全 文 ：　
第３６卷 第６期
２０１５年１２月 　
青 岛 科 技 大 学 学 报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｑｉｎｇｄａｏ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
Ｖｏｌ．３６Ｎｏ．６
Ｄｅｃ．２０１５ 　
　　文章编号：１６７２－６９８７（２０１５）０６－０６２８－０７；ＤＯＩ：１０．１６３５１／ｊ．１６７２－６９８７．２０１５．０６．００７
葫芦巴总黄酮提取工艺及其体外抗氧化活性
陈　帅１，２，王慧竹１，钟方丽１＊，崔　磊１
（１．吉林化工学院 化学与制药工程学院，吉林 吉林１３２０２２；２．沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳１１００６１）
摘　要：在单因素实验基础上，以总黄酮提取率为考察指标，根据星点试验设计原理，利
用响应面法建立数学模型，得到葫芦巴总黄酮提取的最佳工艺；采用ＤＰＰＨ自由基清除
法评价葫芦巴总黄酮的体外抗氧化活性。葫芦巴总黄酮最佳提取工艺：乙醇体积分数
６８％，提取时间２．３ｈ，提取温度７４．２℃，在此工艺条件下葫芦巴总黄酮提取率的预测值
为２．１４％，实际提取率为２．１０％，与理论值间偏差为１．８７％。葫芦巴总黄酮对ＤＰＰＨ自
由基清除率随总黄酮浓度增加而上升，但对其清除能力弱于同浓度Ｖｃ。由响应面法得到响
应面的葫芦巴总黄酮最佳提取工艺稳定，得到的葫芦巴总黄酮具有一定的体外抗氧化活性。
关键词：葫芦巴；总黄酮；抗氧化
中图分类号：ＴＳ　２０２．３　　　文献标志码：Ａ
收稿日期：２０１５－０５－０５
作者简介：陈　帅（１９８２—），男，讲师．　＊通信联系人．
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ
Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ　Ｆｏｅｎｕｍ－ｇｒａｅｃｕｍａｎｄ　Ｉｔｓ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ
ＣＨＥＮ　Ｓｈｕａｉ　１，２，ＷＡＮＧ　Ｈｕｉ－ｚｈｕ１，ＺＨＯＮＧ　Ｆａｎｇ－ｌｉ　１，ＣＵＩ　Ｌｅｉ　１
（１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｊｉｌｉｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｏｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉｌｉｎ　１３２０２２，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ　Ｐｈａｒｍａｃｅｔｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１００６１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ　ｆｏｅ－
ｎｕｍ－ｇｒａｅｃｕｍ（ＴＦＦ）ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｃｅｎｔｒａｌ
ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ　ｄｅｓｉｇｎ（ＣＣＤ）ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｓｉｇｎ　ｔｈｅ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｓｃｈｅｍｅ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ（ＲＳＭ）ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｔｈｅ　ｅｘ－
ｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ａｎｄ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｔｈｅ　ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ＴＦＦ　ｗｉｔｈ
ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ａｓ　ｉｎｄｅｘ．Ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＴＦＦ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｐｒｏｃｅｓｓ
ｗａｓ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　６８％，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　２．３ｈ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　７４．２℃．Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
ｗａｓ　２．１４％，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｖａｌｕｅ　ｗａｓ　２．１０％．Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｖａｌｕｅ　ａｇｒｅｅｄ
ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｍｏｄｅｌ　ｗｉｔｈ　ａ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｅｒｒｏｒ　ｏｆ　１．８７％．Ｅｘｐｅｒｉ－
ｍｅｎｔａｌ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ　ＤＰＰＨ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＴＦＦ　ｗｅｒｅ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｗｉｔｈ
ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＴＦＦ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｏｆ　ＴＦＦ　ｗａｓ　ｗｅａｋ　ｃｏｍ－
ｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｖｃ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｂｙ
ＲＳＭ　ｉｓ　ｓｔａｂｌｅ　ａｎｄ　ＴＦＦ　ｈａｓ　ｓｏｍｅ　ｅｘｔｅｎｔ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ　ｆｏｅｎｕｍ－ｇｒａｅｃｕｍ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
　第６期 　　陈　帅等：葫芦巴总黄酮提取工艺及其体外抗氧化活性
　　葫芦巴为豆科植物葫芦巴（Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ　ｆｏｅ－
ｎｕｍ－ｇｒａｅｃｕｍＬ．）的干燥成熟种子，又名苦豆、芦
巴、胡巴、季豆、小木夏、香豆子［１］，目前我国“三
北”地区和中南等地均有栽培或野生资源分布［２］，
其性苦，味温，具有温肾助阳，祛寒止痛的功效，中
医临床上主要用于肾阳不足，下元虚冷，小腹冷
痛，寒疝腹痛，寒湿脚气的治疗［３］。葫芦巴化学成
分复杂，药理作用广泛，主要成分为生物碱类、皂
苷类、黄酮类、多糖类、三萜类、氨基酸类等［４－７］，其
中生物碱类和皂苷类成分的提取工艺和药理活性
已多有报道，但被认为具有药理活性的黄酮类成
分却鲜有报道。为此本实验利用响应面法对葫芦
巴总黄酮（ＴＦＦ）的提取工艺进行了优化，并对其
体外抗氧化活性进行了初步研究。
１　实验部分
１．１　试剂与仪器
葫芦巴购于吉林市吉林大药房，经吉林化工
学院钟方丽教授鉴定为 Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ　ｆｏｅｎｕｍ－
ｇｒａｅｃｕｍＬ．的种子；芦丁对照品，中国药品生物
制品检定所；ＤＰＰＨ试剂，天津市大茂化学厂；氢
氧化钠，天津市北方天医化学试剂厂；亚硝酸钠，
天津市瑞金特化学有限公司；硝酸铝，天津市瑞金
特化学有限公司。
超声波清洗仪，ＫＱ－２５０ＤＥ型，昆明市超声仪
器有限公司；双光束紫外可见分光光度计，
ＴＵ１９５０型，北京普析通用仪器有限公司；分析天
平，ＡＵＹ２２０型，日本岛津公司；数显恒温水浴
锅，ＨＨ－６型，国华电器有限公司；真空干燥箱，
ＤＺＦ－６０５０型，上海一恒科学仪器有限公司；台式
高速离心机，Ｈ１８５０Ｒ型，湖南湘仪实验室仪器开
发有限公司。
１．２　葫芦巴总黄酮提取率的测定
１．２．１　对照品溶液的配制
精密称取芦丁对照品５．０ｍｇ，置于２５ｍＬ容
量瓶中，以６０％乙醇溶解定容，摇匀，得浓度为
０．２ｍｇ·ｍＬ－１的对照品溶液。
１．２．２　供试品溶液的制备
称取５．０ｇ粉碎粒度为６９μｍ 的葫芦巴细
粉，精密称定，置１５０ｍＬ圆底烧瓶中进行提取，
趁热过滤，减压回收溶剂，６０％乙醇定容至２５０
ｍＬ容量瓶中，摇匀即得。
１．２．３　检测波长的选择
精密量取对照品溶液１ｍＬ，置１０ｍＬ容量
瓶中，加入显色剂显色后，６０％乙醇定容，按照分
光光度法，在２００～６００ｎｍ之间，以２ｎｍ为一个
单位进行光谱扫描。结果显示对照品溶液在波长
５０６ｎｍ处有最大吸收，且最大吸收峰两侧无杂质
峰干扰，因此选取５０６ｎｍ作为测定波长。
１．２．４　线性关系考察
分别精密移取对照品溶液０．５，１．５，２．５，
３．５，４．５ｍＬ置于１０ｍＬ容量瓶中，依次加入质
量分数５％的亚硝酸钠０．３ｍＬ，摇匀，静置６
ｍｉｎ，１０％的硝酸铝０．３ｍＬ，摇匀，静置６ｍｉｎ，质
量分数４％的氢氧化钠４ｍＬ，６０％乙醇定容，摇
匀，静置２０ｍｉｎ，按分光光度法在５０６ｎｍ处测定
其吸光度值。以芦丁浓度为横坐标，吸光度值为
纵坐标，进行线性回归，得出标准曲线方程Ａ＝
１２．９８１Ｃ－０．０８３，Ｒ２＝０．９９９　７，结果表明芦丁对
照品在０．０１～０．０９ｍｇ·ｍＬ－１范围内与吸光度
呈良好线性关系。
１．２．５　总黄铜提取率的测定
提取液稀释到合适倍数后按“１．２．４”方法测
定吸光度，带入标准曲线方程，得到总黄酮浓度，
按公式（１）计算ＴＦＦ提取率。
ｙ＝ｎ×Ｃ×２５０ｍ０×１　０００
， （１）
ｙ表示提取率，％；ｎ为提取液稀释倍数；Ｃ为提取
液中总黄酮含量，ｍｇ·ｍＬ－１；ｍ０ 为称取药材质
量，ｇ。
１．３　ＤＰＰＨ清除能力的测定
取ＤＰＰＨ 约１０ｍｇ，精密称定，置于２５ｍＬ
棕色量瓶中，超声使其完全溶解，无水乙醇定容，
作为储备液，精密吸取３ｍＬ该储备液，置２５ｍＬ
棕色容量瓶中，无水乙醇定容，摇匀即得。
取维生素Ｃ适量，加乙醇配置成浓度为６７．１
μｇ·ｍＬ
－１溶液，作为储备液。精密量取储备液
１ｍＬ，加乙醇溶液稀释成原溶液的１／４，分别吸取
稀释后的维生素Ｃ储备液０．２，０．４，０．６，０．８，１．０
ｍＬ，置于５ｍＬ棕色容量瓶中，再分别加入１．８，
１．６，１．４，１．２，１．０ｍＬ无水乙醇，摇匀，分别加入
２ｍＬ　ＤＰＰＨ溶液，无水乙醇定容至刻度，摇匀，
避光放置３０ｍｉｎ，在５１７ｎｍ下测定Ａｉ（维生素
Ｃ＋ＤＰＰＨ）。同法测得Ａｊ（维生素Ｃ＋乙醇），空
白溶剂的Ａ０（乙醇＋ＤＰＰＨ）。按公式（２）计算药
物的自由基清除率Ｉ。
分别精密移取 ＴＦＦ提取液０．２，０．４，０．６，
０．８，１．０ｍＬ，置于５ｍＬ棕色容量瓶中，再分别加
９２６
青 岛 科 技 大 学 学 报（自然科学版） 第３６卷
入１．８，１．６，１．４，１．２，１．０ｍＬ无水乙醇，摇匀，分
别加入２ｍＬ　ＤＰＰＨ溶液，无水乙醇定容至刻度，
摇匀［８－１３］，避光放置３０ｍｉｎ，在５１７ｎｍ 测定Ａｉ
（样品液＋ＤＰＰＨ）。同法测定Ａｊ（样品液＋无水
乙醇），对照液Ａ０（无水乙醇＋ＤＰＰＨ）。按公式
（２）计算ＴＦＦ的自由基清除率Ｉ。
Ｉ＝ （１－Ａｉ－ＡｊＡ０
）×１００％。 （２）
将清除率对药物浓度进行曲线拟合，根据回
归方程，求出清除率为５０％时ＴＦＦ的浓度ＩＣ５０。
２　结果与分析
２．１　单因素实验结果
２．１．１　乙醇浓度对ＴＦＦ提取率的影响
准确称取５．０ｇ粉碎粒度为６９μｍ的葫芦巴
粉末５份，分别置于１５０ｍＬ圆底烧瓶中，分别加
入体积分数为５０％，６０％，７０％，８０％，９０％的乙
醇７０ｍＬ，在７０℃温度下提取２ｈ，趁热过滤，减
压回收溶剂，６０％乙醇定容至２５０ｍＬ容量瓶中，
摇匀，稀释合适倍数后加入显色剂并按“１．２．４”方
法测定吸光度，计算 ＴＦＦ提取率。乙醇浓度对
ＴＦＦ提取率的影响见图１。
图１　乙醇浓度对ＴＦＦ提取率的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ＴＦＦ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
　　由图１可知，ＴＦＦ提取率随乙醇浓度增大而
逐渐升高，当乙醇体积分数为７０％时，ＴＦＦ提取
率最大，而后随着乙醇浓度继续增大，ＴＦＦ提取
率下降，可能是由于溶液极性降低，脂溶性成份溶
出增多所致，因此最佳乙醇体积分数选择７０％。
２．１．２　提取时间对ＴＦＦ提取率的影响
准确称取５．０ｇ粉碎粒度为６９μｍ的葫芦巴
粉末５份，分别置于１５０ｍＬ圆底烧瓶中，加入体
积分数为７０％的乙醇７０ｍＬ，提取时间分别为
０．５，１．０，１．５，２．０，２．５ｈ，提取温度为７０℃，趁热
过滤，减压回收溶剂，６０％乙醇定容至２５０ｍＬ容
量瓶中，摇匀，稀释合适倍数后加入显色剂并按
“１．２．４”方法测定吸光度，计算ＴＦＦ提取率。
图２　提取时间对ＴＦＦ提取率的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ＴＦＦ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
　　从图２可以看出，ＴＦＦ提取率随提取时间延
长而逐渐增大，当提取时间达到１．５ｈ时，ＴＦＦ提
取率趋于最大值，随后提取时间继续延长，ＴＦＦ
提取率趋于不变，故最佳提取时间选择１．５ｈ。
２．１．３　提取温度对ＴＦＦ提取率的影响
准确称取５．０ｇ粉碎粒度为６９μｍ的葫芦巴
粉末５份，分别置于１５０ｍＬ圆底烧瓶中，加入体
积分数７０％的乙醇７０ｍＬ，分别在５０，６０，７０，８０，
９０℃条件下提取２ｈ，趁热过滤，减压回收溶剂，
６０％乙醇定容至２５０ｍＬ，摇匀，稀释合适倍数后
加入显色剂并按“１．２．４”方法测定吸光度，计算
ＴＦＦ提取率。由图３可知，ＴＦＦ提取率随提取温
度增大先增加后减小，当提取温度为７０℃时，
ＴＦＦ提取率达到最大值，因此最佳提取温度选择
７０℃。
图３　提取温度对ＴＦＦ提取率的影响
Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ＴＦＦ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
２．１．４　精密度试验
取“１．２．１”项对照品溶液１ｍＬ于１０ｍＬ容
量瓶中，加入显色剂显色后，用６０％乙醇定容至
刻度，在５０６ｎｍ处测定吸光度，连续测定６次，结
果ＲＳＤ值为１．４５％，表明仪器精密度良好。
０３６
　第６期 　　陈　帅等：葫芦巴总黄酮提取工艺及其体外抗氧化活性
２．１．５　稳定性试验
精密移取同一供试品溶液２ｍＬ于１０ｍＬ容
量瓶中，加入显色剂显色后，用６０％乙醇定容至
刻度，在５０６ｎｍ波长下分别于０，２，４，６，８，１２ｈ
测定吸光度，结果ＲＳＤ值为１．７３％，表明供试品
溶液稳定性良好。
２．１．６　重复性试验
取同批葫芦巴药材粉末，按“１．２．２”项下方法
平行制备６份供试品溶液，分别精密移取上述供
试品溶液２ｍＬ置于１０ｍＬ容量瓶中，加入显色
剂显色后，用 ６０％ 乙醇定容至刻度，分别在
５０６ｎｍ 波 长 处 测 定 吸 光 度，结 果 ＲＳＤ 值 为
２．２６％，表明方法重复性良好。
２．１．７　加样回收率
精密量取已知含量的供试品溶液６份，每份
２ｍＬ，置于１０ｍＬ容量瓶中，分别精密加入不同
量的对照品溶液（０．２ｍｇ·ｍＬ－１），加入显色剂
显色后，用６０％乙醇定容至刻度，分别在５０６ｎｍ
波长处测定吸光度，结果显示平均回收率为
９８．８２％，ＲＳＤ值为１．４９％。
２．２　响应面实验设计与结果
在单因素实验的基础上，利用响应面法中的
星点试验设计（ＣＣＤ），选取对ＴＦＦ提取率影响较
大的提取温度、提取时间、乙醇浓度３个因素为自
变量，分别以 Ａ、Ｂ、Ｃ表示，并以－１、０、１代表自
变量水平，以总黄酮提取率为因变量（Ｙ），进行响
应面试验，并利用统计软件ＳＡＳ　９．４对实验数据
进行处理，并预测ＴＦＦ提取的最佳工艺参数。响
应面试验的因素水平见表１。
表１　响应面试验的因素水平
Ｔａｂｌｅ　１　Ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｎｏｄｏｌｏｇｙ
水平 φ（乙醇）／％ 提取时间／ｈ 提取温度／℃
－１　 ６０　 １．５　 ６０
０　 ７０　 ２．０　 ７０
１　 ８０　 ２．５　 ８０
　　利用响应面法优化最佳提取工艺，试验设计
及结果，见表２。
其中实验号１～８是析因实验，９～１４是星点
实验部分，１５～２０是中心实验部分，用以估计实
验误差。由于各因素对ＴＦＦ提取率的影响不是
简单的线性关系［１４－１６］，为了更明确各因素对其的
影响，利用ＳＡＳ　９．４对表２中实验数据进行多元
二次回归拟合，获得ＴＦＦ提取率（Ｙ）对自变量乙
醇体积分数（Ａ）、提取时间（Ｂ）、提取温度（Ｃ）的
回归方程为Ｙ＝－１３．８２＋０．２１Ａ＋２．２４Ｂ＋
０．１７Ｃ－０．００２　９ＡＢ－０．０００　２９ＡＣ－０．００４　７ＢＣ－
０．００１　３Ａ２－０．３７Ｂ２－０．０００　９４Ｃ２。
表２　响应面设计方案及结果
Ｔａｂｌｅ　２　Ｐｒｏｇｒａｍ　ａｎｄ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ
ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｍｏｄｏｌｏｇｙ
实验
序号
φ（乙醇）／％
提取
时间／ｈ
提取
温度／℃
总黄酮
提取率／％
１　 ６０．０　 １．５０　 ６０．０　 １．５４
２　 ６０．０　 １．５０　 ８０．０　 １．８５
３　 ６０．０　 ２．５０　 ６０．０　 １．８５
４　 ６０．０　 ２．５０　 ７０．０　 ２．０６
５　 ８０．０　 １．５０　 ６０．０　 １．５７
６　 ８０．０　 １．５０　 ８０．０　 １．７１
７　 ８０．０　 ２．５０　 ６０．０　 １．７９
８　 ８０．０　 ２．５０　 ８０．０　 １．８９
９　 ５２．８　 ２．００　 ７０．０　 １．７０
１０　 ８７．２　 ２．００　 ７０．０　 １．６３
１１　 ７０．０　 １．１４　 ７０．０　 １．６１
１２　 ７０．０　 ２．８６　 ７０．０　 １．９６
１３　 ７０．０　 ２．００　 ５２．８　 １．６５
１４　 ７０．０　 ２．００　 ８７．２　 １．９３
１５　 ７０．０　 ２．００　 ７０．０　 ２．０８
１６　 ７０．０　 ２．００　 ７０．０　 ２．１１
１７　 ７０．０　 ２．００　 ７０．０　 ２．０６
１８　 ７０．０　 ２．００　 ７０．０　 ２．０５
１９　 ７０．０　 ２．００　 ７０．０　 ２．１０
２０　 ７０．０　 ２．００　 ７０．０　 ２．０９
　　为了检验方程的有效性，对该模型和回归模
型系数显著性进行检验及方差分析，结果见表３
和表４。
由表３可知，Ａ、Ｂ、Ｃ回归系数均为极显著水
平，说明乙醇浓度、提取时间、提取温度对总黄酮
提取率均具有较大影响，ＡＢ、ＢＣ、ＡＣ回归系数均
不显著，而Ａ２、Ｂ２、Ｃ２ 回归系数均为极显著水平，
说明各实验因素对ＴＦＦ提取率的影响不是简单
的线性关系。
由表４可知，总模型、交互项和二次项的Ｐｒ＞
Ｆ值均小于０．０００　１，说明总模型、交互项和二次
项均 具 有 高 度 显 著 性；方 程 的 决 定 系 数 为
０．９８３　７，说明响应值的变化有９８．３７％来源于所
１３６
青 岛 科 技 大 学 学 报（自然科学版） 第３６卷
表３　回归方程系数及其显著性检验
Ｔａｂｌｅ　３　Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ
参数来源 自由度 估计值 标准误差 ｔ值 Ｐｒ＞｜ｔ｜ 显著性
常数项 １ －１３．８２　 ０．０８２ －１３．２８ ＜０．０００　１ ＊＊
Ａ　 １　 ０．２１　 ０．０１５　 １２．５２ ＜０．０００　１ ＊＊
Ｂ　 １　 ２．２４　 ０．０１０　 ７．９４ ＜０．０００　１ ＊＊
Ｃ　 １　 ０．１７　 ０．１１　 １０．６５ ＜０．０００　１ ＊＊
Ａ２　 １ －０．００１　３　 ０．００１　８ －１４．８７ ＜０．０００　１ ＊＊
ＡＢ　 １ －０．００２　９　 ０．００９　８ －１．１４　 ０．２８０　３
Ｂ２　 １ －０．３７　 ０．００２　５ －１０．３５ ＜０．０００　１ ＊＊
ＡＣ　 １ －０．０００　２９　 ０．２６ －２．０６　 ０．０６６　８
ＢＣ　 １ －０．００４　７　 ０．１２ －１．６６　 ０．１２７　７
Ｃ２　 １ －０．０００　９４　 ０．１２ －１０．３９ ＜０．０００　１ ＊＊
注：＊为显著（Ｐ＜０．０５）；＊＊为极显著（Ｐ＜０．０１）。
表４　回归方程的方差分析
Ｔａｂｌｅ　４　Ｖａｒｉａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｍｏｄｅｌ
项目 ＤＦ 平方和 均方 Ｆ值 Ｐｒ＞Ｆ 显著性
线性项 ３　 ０．２９　 ０．０９７　 １７．６９ ＜０．０００　１ ＊＊
二次项 ３　 ０．４４　 ０．１５　 ３５．３８ ＜０．０００　１ ＊＊
交互项 ３　 ０．０１３　 ０．００４　３　 １．９２　 ０．１４３　６
模型总和 ９　 ０．７４　 ０．０８２　 １６．１５ ＜０．０００　１ ＊＊
失拟项 ５　 ０．００９　６　 ０．００１　９１０　 ３．５６　 ０．０９４　９
纯误差 ５　 ０．００２　７　 ０．０００　５３７
残差总计 １０　 ０．０１２　 ０．００１　２２３
注：Ｒ２＝０．９８３　７；＊为显著（Ｐ＜０．０５）；＊＊为极显著（Ｐ＜０．０１）。
选变量［１７］，失拟项的Ｐｒ＞Ｆ值大于０．０５，影响不
显著，说明回归方程拟合度良好，未知因素对方程
干扰较小，因此实验得到的回归方程拟合程度良
好，试验误差小，可用该方程代替真实实验点进行
预测ＴＦＦ提取率。
为了更加直观地表达各个因素对ＴＦＦ提取
率的影响，可以固定其中一个因素的值为零水平
对应的值，考虑另两个因素对总黄酮提取率的影
响，根据回归方程绘制响应曲面图和等高线
图［１８－２０］，结果见图４。
图４　两因素交互作用的响应面图
Ｆｉｇ．４　Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｐｌｏｔｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｗｏ－ｆａｃｔｏｒ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ
　　从图４可以直观看出，各因素交互作用对总
黄酮提取率的影响，曲面越陡峭，表明该因素对总
黄酮提取率的影响越显著，响应值也越大；从等高
线可以看出总黄酮提取率的最佳条件应该在圆心
处。从图４可以看出，对ＴＦＦ提取率影响最显著
的因素为乙醇体积分数，并且乙醇体积分数和提
２３６
　第６期 　　陈　帅等：葫芦巴总黄酮提取工艺及其体外抗氧化活性
取温度的交互作用对ＴＦＦ提取率的影响最显著。
利用ＳＡＳ软件 ＲＳＲＥＧ语句对模型进行典
型性分析，得到葫芦巴总黄酮提取的最佳工艺：乙
醇体积分数为６８％，提取时间２．２８ｈ，提取温度
７４．２℃。在此工艺条件下葫芦巴总黄酮提取率
的预测值为２．１４％。考虑到实际情况，将最佳工
艺条件进行修正：乙醇体积分数为６８％，提取时
间２．３ｈ，提取温度７４．２℃，在此工艺条件下重复
试验３次，总黄酮平均提取率为２．１０％，与预测
值间偏差为１．８７％，说明回归模型较好地反映各
因素与评价指标之间的关系，且稳定可靠。
２．３　ＤＰＰＨ自由基清除实验结果
ＴＦＦ和 ＶＣ 浓度对ＤＰＰＨ 自由基的清除能
力的影响见图５。由图５可知，ＴＦＦ对ＤＰＰＨ有
明显的清除作用，且随ＴＦＦ质量浓度的加大清除
率呈上升趋势，当质量浓度为０．２６７ｍｇ·ｍＬ－１
时，ＴＦＦ对ＤＰＰＨ自由基清除率高达７９．８％，但
ＴＦＦ对ＤＰＰＨ自由基清除率低于同浓度的 ＶＣ。
分别对 ＴＦＦ和 Ｖｃ浓度与清除率进行曲线回归
得方 程：Ｙ（ＴＦＦ） ＝２１．９３ｌｎＸ ＋１０８．２１（Ｒ２ ＝
０．９７３　９），Ｙ（Ｖｃ） ＝１２．１２ｌｎＸ ＋１０８．２４（Ｒ２ ＝
０．９８６　７），通过计算可求得ＴＦＦ和 Ｖｃ对ＤＰＰＨ
自由 基 的 半 数 清 除 率 ＩＣ５０ 分 别 为０．０７０　３
ｍｇ·ｍＬ－１和０．００８　２ｍｇ·ｍＬ－１，表明 ＴＦＦ对
ＤＰＰＨ自由基清除能力稍弱于ＶＣ。
图５　ＴＦＦ和ＶＣ浓度对ＤＰＰＨ自由基的清除能力的影响
Ｆｉｇ．５　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＴＦＦ　ａｎｄ　Ｖｃ　ｏｎ
ＤＰＰＨ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ
３　结　论
采用响应面法得出了葫芦巴总黄酮的最佳提
取工艺条件：乙醇体积分数为６８％，提取时间２．３
ｈ，提取温度７４．２℃，在此工艺条件下总黄酮提
取率为２．１４％，工艺验证性试验结果表明：最佳
提取工艺稳定可靠，可以用来预测葫芦巴总黄酮
的提取率。
ＤＰＰＨ自由基清除能力的测定结果表明葫芦
巴总黄酮具有一定的体外抗氧化活性，并且在一
定的浓度范围内抗氧化能力与浓度呈量效关系，
但其抗氧化的具体成分未知，有待进一步分析葫
芦巴总黄酮的化学成分并明确其抗氧化活性的物
质基础。
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３３６
青 岛 科 技 大 学 学 报（自然科学版） 第３６卷
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（责任编辑　林　琳）
（上接第６２７页）
［２１］白夺龙，杨开华．大孔吸附树脂分离纯化技术及应用［Ｊ］．海
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［２２］谭林，郭增军，徐颖．大孔吸附树脂纯化小丛红景天总黄酮
的初步研究［Ｊ］．中药材，２００８，３１（１１）：１７４０－１７４３．
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ｆｉｃａｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｉｃｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　Ｒｈｏｄｉｏｌａ　ｄｕｍｕｌｏｓａ　ｂｙ
ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｍａｔｅｒｉ－
ａｌｓ，２００８，３１（１１）：１７４０－１７４３．
［２３］陈顺，关延彬．大孔树脂吸附骨碎补总黄酮特性的研究［Ｊ］．
中国中药杂志，２００７，３２（８）：７５０－７５３．
Ｃｈｅｎ　Ｓｈｕｎ，Ｇｕａｎ　Ｙａｎｂｉｎ．Ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ｒｅｓｉｎ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ
ｒｈｉｚｏｍａ　ｄｒｙｎａｒｉａｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎａ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ　Ｍａｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃａ，２００７，３２（８）：７５０－７５３．
［２４］李雪梅，陈辉，李书国，等．马尾松花粉中总黄酮类物质提取
条件的研究［Ｊ］．食品工业科技，２０１１，３２（９）：２６４－２６６．
Ｌｉ　Ｘｕｅｍｅｉ，Ｃｈｅｎ　Ｈｕｉ，Ｌｉ　Ｓｈｕｇｕｏ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＰｉｎｕｓ　ｐｏｌｌｅｎ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ
Ｆｏｏｄ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，２０１１，３２（９）：２６４－２６６．
（责任编辑　林　琳）
４３６