 2016, Vol.37, No.06 7
稠李花色苷酶法制备及对H2O2诱导大鼠
胰岛素瘤细胞损伤的保护作用
刘 晓,曹向宇,李其久,孙宇航,杨思敏,于 慧,王纬宇,刘剑利*
(辽宁大学生命科学院,辽宁 沈阳 110036)
摘 要:目的:探究纤维素酶酶法制备稠李花色苷的最佳条件,并研究制备的稠李花色苷对H2O2诱导的大鼠胰岛素
瘤(Ins-1)细胞损伤的保护作用。方法:通过单因素试验和正交试验,优化得到酶法制备稠李花色苷的最佳条件;
稠李花色苷处理大鼠Ins-1细胞,进行形态学观察、3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-
thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]细胞活力实验、2’,7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯(2’,7’-dichloro
dihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针法检测细胞内活性氧实验研究稠李花色苷对H2O2诱导损伤的Ins-1
细胞保护作用。结果:纤维素酶法提取稠李花色苷的最佳条件为:温度60 ℃、纤维素酶添加量9 mg/g、料液比1∶35
(g/mL)、pH 3.5,此条件下稠李花色苷得率为(0.956±0.027) mg/g;形态学观察及MTT细胞活力实验显示,稠
李花色苷对H2O2诱导损伤的Ins-1细胞具有较强的保护作用,DCFH-DA法检测细胞内活性氧实验说明,稠李花色苷
能够显著地清除Ins-1细胞内的活性氧。结论:纤维素酶法制备稠李花色苷是一种有效的方法,制备的稠李花色苷对
H2O2诱导的大鼠Ins-1细胞损伤具有较强的保护作用。
关键词:花色苷;酶法;氧化损伤;保护;大鼠胰岛素瘤(Ins-1)细胞
Enzymatic Preparation of Anthocyanins from Padus racemosa Fruits and Protection against
Ins-1 Cell Damage Induced by H2O2
LIU Xiao, CAO Xiangyu, LI Qijiu, SUN Yuhang, YANG Simin, YU Hui, WANG Weiyu, LIU Jianli*
(Liaoning University Academy of Science, Shenyang 110036, China)
Abstract: Purpose: To optimize the extraction conditions for anthocyanins from Padus racemosa fruits by cellulose
hydrolysis, and to detect the protective effect of the extracted anthocyanins on H2O2-induced damage in Ins-1 cells. Methods:
The optimization was performed by single factor and orthogonal array experiments. The protective effect of Padus racemosa
anthocyanins on Ins-1 cells were examined by morphological observation, MTT assay and DCFH-DA fluorescent probe
method. Results: The optimal extraction conditions were achieved by carrying out cellulose hydrolysis at 60 ℃, pH 3.5 and
an enzyme dosage of 9 mg/g with a solid/liquid ratio of 1:35 (g/mL). Under these conditions, the yield of Padus racemosa
anthocyanins was (0.956 ± 0.027) mg/g. Padus racemosa anthocyanins protected Ins-1 cells from damage induced by H2O2
as indicated by morphological observation and MTT assay, and strongly scavenged reactive oxygen species in the DCFH-
DA fluorescent assay. Conclusions: Enzymatic hydrolysis is an effective method for extracting anthocyanins from Padus
racemosa, and the extracted anthocyanins strongly protect against H2O2-induced damage in Ins-1 cells.
Key words: anthocyanin; enzyme; oxidative damage; protection; rat insulinoma (Ins-1) cell
DOI:10.7506/spkx1002-6630-201606002
中图分类号:TS264.4 文献标志码:A 文章编号:1002-6630(2016)06-0007-06
引文格式:
刘晓, 曹向宇, 李其久, 等. 稠李花色苷酶法制备及对H2O2诱导大鼠胰岛素瘤细胞损伤的保护作用[J]. 食品科学, 2016,
37(6): 7-12. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201606002. http://www.spkx.net.cn
收稿日期:2015-06-10
基金项目:国家自然科学基金科学部主任基金项目(31240005);辽宁省高等学校优秀人才支持计划项目(LJQ2013002);
辽宁省高等学校科学研究一般项目(L2014007);辽宁省科技厅农业攻关计划项目(2011211001);
辽宁大学博士科研启动项目
作者简介:刘晓(1990—),男,硕士研究生,研究方向为食品生物技术。E-mail:liuxiao7879@163.com
*通信作者:刘剑利(1980—),男,副教授,博士,研究方向为食品生物技术。E-mail:liujianli119@163.com
8 2016, Vol.37, No.06 食品科学 ※工艺技术
随着生活水平的提高,健康饮食问题越来越受到人
们的关注,特别是应用越来越广泛的色素,更是成为功
能食品研究中的焦点。作为一种天然色素,花色苷由于
其具有的安全、无毒等特性已被广泛的应用到食品、保
健品、药品、化妆品等行业[1]。花色苷最早是Marguart于
1835年提出,现在已成为同类物质的总称[2],其为由花青
素与糖以糖苷键的形式结合而成的一类化合物[3]。由于花
色苷具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、降血糖等作用,现在
日益成为国内外研究的热点[4-7]。而稠李作为一种在东北
地区普遍生长的观赏性植物,具有广泛的应用基础和前
景。但是,目前国内外对稠李花色苷的研究较少,也主
要集中在其纯化及体外抗氧化活性的研究[8]。
按照世界卫生组织(World Health Organization,
WHO)2015年发布的统计报道,2012年,估计糖尿病
直接造成150万 例死亡,2014年,全球18 岁以上的成年
人中糖尿病的患病率估计为9%[9],预计2030年糖尿病将
成为第七位主要死因[10]。2型糖尿病(diabetes mellitus,
T2DM)以不断加重的胰岛β细胞凋亡和胰岛素分泌下降
为主要特征,显著和持续的高血糖造成的糖毒性是引起
或加重胰岛β细胞功能减退的重要原因之一[11]。进一步研
究发现高血糖浓度可以通过葡萄糖自氧化、蛋白酶C激
活、氨基己糖代谢、氧化磷酸化等生物化学途径产生大
量的活性氧(reactive oxygen species,ROS),从而诱发
氧化应激[12],氧化应激的重要靶点之一即为胰岛β细胞。
与其他组织细胞相比,胰岛β细胞含有抗H2O2氧化酶水平
较低,应对自由基产生过多与清除障碍导致的细胞氧化-
抗氧化系统失衡的能力较低,更易受到氧化应激损伤[13],
因而,保护胰岛β细胞免于氧化应激损伤,进而预防和治
疗糖尿病越来越受到重视[14]。本实验采用酶法制备稠李
花色苷,并根据形态学观察、细胞活力实验和对细胞内
ROS的检测实验来研究稠李花色苷对H2O2诱导损伤的大
鼠胰岛素瘤(Ins-1)细胞保护作用,以期为稠李花色苷
抑制胰岛细胞凋亡和功能减退作用提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
稠李果实在辽宁大学内采集并冷冻保存,经辽
宁大学生命科学院孙军副教授鉴定为蔷薇科稠李属稠
李(Padus racemosa);大鼠胰岛素瘤(Ins-1)细胞
由中国医科大学盛京医院提供;纤维素酶、N-乙酰半胱
氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC) 上海沪试化工有限公
司;2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2’,7’-dichlorodihydr
ofluorescein diacetate,DCFH-DA) 美国Sigma公司;
二甲基亚砜(dimethyl sulphoxide,DMSO) 国药集团
化学试剂有限公司;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基
四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-
tetrazolium bromide,MTT] 上海起发实验试剂有限公
司;氯化钾、H2O2、无水乙醇、醋酸钠、盐酸、丙酮等
均为国产分析纯。
1.2 仪器与设备
BS223S电子分析天平 北京赛多利斯仪器系统有
限公司;JW-3021HR高速冷冻离心机 安徽嘉文仪器装
备有限公司;DZKW-D-6数显电热恒温水浴锅 上海申
光仪器仪表有限公司;OLYMPUS DP73荧光倒置显微镜
普赫光电(上海)科技有限公司;721N可见光分光
光度计 上海精密科学仪器有限公司;CHRIST冷冻干
燥机 北京鑫盛鸿阳科技有限公司;RE-52CS-2型旋转
蒸发仪 上海虹昕电子仪器仪表有限公司;SW-CJ-2FD
超净工作台 苏州净化设备有限公司;Sunrise全自动酶
标仪 瑞士帝肯公司。
1.3 方法
1.3.1 花色苷得率的测定
参照邓素芳等[15]的方法,花色苷得率按以下公式计算:
εhm˄A0ˉA1˅hVhnhMC/˄mg/g˅˙
式中:C为花色苷得率;A0、A1分别为pH 1.0、4.5
时花色苷在520 nm波长处的吸光度;V为提取溶液总体
积/mL;n为比色稀释倍数;M为矢车菊-3-葡萄糖苷的相
对分子质量;ε为矢车菊-3-葡萄糖苷的消光系数26 900;
m为稠李果实质量/g。
1.3.2 酶法制备稠李花色苷
参照鲍诚等[16]的方法,略有改进,研究不同酶解温
度、酶添加量、料液比、pH值对纤维素酶提取花色苷的
影响。
1.3.2.1 酶法制备稠李花色苷的单因素试验
称取一定量的冷冻干燥之后的稠李果实粉末,按照
料液比1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50(g/mL)的比
例,分别在pH 2、3、4、5、6的缓冲溶液中加入1、2、
4、8、16 mg/g的纤维素酶,并分别在30、40、50、60、
70 ℃条件下水浴反应60 min,4 000 r/min离心15 min,分
离取上清液,进行比色。
1.3.2.2 酶法制备稠李花色苷的正交试验
根据单因素试验的最佳结果,以料液比1∶30(g/mL)、
LIU Xiao, CAO Xiangyu, LI Qijiu, et al. Enzymatic preparation of anthocyanins from Padus racemosa fruits and protection
against Ins-1 cell damage induced by H2O2[J]. Food Science, 2016, 37(6): 7-12. (in Chinese with English abstract)
DOI:10.7506/spkx1002-6630-201606002. http://www.spkx.net.cn
※工艺技术 食品科学 2016, Vol.37, No.06 9
pH 3、酶解温度60 ℃、酶添加量8 mg/g作为中心组合试
验因素,按L9(3
4)正交表对酶法提取稠李花色苷的工艺
进行研究,确定最佳工艺参数,并在最佳工艺条件下进
行验证实验。
1.3.3 稠李花色苷的纯化
参照刘剑利等[8]的方法,用AB-8大孔树脂对稠李花
色苷进行纯化。
1.3.4 对H2O2诱导Ins-1细胞损伤的保护作用
1.3.4.1 稠李花色苷对H2O2诱导的Ins-1细胞的损伤模型
形态学观察
将细胞接种到96 孔板内,在37 ℃的体积分数5%
的CO2培养箱中培养24 h,然后,设置3 个实验组,分
别为正常对照组,H2O2处理组和花色苷处理组,其中
H2O2处理组加入0.5 mmol/L的H2O2,花色苷处理组加入
0.5 mmol/L的H2O2和50 μg/mL的稠李花色苷,继续培养
24 h后,在显微镜下观察细胞形态。
1.3.4.2 稠李花色苷对H2O2诱导Ins-1细胞损伤模型的细
胞存活率影响
参照文献[17],将Ins-1细胞接种到96 孔板中,每孔
200 μL,培养24 h后,向其中加入纯化后的花色苷。实
验分为阳性对照组、H2O2处理组、阴性对照组和花色苷
处理组,其中阳性对照组加入200 μg/mL的NAC,花色
苷处理组分别加入0.5 mmol/L的H2O2和12.5、25、50、
100、200 μg/mL的稠李花色苷,处理1 h后,H2O2处理
组加入0.5 mmol/L的H2O2,继续培养4 h,MTT法检测细
胞活力。
1.3.4.3 稠李花色苷对H2O2诱导损伤的Ins-1细胞内ROS
的影响
参考刘剑利等[8]方法,将Ins-1细胞进行种板,24 h后
用0.5 mmol/L的H2O2处理,花色苷组0.5 mmol/L的H2O2和
0.05 mg/mL的花色苷处理Ins-1细胞,除去细胞培养液,
用磷酸盐缓冲液进行淋洗,加入20 μmmol/L的DCFH-
DA,温育30 min后再次淋洗,加入0.5 mL甲醇后,
于-20 ℃固定30 min,再次淋洗,加入4 ℃预冷的丙酮
0.5 mL,进行固定,每5 min一次用磷酸盐缓冲液进行淋
洗3 次后,进行封片观察,检测稠李花色苷对H2O2诱导
损伤的Ins-1细胞内ROS的影响。
1.4 数据分析
实验重复3 次,结果取 ±s,并用SPSS 19.0软件对
数据进行统计分析。
2 结果与分析
2.1 稠李花色苷含量的测定
根 据 计 算 公 式 , 稠 李 花 色 苷 的 最 终 得 率 为
(0.956±0.027) mg/g,与超声波提取稠李花色苷的得
率相比较[18],提取率提高约15.18%。
2.2 单因素试验结果
2.2.1 酶解温度对酶法制备稠李花色苷得率的影响
30 40 50 60 70
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8㣡㢢㤧ᗇ⦷/ ˄mg/g ˅ 䞦䀓ᓖ/ć
图 1 酶解温度对稠李花色苷得率的影响
Fig.1 Effects of hydrolysis temperature on the extraction yield of
Padus racemos anthocyanins
由图1可以得出,在一定温度范围内,稠李花色苷的
得率随着温度的升高而升高,当温度到达60 ℃时,花色
苷得率达到最大值,之后,花色苷得率反而降低。这可
能是因为酶活性受到温度影响,在适宜的温度环境中,
酶的活性会随着温度的升高而增加,因而得率也随之增
加;当达到最适温度后,随着温度升高酶活性降低,因
此,稠李花色苷的得率下降[19]。
2.2.2 酶添加量对酶法制备稠李花色苷得率的影响
20 4 6 8 10 12 14 16
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8㣡㢢㤧ᗇ⦷/ ˄mg/g ˅ 䞦࣐䟿/˄mg/g˅
图 2 酶添加量对稠李花色苷得率的影响
Fig.2 Effects of enzyme dosage on the extraction yield of
Padus racemos anthocyanins
由图2可知,在一定酶添加量的范围内,稠李花色
苷得率随着酶添加量的增加而增加,在当酶添加量达
到8 mg/g时,花色苷得率达到最大值,继续增加酶添加
量,花色苷得率反而降低。原因可能是:酶添加量小于
最佳值时,酶解反应没有完全,底物较多,酶与底物未
能充分接触,部分细胞壁未能破坏,花色苷释放较少。
当酶添加量为最佳值时,酶解反应较彻底,稠李花色苷
得率较高[20]。
10 2016, Vol.37, No.06 食品科学 ※工艺技术
2.2.3 料液比对酶法制备稠李花色苷得率的影响
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8㣡㢢㤧ᗇ⦷/ ˄mg/g ˅
1IJ10 1IJ20 1IJ30 1IJ40 1IJ50ᯉ⏢∄˄g/mL˅
图 3 料液比对稠李花色苷得率的影响
Fig.3 Effects of solid/liquid ratio on the extraction yield of
Padus racemos anthocyanins
由图3可知,在一定范围内,稠李花色苷的得率随着
提取液用量的增加而增加,当料液比达到1∶30(g/mL)
时,花色苷得率达到最大值,之后随着提取液用量的增
加,花色苷得率反而下降。这可能是由于:在一定的范
围内,当酶添加量固定时,随着提取液用量的增加,酶
与底物充分接触,纤维素酶对细胞壁充分降解,使细胞
组织迅速破坏,花色苷得以释放。但是随着提取液用量
的增加,酶的浓度随之减少,酶与底物不能充分接触,
酶解反应速率随着降低[21]。
2.2.4 酶解pH值对酶法制备稠李花色苷得率的影响
0.65
0.70
0.75
0.80
0.85
0.90㣡㢢㤧ᗇ⦷/ ˄mg/g ˅
2 3 4 5 6
酶解pH
图 4 酶解pH值对稠李花色苷得率的影响
Fig.4 Effects of hydrolysis pH on the extraction yield of
Padus racemos anthocyanins
由图4可知,随着提取液pH值的增大,稠李花色苷得
率呈现先增大后减小的趋势,其中在pH值为3时花色苷的
得率达到最大。可能是因为pH值影响酶的活性,在最适
pH值条件下,酶解反应达到最大速度,而高于或低于最
适pH值,都会降低酶活性,随之,稠李花色苷得率也会
下降[3]。
2.3 正交试验结果
通过对正交试验的结果进行方差分析(表1、2),
得到4 种因素对花色苷得率的影响均极显著,正交试验
结果表明,各因素对稠李花色苷得率的影响程度依次为
料液比>pH值>酶添加量>酶解温度,其最佳工艺为
A2B3C3D3,即酶解温度60 ℃、酶添加量9 mg/g、料液比
1∶35(g/mL)、pH 3.5。
根据得到的最佳工艺条件进行验证实验,稠李花色
苷的得率为(0.956±0.027) mg/g,比正交试验中各试
验组得率都高,证明酶解温度60 ℃、酶添加量9 mg/g、
料液比1∶35(g/mL)、pH 3.5是纤维素酶法制备稠李花
色苷的最佳条件。
表 1 正交试验设计及结果
Table 1 Orthogonal array design with experimental results
试验号 A酶解 温度/℃
B酶添加量/
(mg/g)
C料液比
(g/mL) D pH
花色苷
得率/(mg/g)
1 55 7 1∶25 2.5 0.656±0.012
2 55 8 1∶30 3.0 0.797±0.023
3 55 9 1∶35 3.5 0.932±0.009
4 60 7 1∶30 3.5 0.812±0.015
5 60 8 1∶35 2.5 0.874±0.015
6 60 9 1∶25 3.0 0.761±0.011
7 65 7 1∶35 3.0 0.911±0.013
8 65 8 1∶25 3.5 0.735±0.012
9 65 9 1∶30 2.5 0.789±0.015
k1 0.795 0.793 0.717 0.773
k2 0.816 0.802 0.799 0.823
k3 0.812 0.827 0.906 0.826
R 0.021 0.034 0.189 0.053
表 2 正交试验结果方差分析
Table 2 Analysis of variance of the orthogonal array design
方差来源 平方和 自由度 均方 F值 P值
A酶解温度 0.003 2 0.001 6.969 <0.01**
B酶添加量 0.006 2 0.003 13.920 <0.01**
C料液比 0.165 2 0.082 398.723 <0.01**
D pH 0.017 2 0.009 42.272 <0.01**
注:**.差异极显著,P<0.01。
2.4 稠李花色苷对H2O2诱导Ins-1细胞损伤的保护作用
2.4.1 稠李花色苷对H2O2诱导的Ins-1细胞的损伤模型形
态学观察
A B
C
A.正常对照组;B. 0.5 mmol/L H2O2处理组;C. 50 μg/mL花色苷处理组。
图 5 稠李花色苷对H2O2诱导损伤Ins-1细胞形态学的影响
Fig.5 Morphological observation of the protective effect of
Padus racemos anthocyanins on H2O2-induced damage in Ins-1 cells
从图5可以看出,正常组的细胞贴壁状态良好,边缘
清晰,大小均匀,贴壁细胞数目较多(图5A),而经过
H2O2处理后,明显出现细胞变圆收缩,体积变小,折光
※工艺技术 食品科学 2016, Vol.37, No.06 11
性变低,贴壁不良等状况(图5B),但是,在50 μg/mL
的稠李花色苷处理组中,细胞形态具有明显的改变,同
时细胞数目也具有一定的恢复,说明稠李花色苷具有良
好的保护H2O2诱导损伤Ins-1细胞的作用。
2.4.2 稠李花色苷对H2O2诱导Ins-1细胞损伤模型的细胞
存活率影响
0
20
40
60
80
100ぐᵾ㣡㢢㤧 㣡㢢㤧༴⨶㓴NAC0.5 mmol/L H2O2 ˉˉˉ ˉ 12.5 25 50 100 200 200 μg/mLμg/mL䱣ᙗሩ➗㓴ˉ ˉ ˉ ˉ ˉ ˉˇ ˇ ˇ ˇ ˇ ˇ ˇ䱤ᙗሩ➗㓴 H2O2组㓶㜎ᆈ⍫⦷
/%
##
** **
** **
** **
+.存在;—.不存在;##.与阴性对照组相比差异显
著,P<0.01;**.与H2O2组相比差异显著,P<0.01。
图 6 稠李花色苷对H2O2诱导的Ins-1细胞的损伤模型的细胞存活率影响
Fig.6 Effect of Padus racemos anthocyanins on viability of Ins-1 cells
with damage induced by H2O2
从图6可以看出,稠李花色苷能够有效地保护H2O2诱
导的Ins-1细胞损伤,当加入H2O2后,细胞的存活率变为
48.78%,与正常对照组相比差异极显著(P<0.01),而
经过稠李花色苷处理后,细胞存活率随着花色苷质量浓度
的升高而上升,且呈现较好的线性关系,在质量浓度为
200 μg/mL时细胞的存活率为86.64%,与H2O2组相比差异
极显著(P<0.01)。阳性对照药NAC同样表现出抗氧化
损伤的效果,在200 μg/mL质量浓度条件下其细胞存活率
为80.7%。王婧茹等[22]通过MTT实验得到,氧化损伤模型
组Ins-1 β细胞活力显著下降至(53.6±3.2)%,1 mmol/L
的番石榴酸处理后Ins-1 β细胞活力升高至(65±4.0)%。
2.4.3 稠李花色苷对H2O2损伤的Ins-1细胞内ROS的
影响
100 μm 100 μm
A B
100 μm
C
A.正常Ins-1细胞;B. 0.5 mmol/L H2O2处理Ins-1细胞;
C. 0.5 mmol/L H2O2、0.05 mg/mL花色苷处理Ins-1细胞。
图 7 稠李花色苷对H2O2损伤的Ins-1细胞内ROS的影响
Fig.7 Effect of Padus racemosa anthocyanins on ROS activity in Ins-1 cells
从图7可以得出,与正常组的Ins-1细胞相比,H2O2
处理组的Ins-1细胞的荧光强度显著增强(图7B),说明
H2O2组具有较高的细胞内ROS水平。当加入0.05 mg/mL
的稠李花色苷进行处理后,荧光强度显著降低(图
7C),说明稠李花色苷能够显著降低Ins-1细胞的ROS水
平。在前期实验中,本研究组已得出稠李花色苷能够降
低神经细胞N2A内的ROS水平,杨莉等
[23]通过竹节参根
茎粉对SH-SY5Y细胞进行细胞内ROS检测,得到H2O2组
细胞内ROS含量与竹节参根茎粉处理组细胞内ROS含量
差异极显著,Ullah等[24]通过荧光的ROS实验同样证明花
色苷可降低细胞内的ROS水平,但其确切的作用机制还
有待进一步研究。
3 结 论
本研究通过单因素和正交试验最终确定了酶法制备稠
李花色苷的最佳条件为酶解温度60 ℃、酶添加量9 mg/g、
料液比1∶35(g/mL)、pH 3.5,此条件下其得率为
(0.956±0.027) mg/g;通过形态学观察及MTT细胞活
力实验证明稠李花色苷在H2O2诱导损伤的Ins-1细胞中具
有较强的保护作用,同时,清除ROS的DCFH-DA实验也
证明其能够显著地清除细胞内的ROS。朱文赫等[25]使用
越橘花色苷处理血管内皮细胞,同样得到越橘花色苷具
有保护作用;林丽等[26]通过实验得到黑果枸杞花色苷对
氧化低密度脂蛋白所损伤的人脐静脉内皮细胞具有保护
作用,其机制可能与抗氧化作用有关。以上结果表明
酶法制备稠李花色苷是一种有效的方法,制备的稠李
花色苷经纯化后具有较好地保护H2O2诱导的Ins-1细胞
损伤的作用,但其确切的机制还有待进一步研究;本
实验采用Ins-1进行有关细胞水平的实验,这就为后期
研究稠李花色苷是否在动物体内具有降血糖的功效以
及是否由于氧化应激导致血糖降低的机制研究提供了
一定的实验依据。
参考文献:
[1] 惠秋沙. 天然色素的研究概况[J]. 北方药学, 2011, 8(5): 3-4.
[2] RENAND S, ZORGELIL M. Wine alcohol, platelets and the French
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