全 文 ：基金项目:广西自然科学基金 (NO:2013GXNSFAA019112)。
作者简介:吴霜，硕士研究生在读，主要从事中药药理研究。E － mail:512086863@ qq. com
通信作者:郑作文，教授，主要从事中药药理研究。E － mail:zzw_ nn@ 163. com
狗蚁草不同萃取部分含药血清对 HSC － T6 细胞增殖的影响
吴 霜 曹思思 郑作文*
广西中医药大学药理教研室，广西 南宁 530001
【摘 要】 目的:探究狗蚁草不同萃取物对肝星状细胞 (HSC － T6)增殖的影响。方法:制备狗蚁草不同溶剂萃取物的含药血清，
通过 MTT法检测含药血清对肝纤维化体外模型 HSC － T6 增殖的影响。结果:狗蚁草乙酸乙酯萃取物 10%、5%、2． 5%含药血清、95%乙
醇提取物 10%含药血清对 HSC － T6 细胞增殖有抑制作用。结论:狗蚁草乙酸乙酯萃取物和 95%乙醇提取物能够抑制 HSC － T6 细胞的增殖，
其中狗蚁草乙酸乙酯萃取物活性优于 95%乙醇提取物。
【关键词】 狗蚁草;肝纤维化;肝星状细胞
【中图分类号】Ｒ285. 5 【文献标志码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2015)22 － 0023 － 02
The Influnence of Medicated Serum of Different Extracts of Alysicarpus Vaginalis (L．)DC on the Growth of HSC － T6 Cell
WU Shuang CAO Sisi ZHENG Zuowen*
Department of Pharmacology of Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China
Abstract:Objective To investigate the activity of different extracts of Alysicarpus Vaginalis (L．)DC in anti － hepatic fibrosis ．
Methods Prepareing medicated serum of different extracts of Alysicarpus Vaginalis (L．)DC． To study the influence of medicated ser-
um on the growth of HSC － T6 cell that is a vitro model of hepatic fibrosis by the MTT method． Ｒesults Compared with blank control
group，the 10%，5%，2. 5% of medicated serum of ethyl acetate extract and the 10% of medicated serum of 95% alcohol extract of
Alysicarpus Vaginalis (L．)DC significantly inhibite the growth of HSC － T6 cell． Conclusion The ethyl acetate extract and the 95%
alcohol extract of Alysicarpus Vaginalis (L．)DC are active in anti － hepatic fibrosis，the effect of the ethyl acetate extract is better
than the 95% alcohol extract．
Key words:Alysicarpus Vaginalis (L．)DC;hepatic fibrosis;HSC － T6
狗蚁草为豆科链荚豆属植物狗蚁草 Alysicarpus vagnalis
(Linn. )DC. 的全草，又名练荚豆、假花生、山土豆、大叶
青等，主要分布于广西、广东、海南、云南等地［1］。狗蚁
草性凉，味甘、苦，具有去腐生肌、活血通络、清热化湿
的功效，临床用于治疗筋骨酸痛、慢性肝炎、跌打损伤
等［2］。狗蚁草为广西的道地药材，民间用其来治疗慢性肝
炎，但迄今为止，狗蚁草抗肝纤维化作用的研究在国内外
未见有报道。实验通过肝纤维化体外 HSC － T6 细胞模型来
研究狗蚁草不同溶剂萃取物的抗肝纤维化活性。
1 仪器与材料
1. 1 药材 狗蚁草由广西中医药大学药用植物教研室韦松
基教授鉴定为豆科植物链荚豆 Alysicarpus vagnalis (Linn. )
DC. 的全草。
1. 2 实验动物 昆明种小鼠 (清洁级)48 只，雌雄各半，
体重 (20 ± 2) g，由广西中医药大学实验动物中心提供，
合格证号:桂医动字第 11004 号。
1. 3 细胞株 HSC － T6 细胞购买于上海博蕴有限公司。
1. 4 材料 石油醚 (分析纯，批号:20130820，成都市科
龙化工试剂厂);氯仿 (分析纯，批号:20130518，成都市
科龙化工试剂厂);正丁醇 (分析纯，批号:20130409，成
都市科龙化工试剂厂);乙酸乙酯 (分析纯，批号:
201305040，成都市科龙化工试剂厂);DMSO (批号:
020120709370，Amresco);青 链 霉 素 混 合 液 (批 号:
1491907，Gibco);胎牛血清 (批号:121005，浙江天杭生
物科技有限公司);MTT (批号:410c051，Solarbio);秋水
仙碱 (批号:C8190，北京索莱宝科技有限公司)。
1. 5 仪器 Epoch酶标仪 (美国 BIO － TEK 公司);311 型
CO2 培养箱 (美国 ThermoForma 公司);TB － 215 型丹佛精
密天平 (德国赛多利斯公司);HVE － 50 型自动高压灭菌
器 (日本 HIＲAYAMA 公司);DLE560 型超净工作台 (荷
兰 Clean Air公司);明澈 － D 24 UV超纯水仪 (法国默克密
理博公司);G3 型旋转蒸发仪 (德国 Heidolph公司)。
2 实验方法
2. 1 含药血清的制备 取狗蚁草干燥药材，剪碎，称重，
置于开口反应器中加适量 95%乙醇浸泡过夜，次日加入药
材 12 倍量的 95%乙醇，回流提取 3 次。依次保持微沸状态
2、1. 5、1h，过滤，合并 3 次滤液，减压浓缩，干燥，得
95%乙醇部位提取物。将 95%乙醇提取后的药材晒干，加
入 12 倍量纯水，按上述 95%乙醇的提取步骤进行提取，得
到水提物。取适量 95%乙醇提取物，加水溶解，依次用用
石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压浓缩提取液，
干燥，得狗蚁草石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃
取物、正丁醇萃取物。取昆明种小鼠 48 只，雌雄各半，随
机分为空白对照组、秋水仙碱组、95%乙醇提取物组、石
油醚萃取物组、氯仿萃取物组、乙酸乙酯萃取物组、正丁
醇萃取物组、水提取物组，每组雌雄各 3 只。阳性对照组
给秋水仙碱 0. 8mg /kg，空白对照组给纯水，其余各组给予
相应药物，灌胃给药，给药剂量均相当于生药量 112 g /kg，
灌胃容积均为 20ml /kg，连续 5d，每天 2 次。最后一次给药
(灌胃前禁食不禁水 12h)1h 后，摘眼球取血，3000rpm 离
·32·中国民族民间医药 2015年 11月第 24卷第 22期 Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2015，Vol. 24，No. 22
心 10min，取上清，于 56℃下温育 30 min灭活，过滤除菌。
每组药物含药血清设 10%、5%、2. 5%三个浓度，5%和
2. 5%含药血清组再分别加入 5%和 7. 5%空白对照小鼠血
清，使各组培养液总血清含量均为 10%［3］。
2. 2 对 HSC － T6 细胞增殖的影响 取处于对数生长期
的 HSC － T6 细胞，消化制成单细胞混悬液，取适量混悬
液，用 0. 4% Trypan Blue 染色，在显微镜下计数，活细
胞百分数应大于 90%。调整细胞浓度至 5 × 103 个 /ml，
取细胞悬液接种于 96 孔板中，100μl /孔，37℃、5%
CO2 的培养箱中培养，24h 后吸出 96 孔板中的原培养
液，加入相应含药血清培养液 200μl，每组药物的含药
血清分别设 4 个复孔，37℃、5% CO2 的培养箱中培养，
24h后每孔加入 MTT 溶液 (5mg /ml) 15μl，37℃ 培养
4h，吸去上清液，每孔加 DMSO 150μl，室温下用微量
振荡器震荡 10min，酶标仪双波长法测吸光度 A570 /630
(检测波长 570nm，参照波长 630nm)，根据抑制率 =
(对照组 A570 /630 － 给药组孔 A570 /630) /对照组
A570 × 100%计算抑制率。
2. 3 统计学处理 采用 SPSS 13. 0 软件，计数资料以均数
加减标准差 (x ± s)表示，组间比较采用单因素方差分析，
P ＜ 0. 05 表示差异有统计学意义。
3 结果
由表 1 可知，狗蚁草不同萃取物含药血清作用于 HSC
－ T6 细胞 24h 后，其乙酸乙酯萃取物含药血清在 10%、
5%、2. 5%三个浓度下，HSC － T6 细胞增殖明显低于空白
对照组 (P ＜ 0. 05);狗蚁草 95%乙醇提取物含药血清在
10%浓度下，HSC － T6 细胞增殖明显低于空白对照组 (P
＜ 0. 05);HSC － T6 细胞在狗蚁草石油醚、氯仿、正丁醇、
水提取物含药血清培养液中的增殖与空白对照组比较差异
无统计学意义 (P ＞ 0. 05)。
表 1 狗蚁草不同提取物含药血清对 HSC － T6 细胞增殖的影响 (x ± s，n = 4)
组别
10%含药血清 5%含药血清 2. 5%含药血清
A570 /630 抑制率 /% A570 /630 抑制率 /% A570 /630 抑制率 /%
空白对照组 0. 43 ± 0. 03 － 0. 51 ± 0. 06 － 0. 58 ± 0. 05 －
秋水仙碱组 0. 36 ± 0. 04* 16. 28 0. 42 ± 0. 04* 17. 64 0. 50 ± 0. 05* 13. 79
水提取物组 0. 42 ± 0. 04 2. 33 0. 53 ± 0. 05 － 3. 92 0. 52 ± 0. 05 10. 34
95%乙醇提取物组 0. 36 ± 0. 04* 16. 28 0. 54 ± 0. 04 － 5. 88 0. 56 ± 0. 02 3. 45
正丁醇提取物组 0. 41 ± 0. 06 4. 65 0. 57 ± 0. 05 － 11. 76 0. 58 ± 0. 01 0. 00
乙酸乙酯提取物组 0. 38 ± 0. 03* 11. 63 0. 42 ± 0. 02* 17. 65 0. 50 ± 0. 02* 13. 79
氯仿提取物组 0. 46 ± 0. 04 － 6. 98 0. 47 ± 0. 02* 7. 84 0. 58 ± 0. 05 0. 00
石油醚提取物组 0. 39 ± 0. 04 9. 30 0. 54 ± 0. 05 － 5. 88 0. 52 ± 0. 05 10. 34
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0. 05。
4 讨论
肝纤维化是指由各种致病因素引起的肝内弥漫性细胞
外基质过度沉淀，是细胞外基质的合成持续大于细胞外基
质降解的结果，是各种慢性肝脏疾病发展的必经阶段［4］。
肝纤维化的发生涉及肝星状细胞 (HSC － T6)、肝细胞、
Kupffer细胞、窦内皮细胞等多种细胞以及多种细胞因子和
酶，其中肝星状细胞的激活是肝纤维化的关键环节［5］。当
肝脏细胞受到损伤时，机体就会分泌血小板源性生长因子、
转化生长因子 β、肝细胞生长因子等激活静息状态的肝星
状细胞，激活的肝星状细胞大量增殖，并转化为肌成纤维
细胞合成大量的细胞外基质［6］，导致细胞外基质合成增加
降解减少。鉴于肝星状细胞在肝纤维化发展中的重要作用，
研究以肝星状细胞为靶细胞，建立肝纤维化体外模型用于
抗肝纤维化药物的筛选有重要意义［7］。中药化学成分复杂，
如果直接加入到细胞培养体系中，化学成分的理化性质可
能干扰实验结果导致假阳性的产生。另外，中药的化学成
分未必是发挥疗效的成分，有些药物需经过机体代谢后才
产生具有疗效的物质。所以直接将中药或成分复杂的提取
物加入到培养体系中研究其药效是不大合适的，而含药血
清药理学方法是将药物作用于动物后，取动物血清作为药
物加入到培养体系中，可以很好避免上述弊端［8 － 9］。MTT
法可以检测细胞活力和数目，灵敏度高，重复性好，简单
易操作，快速、经济而且无放射污染，广泛用于细胞增殖
实验［10］。故实验采用 MTT法检测狗蚁草不同溶剂萃取物的
含药血清对 HSC － T6 细胞增殖的作用，结果显示，狗蚁草
乙酸乙酯提取物 10%、5%、2. 5%含药血清、95%乙醇提
取物 10%含药血清对 HSC － T6 的增殖有抑制作用，表明狗
蚁草乙酸乙酯提取物和 95%乙醇提取物可能具有抗肝纤维
化活性，且狗蚁草乙酸乙酯提取物抗肝纤维化活性可能优
于 95%乙醇提取物。
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(收稿日期:2015. 08. 07)
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