全 文 ：185
第 1 2 卷 第 1 期
2010 年 1 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 12 No. 1
Jan . ，2010
甘木通（Clematis filamentosa Dunn）又名丝铁
线莲，民间俗称“眼蛇药”，为毛茛科铁线莲属植
物，性味甘、微寒，归肝经，具有清热平肝、活血通
脉、镇静安神、降压等功效，药用叶、茎，以甘木通
为原料生产的“冠心康片”临床治疗冠心病心绞
痛、高血压等疗效突出 [1]。研究发现甘木通含黄酮
类、糖类、甾体化合物和酚性化合物等成分。黄酮
类化合物广泛存在于植物中，具有多种多样的生
理活性，如防治心脑血管疾病、降低血清胆固醇、
防癌抗癌、调节免疫、抗衰老、抗菌抗病毒、抗炎抗
过敏、止血镇痛等 [2]。黄酮类化合物是甘木通中的
主要有效成分之一，本实验采用正交试验法对甘
木通总黄酮的提取条件进行研究，为甘木通有效
成分的提取提供参考。
1 实验材料
1.1 主要实验仪器
FW-177 型中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器
有限公司）；202AR-2 型电热干燥箱（上海申光仪
器仪表有限公司）；HH-S28S 型恒温水浴锅（金坛
市大地自动化仪器厂）；GM-0.33H 型隔膜真空泵
（天津市腾达过滤器件厂）；RE-52AA 型旋转蒸发
器（上海雅荣生化设备仪器有限公司）；RS-232 Ⅱ
型精密电子天平（上海恒平科学仪器有限公司）；
SpectrumLab 22PC 型可见分光光度计（上海校光技
术有限公司）。
1.2 实验药材与试剂
甘木通干燥药材（由广东雷霆国药有限公司提
供，并经韶关市药品检验所江兰英所长鉴定）；芦
丁标准品 ( 上海国药集团化学试剂有限公司 )；硝酸
铝、亚硝酸钠、氢氧化钠、石油醚、无水乙醇等均为分
析纯（天津市大茂化学试剂厂 )。
2 实验方法与结果
2.1 标准曲线的制备
准确称取干燥至恒重的芦丁对照品 15.01mg，
加浓度为 70% 的乙醇溶解并定容至 100mL，配制成
0.1501mg/mL 的芦丁对照品溶液。准确量取对照品
溶液 0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL 分别置于 10mL 容
量瓶中，补充 70％的乙醇至 5mL，各依次加入 5％亚
硝酸钠溶液 0.3mL，振摇后放置 5min；加入 10％硝
酸铝溶液 0.3mL 摇匀后放置 6min；加入 1.0mol/L 氢
正交试验法研究甘木通总黄酮的提取条件
胡宗礼，黄晓萍，陈珺霞
（韶关学院英东生物工程学院，广东 韶关 512005）
摘 要：目的：用正交试验法考察甘木通总黄酮的最佳提取条件。方法：以芦丁为对照品建立标准曲线方程用
于测定甘木通总黄酮含量，以乙醇为溶剂分别考察温度、乙醇浓度、提取时间、药材/溶剂比例及提取次数等因素对
甘木通总黄酮提取率的影响，据此设计四因素三水平正交试验，系统考察甘木通总黄酮的最佳提取条件。结果与结
论：药材与70％乙醇按照1：20的比例，在90℃回流提取1h共2次，甘木通总黄酮提取率可达93.27％。
关键词：甘木通；总黄酮；提取条件；正交试验
中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2010) 01- 0185- 02
收稿日期：2009-08-01
基金项目：韶关市技术创新项目（2007-10）
作者简介：胡宗礼（1965-），男，湖北咸宁人，副教授，研究方向：中药药理学。
Study the Condition for Extraction of Total Flavoniods from
Clematis Filamentosa Dunn by Orthogonal Test
HU Zong-li，HUANG Xiao-ping，CHEN Jun-xia
（Yingdong Bioengineering School of Shaoguan College, Shaoguan 512005, Guangdong, China）
Abstract：Objective: To study the optimum technology of extracting total flavoniods from Clematis
filamentosa Dunn by orthogonal test.Methods: Taking rutin as a comparison to make standard curve to
determinate the content of total flavoniods.The factors that affect extracting rate of total flavoniods in Clematis
filamentosa Dunn was studied, including the extracting time, temperature, ethanol concentration, ratio of
solid-to-liquid and number of extraction times, and an orthogonal test table L9（34）was used to investigate
the best extracting condition.Results and Conclusion: Results showed that 70% ethanol as extracting solvent,
ratio of solid-to-liquid 1: 20, temperature 90℃ and extracting time of 1h were optimal.The extracting rate of
total flavoniods from Clematis filamentosa Dunn could achive 93.27% by extracting twice under the optimum
condition.
Key words：Clematis filamentosa Dunn; total flavoniods; extracting condition; orthogonal test
· 方药纵横 ·
DOI：10.13194/j.jlunivtcm.2010.01.187.huzl.077
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辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 2 卷
氧化钠溶液 2.0mL，最后用 70％乙醇定容至刻度，以
70% 的乙醇为空白，在 510nm 处测定吸光度，从准确
量取对照品溶液开始重复测定 3 次。以芦丁浓度（C）
与对应的吸光度值（A）进行直线回归，计算得直线
回归方程为 C = - 0.00142 + 0.8558A，（r = 0.99996，
RSD ＝ 1.64%），结 果 表 明 芦 丁 在 0.0751~0.6004mg
范围内，其含量与吸光度值有良好的线性关系，结果
见表 1、图 1。
表 1 芦丁浓度（mg·mL-1）与对应吸光度（A）值
项 目 1 2 3 4 5 6
芦丁浓度（C ） 0 0.0751 0.1501 0.3002 0.4503 0.6004
平均吸光度 (A) 0 0.088 0.176 0.356 0.529 0.701
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0 0.2 0.4 0.6 0.8
吸光度（A）
芦
丁
浓
度
（
mg
/m
L）
图 1 芦丁的标准工作曲线
2.2 甘木通总黄酮的提取与测定
取一定量干燥的甘木通药材进行粉碎，过 40
目筛，精确称取 50.0g 置于烧瓶内，用适量石油醚加
热回流提取 3 次脱色，弃去石油醚提取液，经减压
蒸馏挥干残留的石油醚，然后加浓度为 70％的乙
醇 150mL 在 90℃条件下回流提取 1h，抽滤，滤渣加
70％的乙醇 100mL 继续提取 4 次，合并 5 次滤液，减
压回收乙醇，然后转移到 100mL 容量瓶中用 70％的
乙醇定容。精确量取 1.0mL 提取液共 3 份，按标准曲
线方法测定吸光度，计算得每克甘木通药材中总黄
酮含量为 10.588mg。
2.3 单因素实验和多因素正交实验
根据影响甘木通黄酮类提取效果的因素，分别
考察了乙醇浓度（50%、60%、70%、80%、90%）、提取
温度（50、60、70、80、90℃）、提取时间 (0.5、1、1.5、2、
2.5h)、药 材 / 溶 剂 比 例（W/V：1/10、1/15、1/20、1/25、
1/30）、提取次数（1、2、3、4、5 次）等单因素条件下甘
木通总黄酮的提取率。为了系统考察甘木通总黄酮
的乙醇提取法的工艺参数，根据单因素实验各因素
对提取率影响的大小、提取因素的变化范围和各因
素的最佳值，选取乙醇浓度、药材与溶剂的比例、提
取温度和提取时间 4 个因素，每个因素取 3 个水平，
以提取物中总黄酮得率为考察指标，总黄酮得率＝
（提取液中总黄酮含量 / 药材质量）×100％，进行 L9
（34）正交试验，试验因素与水平见表 2，正交试验结
果见表 3。
表 2 正交试验因素水平表
水平 A 温度（℃） B 乙醇浓度（％） C 提取时间（h） D 料液比（W/V）
1 70 60 1 1：10
2 80 70 1.5 1：15
3 90 80 2 1：20
表 3 L9（34）正交试验结果及数据分析
试验号 A B C D 黄酮得率（％）
1 1 1 1 1 0.3128
2 1 2 2 2 0.4437
3 1 3 3 3 0.1674
4 2 1 2 3 0.3494
5 2 2 3 1 0.4066
6 2 3 1 2 0.2112
7 3 1 3 2 0.3663
8 3 2 1 3 0.5388
9 3 3 2 1 0.1447
K1 0.9239 1.0282 1.0628 0.8461
K2 0.9672 1.3891 0.9778 1.0212
K3 1.0898 0.5633 0.9403 1.0556
K’1 0.3080 0.3427 0.3543 0.2880
K’2 0.3244 0.4630 0.3259 0.3404
K’3 0.3633 0.1878 0.3134 0.3519
R 0.0553 0.2752 0.0409 0.0639
从表 3 试验结果及极差分析可以看出：极差大
小依次为 RB ＞ RD ＞ RA ＞ RC，A、B、C、D 四因素对
黄酮得率影响的主次顺序是 B ＞ D ＞ A ＞ C，甘木通
黄酮的最佳提取条件为 A3B2C1D3，即用固液比为 1:
20 的 70% 乙醇溶液，在 90℃的水浴条件下提取 1h，
黄酮得率最高。根据该提取条件进行试验，提取 2
次总黄酮提取率达 93.27％；提取 3 次达 96.33％，考
虑到实际生产中的成本以及减少杂质含量，因此提
取 2 次基本可提取完全。
3 讨 论
黄酮类化合物在植物体内绝大多数以苷的形
式存在，少数以游离的苷元形式存在。因结构及
存在状态（苷和苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷等）
不同其溶解度有很大差异。一般游离苷元难溶
或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、正丁
醇等有机溶剂及稀碱水溶液中。黄酮类化合物
的羟基糖苷化后，水中溶解度相应加大，而在有
机溶剂中的溶解度则相应减小，一般易溶于水、
甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不溶于苯、
氯仿等有机溶剂中；而羟基经甲基化后，则增加
在有机溶剂中的溶解度。尽管以甲醇－水为溶剂
提取黄酮类化合物较为理想，但其具有一定的毒
性，而且沸点低，易挥发，因此本实验选择乙醇－
水为提取溶剂。
虽然多采用乙醇作为溶剂提取黄酮类化合物，
但由于不同植物中黄酮类化合物的种类与含量不
同，因此适宜的提取条件也不尽相同 [4-5]。本实验结
果显示，用固液比为 1: 20 的 70% 乙醇溶液，在 90℃
的水浴条件下提取 1h 共提取 2 次，甘木通总黄酮提
取率高达 93.27％，是试验条件下提取甘木通总黄酮
的最佳参数。◆
参考文献
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