全 文 ：大孔树脂对凤仙透骨草总黄酮的纯化研究
顾媛媛1，代金红1，王建明1，田振坤2*
(1．黑龙江中医药大学中医药研究院，黑龙江 哈尔滨 150040;2．黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:对凤仙透骨草总黄酮的纯化工艺进行优化。方法:以凤仙透骨草总黄酮的静态吸附量和
解析率为指标，对 5 种大孔吸附树脂 D － 101、HPD400、HPD450、AB － 8、X － 5 进行筛选，筛选出最佳型
号的大孔树脂，并确定其分离纯化条件。结果: D101 型大孔树脂对凤仙透骨草总黄酮的纯化效果较好，
最佳上样量为 9． 415mg /mL 树脂，上样药液浓度为 1． 387mg /mL，水洗量为 5 倍柱体积，用 8 倍柱体积
60%乙醇洗脱。结论: D101 型大孔树脂对凤仙透骨草总黄酮的纯化方法可行。
关键词:凤仙透骨草;总黄酮;大孔吸附树脂;纯化
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2392(2013)04 － 0079 － 03
收稿日期:2013 － 06 － 01 修回日期:2013 － 06 － 30
作者简介:顾媛媛(1982 －) ，女，博士，助理研究员。研究方向:中药质
量控制研究。
* 通讯作者:田振坤(1955 －) ，男，教授，博士研究生导师。研究方向:
中药新药开发研究。E － mail:tzkoffice@ hljucm． net
凤仙透骨草为凤仙花科(Balsaminaeeae)植物凤仙
花(Impatiens balsamina L．)的干燥茎、叶，中国南北各
地均有栽培［1］。凤仙透骨草中黄酮类化合物具有多
种生物活性，如抗过敏［2］、抗炎镇痛［3］、抗真菌［4］、抗
氧化［5］等作用，市场开发前景很大。大孔吸附树脂由
于其本身组成与结构特点，具有吸附性和筛选性相结
合的分离、纯化多种功能，已被广泛应用［6］。本实验
系统比较了 5 种大孔树脂对凤仙透骨草总黄酮的吸附
和解析性能，筛选出合适的大孔树脂对凤仙透骨草提
取物进行总黄酮的富集与纯化，为凤仙透骨草总黄酮
的进一步开发和利用提供了理论参考。
1 仪器与材料
756PC型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有
限公司) ;JA2003 电子分析天平(上海良平仪器仪表有
限公司) ;旋转蒸发仪 N － 1100(上海爱朗仪器有限公
司) ;自制多规格层析柱;D － 101、AB － 8、X － 5、
HPD400 与 HPD450 树脂(河北宝恩吸附材料科技有
限公司) ;芦丁对照品(中国药品生物制品鉴定所，批
号:批号 100080 － 200707) ;其它试剂均为分析纯。凤
仙透骨草采购于兰西郊外，经黑龙江中医药大学药学
院中药资源与开发教研室鉴定为凤仙透骨草。
2 方法与结果
2． 1 凤仙透骨草粗提液的制备
将干燥的凤仙透骨草药材约 2． 0kg 粉碎后，以 95%
乙醇回流提取 2h，提取 3次，合并 3 次滤液，减压回收至
无醇味，加蒸馏水溶解，得透骨草提取液，滤过待用。
2． 2 标准曲线的制备
精确称取 120℃ 干燥至恒重的芦丁对照品
12. 42mg，用甲醇定容于 10mL 容量瓶中，制成浓度为
1. 242mg /mL的对照品溶液。精密吸取芦丁对照品溶
液 0． 2mL、0． 4mL、0． 6mL、0． 8mL、1． 0mL、1． 2mL 于
50mL容量瓶中，加 5% 亚硝酸钠溶液 0． 5mL，放置
6min，再加 10%硝酸铝溶液 0． 5mL，放置 6min，加 4%
氢氧化钠溶液 4． 0mL，再加水至刻度，摇匀，放置
15min。以相应的试剂作空白，在 416nm 波长处测定
吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准
曲线，回归方程为:Y = 0． 480 8X + 0． 308 7，r =
0． 999 9;芦丁在 4． 97 ～ 29． 81μg /mL 浓度与吸光度呈
良好的线性关系。
2． 3 大孔树脂对凤仙透骨草总黄酮纯化条件的研究
2． 3． 1 大孔树脂型号的筛选
将预处理好的 5 种大孔树脂各 5． 0g 于具塞三角
瓶中，精密加入已知浓度的样品溶液 50mL，避光密封，
置水浴恒温(20℃)振荡器中，转速为 120r /min连续振
摇 24h，使粗提物中的总黄酮被树脂充分吸附，过滤，
取一定量续滤液，用紫外 －可见分光光度法测定吸附
液中黄酮的浓度。将上述吸附凤仙透骨草的大孔树脂
分别置于 50mL 三角瓶中，精密加入 95% 的乙醇
50mL，置水浴恒温(20℃)振荡器中，转速为 120r /min
连续振摇 24h，使总黄酮充分解吸附，过滤，取续滤液
用紫外 －可见分光光度法测定解吸液中黄酮的浓度，
分别计算各种树脂的吸附率和解吸率。按下式计算:
吸附率(%)= C0 － C( )V /CO
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中 医 药 学 报
Acta Chinese Medicine and Pharmacology
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解析率(%)= C解 / C0 － C( )V
其中 C0 为初始浓度(mg /mL) ，CV 为平衡浓度
(mg /mL) ，C解为解析液浓度(mg /mL)。结果见表 1。
表 1 大孔树脂静态吸附及解析性能
大孔树脂型号 吸附率(%) 解析率(%)
X －5 86． 77 29． 81
AB － 8 87． 57 25． 92
D101 86． 25 33． 05
HPD400 87． 32 29． 68
HPD450 87． 19 25． 44
2． 3． 2 大孔树脂对凤仙透骨草总黄酮静态吸附动
力学
将预处理好的 D101、AB － 8、HPD － 400、HPD －
450 树脂各 5g，置于 50mL 具塞三角瓶中，并于每个三
角瓶中加入样品溶液 50mL，避光密封，置水浴恒温
(20℃)振荡器中，转速为 120r /min，分别在连续振摇
lh，2h，3h，4h，5h，6h，7h 后过滤并测定黄酮含量，分别
计算各种树脂的吸附率。以时间(h)为横坐标，吸附
量(mg /g)为纵坐标，绘制大孔树脂静态吸附动力学曲
线。结果如图 1 所示。
图 1 大孔树脂静态吸附动力学曲线
2． 3． 3 泄露曲线的考察
将筛选出来的 D101 大孔树脂 1 份装于层析柱，
1BV为 30mL，取总黄酮浓度为 1． 883mg /mL的提取液
加入到树脂中，分段收集，每 1BV 收集 1 份，共 20 份，
测定流出液中总黄酮的浓度，以上样液体积为横坐标，
流出液中总黄酮浓度为纵坐标，绘制泄漏曲线，确定最
佳上样量。结果如图 2。
图 2 大孔树脂的泄露曲线
结果表明，提取液从第 5 份开始，样品开始泄露。
最佳上样量为 5BV，即 150mL。
2． 3． 4 水洗量对解吸效果的影响
称取预处理好的 D101 大孔吸附树脂 1 份湿法装
柱，取 30mL 浓度为 1． 387mg /mL 的凤仙透骨草总黄
酮提取液，于室温条件下加入树脂柱上，用足量蒸馏水
洗脱，每个树脂柱体积收集一份，测定每份洗脱液中固
形物的含量，确定最佳水洗量。结果表明，当水洗量为
5BV时，其中的固形物含量极低，所以选用 5BV 水进
行洗脱。
2． 3． 5 乙醇洗脱浓度对解吸效果的影响
按照上述所确定的吸附条件，将预处理好的 D101
大孔吸附树脂装入六根相同的树脂柱中，吸取浓度为
1． 387mg /mL的凤仙透骨草总黄酮提取液 30mL，室温
条件下以 5BV /h的速度加在树脂柱上进行动态吸附，
用蒸馏水洗脱至流出液无色，再分别用浓度为 15%，
30%，45%，60%，75%，90% 乙醇洗脱(用量均为
200mL) ，收集洗脱液，检测洗脱液中黄酮的含量和回
收率。结果见表 2。
表 2 乙醇洗脱浓度对解吸效果的影响(珋x ± s)
乙醇浓度 黄酮的含量(mg) 黄酮回收率(%)
15% 3． 965 4． 621
30% 23． 38 30． 84
45% 48． 93 64． 54
60% 71． 14 93． 84
75% 68． 98 90． 99
90% 69． 92 92． 23
如表所示，当乙醇浓度为 60%时，黄酮含量及回
收率最高为 93． 84%，所以选用洗脱液浓度为 60%。
2． 3． 6 洗脱剂用量对解吸效果的影响
按照上述所确定的吸附条件，取 1． 387mg /mL 的
上样液 30mL上柱，进行动态吸附，用蒸馏水洗脱至流
出液无色，再用 60%乙醇洗脱，每个柱体积收集 1 份，
共收集 12 份，分别测定各流出液中黄酮的含量和回收
率，绘制解吸曲线，确定最佳洗脱剂用量。见图 3。
图 3 洗脱剂用量对解吸效果的影响
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Acta Chinese Medicine and Pharmacology
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由图 3 可见，当洗脱液大于 8BV 时，黄酮含量非
常低，所以选用 8BV洗脱液进行解吸。
3 小结与讨论
大孔树脂的静态吸附和解吸试验结果表明，D101
型大孔吸附树脂对凤仙透骨草粗提物溶液中的总黄酮
有较好的吸附和解吸效果。纯化总黄酮的最佳工艺
为:上样量为 9． 415mg /mL 树脂，上样药液浓度为
1. 387mg /mL，水洗量为 5 倍柱体积，用 8 倍柱体积
60%乙醇洗脱，凤仙透骨草总黄酮含量较纯化前提高
了近 5 倍，证明采用此法可较好地纯化凤仙透骨草总
黄酮，而且大孔树脂吸附法具有吸附快、易解吸，树脂
再生简便，对环境污染小，纯化时使用的乙醇可回收后
重复使用，树脂也可处理后重复使用，该工艺成本较
低，适宜于工业化生产。
参考文献:
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［J］．沈阳药科大学学报，2007，24(5) :320 － 324．
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［5］ 谭秦莉，刘东，李玉宝，等．总黄酮化合物药理作用研究进展［J］．
安徽中医学院学报，2009，28(3) :62 － 64．
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国医院学药学杂志，2006，26(1) :69 － 71．
Purification of Total Flavones from Impatiens Balsamina L．
by Macroporous Adsorption Ｒesin
GU Yuan － yuan1，DAI Jin － hong1，WANG Jian － ming1，TIAN Zhen － kun2
(1． Institute of Traditional Chinese Medicine，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China;
2． Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China)
Abstract:Objective:To optimize purification process of total flavones from Impatiens balsamina L． ． Methods:The Static
absorption amount and desorption ratio were taken as the investigation indexes for screening five kinds of resins like D －
101，HPD400，HPD450，AB －8 and X －5． Screen out the best type of macroporous resin，and determine the separation
and purification condition． Ｒesults:D101 resin was the optimum purification resin for total flavones of Impatiens balsami-
na L．，and the best sample quality was 9． 415mg /mL;concentration of sample solution was 1． 387mg /mL;volume of wa-
ter was 5BV;eluent of 60% ethanol of 8BV． Conclusion:D101 resin is feasible for purification of total flavones from Im-
patiens balsamina L．
Key words:Impatiens balsamina L．;Total flavones;Mavroporous resin;Purification
医 籍 探 析
马王堆医书脉证关系研究
关晓光1，隋小平1，佀雪平2，王一静1*
(1．黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040;2．黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150001)
摘 要:马王堆医书上记载了“十一脉”，其脉主要指血管，并无脉中流气的记载。当时血脉和经络尚未
分化，脉既是诊断的依据又是施治的目标。证的概念尚未完全形成，只是以病的形式零散存在。该书脉
证关系初步形成，确立了以阴阳解释脉证关系的基本方向，建立了脉与内脏及相关疾病的内在联系，为
后世辨证施治体系形成奠定了基础。
关键词:马王堆医书;脉证关系;脉诊研究
中图分类号:Ｒ241． 1 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2392(2013)04 － 0081 － 02
收稿日期:2013 － 05 － 10 修回日期:2013 － 06 － 03
基金项目:黑龙江省中医药科研项目(No． ZHY12 － Z105)
作者简介:关晓光(1963 －) ，男，博士，教授。主要研究方向:医学与哲学、医药管理学。
* 通讯作者:王一静(1962 －) ，女，硕士，教授。研究方向:医学伦理学。
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中 医 药 学 报
Acta Chinese Medicine and Pharmacology
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