全 文 ：子苷转移率、制备所得的栀子苷提取物的纯度等重
要参数变化不大。但放大实验过程中，需要调整水
的冲洗用量和 20%乙醇冲洗用量。实验过程中发
现树脂柱填充的紧密程度会影响到水的冲洗用量和
20%的乙醇冲洗用量，其二者的用量对于不同的填
充柱可能需要进行适当的调整，根据实验经验，水的
冲洗用量可根据冲洗至流出液为无色来确定，20%
乙醇的洗脱液可根据洗脱液中栀子苷洗脱率来确
定，从而提高栀子苷的转移率，并缩短冲洗时间。
3． 2 树脂使用后，还有一些强吸附性杂质成分保留
于树脂床中，这些杂质的存在会影响在下一次使用
过程中对欲分离成分的吸附。因此，必须对树脂进
行再生处理，将一些强吸附的成分除去。本研究通
过对比 95%乙醇再生和酸碱再生的效果，发现用
D301R 大孔树脂纯化栀子苷时，采用酸碱再生工
艺。同时对 D301R 大孔树脂纯化栀子苷连续使用
次数进行考察，大孔树脂可连续再生 7 次，并投入使
用，每次再生后可连续使用 2 次，考虑到大孔树脂首
次可连续使用 4 次，故采用 D301R大孔树脂纯化栀
子提取液中的栀子苷，可连续使用 16 次后，大孔树
脂不能通过酸碱再生重新投入使用。
3． 3 D301R 大孔树脂精制纯化栀子苷过程中，栀
子苷的转移率为 54． 1% ～ 80． 7%，制备所得栀子苷
的纯度为 73． 2% ～ 85． 2%，工艺考察稳定，适于工
业化生产。
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酶法提取紫背天葵多糖工艺的研究
覃 亮， 董 基， 路 宽
(肇庆学院化学化工学院，广东 肇庆 526061)
收稿日期:2011-02-12
基金项目:广东高校工程技术开发中心建设项目(GCZX-B0902)
作者简介:覃 亮(1982—) ，男，硕士，讲师，研究方向:天然药物有效成分研究。Tel:13760018273
摘要:目的 研究纤维素酶法提取紫背天葵多糖的工艺。方法 采用苯酚-硫酸法检测多糖含量，以多糖收率为指标选
择适当的酶解温度、酶解时间和加酶量，通过正交试验确定酶法提取紫背天葵多糖的最佳条件。结果 最佳提取工艺
为:酶解温度为 55 ℃，酶解时间 3 h，加酶量 3 %。结论 该工艺合理、简单，多糖提取率高。
关键词:酶法;紫背天葵;多糖;提取
中图分类号:R284． 2 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2011)12-2082-03
Extraction of polysaccharide from Begonia fimbristipula by enzyme method
QIN Liang， DONG Ji， LU Kuan
(School of Chemistry ＆ Chemical Engineering，Zhaoqing College，Zhaoqing 526061，China)
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第 33 卷 第 12 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
December 2011
Vol． 33 No． 12
KEY WORDS:enzyme method;Begonia fimbristipula;polysaccharide;extraction
紫背天葵(Begonia fimbristipula) ，是秋海棠科秋
海棠属的多年生无茎草本植物，为中国的特有物种，
富含钙、铁等［1］，营养价值较高。药学试验表明，紫
背天葵性味甘、凉，有清热解毒、降血糖、活血止咳、
消炎、抗恶性细胞增长［2］等药用价值。多糖是其营
养成分之一，近年来发现许多中药富含活性多糖成
分［3］。目前我国对紫背天葵化学成分的研究多见
于色素［4-5］等方面，对其多糖的研究尚不多见。相比
于常规酸、碱浸提法及热水浸提法［6］，采用酶法提
取植物多糖类物质，具有条件温和、操作简单等优
点。本实验选用纤维素酶对紫背天葵多糖的提取工
艺进行研究，以水溶性多糖提取率为指标，建立酶法
提取紫背天葵多糖的最佳工艺，为紫背天葵多糖的
深入研究提供理论基础。
1 材料与仪器
紫背天葵 (购自肇庆鼎湖堂，生产批号:
20101110) ;葡萄糖对照品(Sigma 公司) ;纤维素酶
(和氏璧生物科技有限公司) ;石油醚(60 ～ 90 ℃) ，
95 %乙醇，苯酚，硫酸均为分析纯;实验用水均为蒸
馏水。
ESJ120-4 型电子天平(沈阳龙腾电子有限公
司) ;UV /VIS 916 型紫外分光光度计(澳大利亚
GBC公司) ;真空干燥箱(上海博讯实业有限公司) ;
800 型离心机(深圳市沙头角国华仪器厂)。
2 实验方法
2． 1 多糖的提取 紫背天葵用粉碎机粉碎至能通
过 40 目筛，以石油醚为溶剂，索氏提取器回流脱脂，
挥干溶剂后称取一定量的紫背天葵，以酶解温度、酶
解时间、加酶量为可变因素，酶解提取紫背天葵多
糖。酶解后迅速加热至 90 ℃ 10 min 灭酶活，离心 5
min，取上清，加入 3 倍体积的 95 %乙醇 4 ℃静置过
夜，取出，离心 5 min，所得沉淀依次用无水乙醇、丙
酮、无水乙醚各洗涤 3 次［7］，离心 5 min，收集沉淀，
真空干燥，即得紫背天葵多糖。
2． 2 测定方法 采用苯酚-硫酸法［8］检测多糖含
量，根据单因素试验结果选取因素水平进行正交试
验，获得提取多糖的最佳条件。
2． 3 标准曲线的绘制［9］ 精密称取葡萄糖对照品
100 mg，置于 100 mL量瓶中，加水适量使溶解，稀释
至刻度，摇匀。精密吸取 10 mL 置于 100 mL 量瓶
中，加水稀释至刻度，即得 0． 1 mg /mL 的葡萄糖对
照液。精密吸取葡萄糖对照液液 0． 2、0． 4、0． 6、
0． 8、1． 0 mL，分别置于 25 mL 具塞试管中，补水至
2． 0 mL，然后加入 1． 0 mL 5%苯酚溶液，摇匀，迅速
加入浓硫酸 5． 0 mL，摇匀后室温放置 20 min，同时
用 2． 0 mL蒸馏水做空白，于 490 nm处测定吸光值。
以吸收值为纵坐标，浓度为横坐标，作标准曲线，得
标准曲线拟合方程 Y = 7． 932 9X － 0． 005 6(R2 =
0． 998 1)。结果表明葡萄糖溶液在 0． 01 ～ 0． 05 mg /
mL线性关系良好。通过测定样品的吸光度，代入回
归方程，计算多糖的含量。
3 结果与讨论
3． 1 单因素实验
3． 1． 1 酶解温度对多糖提取率的影响 称取 20 g
紫背天葵粉末 5 份，对原料脱脂后，酶解时间 2 h，加
2 %纤维素酶，考察不同酶解温度(45，50，55，60，65
℃)对多糖提取率的影响。
图 1 酶解温度对多糖提取率的影响
Fig． 1 The influence of hydrolyzing temperature
on yield of polysaccharide
由图 1 可知，随着酶解温度的增加，多糖提取率
也逐渐增加，55 ℃时提取率达到最高值，然后随着
温度的升高，提取率迅速下降，因此最适宜的酶解温
度在 55 ℃左右。
3． 1． 2 酶解时间对多糖提取率的影响 酶解温度
55 ℃，加 2 %纤维素酶，考察不同酶解时间(1． 0，
1． 5，2． 0，2． 5，3． 0 h)对多糖提取率的影响。
图 2 酶解时间对多糖提取率的影响
Fig． 2 The influence of hydrolyzing time on
yield of polysaccharide
由图 2 可知，随着酶解时间的增加，多糖提取率
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中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
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也逐渐增加。当酶解时间达 2． 5 h 时，多糖提取率
已趋于相对稳定，因此最适宜的酶解时间在 2． 5 h
左右。
3． 1． 3 加酶量对多糖提取率的影响 酶解温度 55
℃，酶解时间 2． 5 h，考察不同加酶量(1%，1． 5%，
2%，2． 5%，3 %)对多糖提取率的影响。
图 3 加酶量对多糖提取率的影响
Fig． 3 The influence of the cellulase quality
score on yield of polysaccharide
由图 3 可知，随着加酶量的提高，多糖提取率也
逐渐增加。加酶量在 2． 5 %时多糖提取率趋于稳
定，因此最适宜的加酶量在 2． 5 %左右。
3． 2 多糖提取工艺的优化 在上述单因素试验的
基础上，设计 L9(3
4)正交表，选择酶解温度、酶解时
间和加酶量 3 个因素设计正交试验，选用因素及水
平见表 1，结果见表 2(正交试验重复做 3 次，结果取
3 次测定的平均值)。
表 1 正交设计试验因素水平
Tab． 1 The factor and level table of L9(3
4)
水平 A酶解温度 / ℃ B 酶解时间 /h C加酶量 /%
1 50 2 2
2 55 2． 5 2． 5
3 60 3 3
表 2 正交试验结果 (n =3)
Tab． 2 Orthogonal design and results (n =3)
编号 A B C 多糖提取率 /%
1 1 1 1 6． 55
2 1 2 2 8． 04
3 1 3 3 10． 25
4 2 1 2 8． 13
5 2 2 3 11． 39
6 2 3 1 7． 32
7 3 1 3 9． 09
8 3 2 1 7． 33
9 3 3 2 10． 16
k1 8． 280 7． 923 7． 067
k2 8． 947 8． 920 8． 777
k3 8． 860 9． 243 10． 243
R 0． 667 1． 320 3． 176
由表 2 可知，极值 R可以看出 3 个因素对多糖
提取含量的影响，其影响主次顺序是 C ＞ B ＞ A，最
佳工艺条件为 A2B3C3，即酶解温度为 55 ℃，酶解时
间 3 h，加酶量 3 %。由表 3 可知，加酶量 C 对多糖
提取率的影响具有显著性意义，酶解温度 A、酶解时
间 B对多糖提取率的的影响不明显。
表 3 方差分析
Tab． 3 Variance analysis
因素 偏差平均和 自由度 F比值 P
A 0． 788 2 1． 000 ＞ 0． 05
B 2． 840 2 3． 604 ＞ 0． 05
C 15． 166 2 19． 246 ＜ 0． 05
误差 0． 79 2
F0． 01(2，2)= 99． 0;F0． 05(2，2)= 19． 0
3． 3 验证实验 按照最佳工艺条件进行 3 批验证
实验，多糖提取率分别为 11． 62 %，11． 58 %，
11． 60 %，其平均值为11． 60%，实验结果比较稳定。
4 讨论
本实验对紫背天葵用石油醚做了脱脂处理，降
低了多糖检测中脂溶性物质对实验结果的影响。水
提后的醇沉物依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚各洗
涤，是为了排除单糖、低聚糖及苷类成分的干扰。采
用酶法提取多糖，与传统的热水浸提法［10］相比，酶
法工艺简单，条件温和，耗能低。本实验优化了酶法
提取紫背天葵多糖的工艺，为进一步开发紫背天葵
的药用价值提供了实验依据。
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