全 文 ：黄花忍冬果中总黄酮的提取工艺研究
王 薇，于加平* ，李 勇，孙 鹏 (吉林农业科技学院生物工程学院，吉林吉林 132101)
摘要 ［目的］研究黄花忍冬果中总黄酮的提取工艺。［方法］采用溶剂浸提法对黄花忍冬果实中总黄酮提取工艺进行研究，以总黄酮
产率为指标，探讨溶剂浓度、料液比、提取温度、提取时间和 pH值 5因素对黄花忍冬果实中总黄酮提取率的影响，从而分析最佳提取工
艺条件。［结果］溶剂浸提法的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度 60%，提取温度80 ℃，料液比1∶40(W/V，g /ml，下同)，提取时间1． 5 h，pH
值为 8，总黄酮的提取率为 6． 62%。［结论］该方法筛选了黄花忍冬果中总黄酮的最佳提取工艺，结果准确可靠。
关键词 黄花忍冬;总黄酮;提取;工艺研究
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2012)28 －13790 －03
Study on the Extraction Technology of Total Flavonoids in the Fruits of Lonicera chrysantha
WANG wei et al (College of Bio-engineering，Jilin Agricultural Science and Technology College，Jilin，Jilin 132101)
Abstract ［Objective］To explore the extraction technology of total flavonoids in the fruit of Lonicera chrysantha． ［Method］The extraction
technology of total flavonoids in the fruit of Lonicera chrysantha was studied by the way of solvent． With the yield of total flavonoids as the eval-
uation criteria，the influence of five factors such as solvent concentration，solid-liquid ratio，extraction time，temperature and pH on the yield
of total flavonoids was studied，and the best extraction conditions were obtained． ［Result］The best extraction conditions were 60% of ethanol
concentration，80 ℃ of extraction temperature，1∶40 (W/V，g /ml)of solid-liquid ratio，1． 5 h extracting time，and pH 8，under which the ex-
traction rate of total flavonoids was 6． 62% ． ［Conclusion］The method determined the best and reliable extraction conditions of total flavonoids
in the fruits of Lonicera chrysantha．
Key words Lonicera chrysantha;Total flavonoids;Extraction;Technology study
基金项目 吉林省教育厅项目(吉教科合字［2011］第 272号);吉林农业科
技学院大学生创新项目(吉农院合字［2011］第045号)。
作者简介 王薇(1989 －)，女，吉林吉林人，本科，专业:生物工程。* 通
讯作者，讲师，从事分析化学和天然产物方面的教学与研究工
作，E-mail:yujiaping0607@ tom． com。
收稿日期 2012-06-21
黄花忍冬(Lonicera chrysantha)是忍冬科(Caprifoliace-
ae)忍冬属(Lonicera)植物。目前，大多数黄花忍冬作为城市
绿化树种及庭院观赏植物，其花和果实大多被废弃。据文献
报道，黄花忍冬花和果实中含有生物活性很高的绿原
酸［1 －2］，而关于其中的黄酮类化合物的研究鲜有报道。黄酮
类化合物是现代很多药用植物的主要成分，具有抗菌消
炎［3］、增加脑血流量及冠脉流量［4］、降压、抗肿瘤和阵痛等作
用［5 －6］。笔者以黄花忍冬果实为原料，对其中的总黄酮进行
提取，确定黄花忍冬果实中黄酮类化合物的提取最优工艺条
件和黄酮含量，以期为合理利用黄花忍冬这一宝贵资源提供
理论依据和数据参考。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。黄花忍冬果实，采自吉林农业科技学院
校园内，经专家鉴定为黄花忍冬(Lonicera chrysantha)的果
实。经阴干，低温干燥处理后，置于恒温干燥箱内备用)。
1． 1． 2 主要仪器。DFY-500 摇摆式高速万能粉碎机，购自
江阴市万达药化机械有限公司;HH-8数显恒温水浴锅，购自
金坛市科析仪器有限公司;UV759CRT 紫外可见分光光度
计，购自上海佑科仪器仪表有限公司;SHB －ⅢA循环水式真
空泵，购自郑州长城科工贸有限公司。
1． 1． 3 主要试剂。芦丁标准品，购自北京捷诚科远化工技
术研究院，批号:100080;无水乙醇和无水氯化钙，均为分析
纯，市售;蒸馏水，自制。
1． 2 方法
1． 2． 1 对照品溶液的制备。精密称取 25． 0 mg 芦丁标准
品，放置于 50 ml 容量瓶中，加入浓度 30%乙醇至刻度，摇
匀，即得浓度 0． 50 mg /ml的对照品溶液。
1． 2． 2 线性关系的考察［7］。分别吸取上述标准样品溶液
0． 0、0． 2、0． 4、0． 6、0． 8和1． 0 ml置于25 ml容量瓶中，然后依
次加入浓度 30%乙醇补足至 12． 5 ml，然后分别加入 0． 7 ml
浓度 5%亚硝酸钠溶液摇匀，放置 5 min后，再各加入 0． 7 ml
浓度 10%硝酸铝溶液，摇匀，放置 5 min，继续加入 5． 0 ml浓
度 1 mol /L的氢氧化钠溶液，最后用浓度 30%乙醇稀释至刻
度。以第 1容量瓶为空白，于 510 nm波长下测定吸光度，以
浓度 C(X)对吸光度 A(Y)建立回归方程。
1． 2． 3 单因素试验。(1)溶剂浓度对黄花忍冬中总黄酮提
取率的影响。准确称取5份黄花忍冬果实粉1． 000 g，分别置
于三角瓶中，向其中分别加入 30 ml浓度为 40%、50%、60%、
70%和 80%的乙醇溶液，密封瓶口避光条件下 60 ℃水浴恒
温 1 h，抽滤，以紫外分光光度法测定吸光度，根据回归方程
计算出浓度后算出产率。(2)提取温度对黄花忍冬中总黄酮
提取率的影响。准确称取5份黄花忍冬果实粉1． 000 g，分别
置于三角瓶中，向其中加入 30 ml 浓度 60%乙醇，密封瓶口
避光条件下，分别置于 50、60、70、80和 90 ℃的水浴恒温 1 h，
抽滤，用紫外分光光度法测定吸光度，根据回归方程计算出
浓度后算出产率。(3)料液比对黄花忍冬中总黄酮提取率的
影响。准确称取5份黄花忍冬果实粉1． 000 g，分别置于三角
瓶中，按料液比 1∶20、1∶30、1∶40、1∶50和 1∶60向其中加入浓度
60%的乙醇溶液，密封瓶口避光条件下 60 ℃水浴恒温 1 h，
抽滤，用紫外分光光度法测定吸光度，根据回归方程计算出
浓度后算出产率。(4)提取时间对黄花忍冬中总黄酮提取率
的影响。准确称取5份黄花忍冬果实粉1． 000 g，分别置于三
责任编辑 石金友 责任校对 况玲玲安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(28):13790 － 13792
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.28.122
角瓶中，向其中加入 30 ml 浓度为 60%乙醇溶液，密封瓶口
避光条件下 60 ℃水浴恒温 0． 5、1． 0、1． 5、2． 0和 2． 5 h，抽滤，
用紫外分光光度法测定吸光度，根据回归方程计算出浓度后
算出产率。(5)pH值对黄花忍冬中总黄酮提取率的影响。
准确称取 5份黄花忍冬果实粉 1． 000 g，分别置于三角瓶中，
向其中加入 30 ml浓度为 60%乙醇溶液，调 pH分别为 6、7、
8、9和 10，密封瓶口避光条件下 60 ℃水浴恒温 1 h，抽滤，用
紫外分光光度法测定吸光度，根据回归方程计算出浓度后算
出产率。
1． 2． 4 正交试验。以黄酮化合物提取率为指标，以乙醇浓
度、料液比、回流浸提时间、提取温度和 pH为考察因素，采用
L16(4
5)进行正交试验，试验因素水平见表 1。黄酮化合物提
取率的计算公式为:
黄酮化合物提取率(%)= 黄酮质量
果实粉末质量
×100
表 1 正交试验因素水平设计
水平
因素
A
温度∥℃
B
料液比∥g /ml
C
时间∥h
D
乙醇浓度∥%
E
pH值
1 50 1∶30 0． 5 30 7
2 60 1∶40 1． 0 40 8
3 70 1∶50 1． 5 50 9
4 80 1∶60 2． 0 60 10
2 结果与分析
2． 1 线性关系的考察 计算得线性回归方程为:Y =
8． 084 5X，R =0． 999 5。试验结果表明，在 0 ～ 0． 05 mg /ml 范
围内，芦丁浓度与吸光度的线性关系良好。
2． 2 单因素试验
2． 2． 1 溶剂浓度对黄花忍冬中总黄酮提取率的影响。图 1
表明，随着溶剂浓度的不断提高，提取效率不断提高;当浓度
达到 60%时，提取率达到最大值，之后随着溶剂浓度的提高
提取率又出现下降趋势，可见溶剂浓度对提取效率影响较
大。因此，溶剂浓度以 60%最佳。
图 1 溶剂浓度对黄花忍冬中总黄酮提取率的影响
2． 2． 2 提取温度对黄花忍冬中总黄酮提取率的影响。图 2
表明，随着提取温度的不断提高，提取效率不断提高;当温度
到达 80 ℃时，提取率达到最大值，之后随着提取温度的提高
提取率又出现下降趋势，可见提取温度对提取效率影响较
大。因此，提取温度以 80 ℃最佳。
图 2 提取温度对黄花忍冬中总黄酮提取率的影响
2． 2． 3 料液比对黄花忍冬中总黄酮提取率的影响。图 3表
明，料液比在 1∶20 ～1∶50时，提取率随料液比增加而增加，在 1
∶50处达到最大，随后料液比增加提取率减小。可见料液比在
一定范围内对提取效率影响较大。因此料液比以 1∶50最佳。
图 3 料液比对黄花忍冬中总黄酮提取率的影响
2． 2． 4 提取时间对黄花忍冬中总黄酮提取率的影响。图 4
表明，随着提取时间不断延长提取率有所上升，在 1． 5 h时达
到最大值，之后又出现缓慢下降趋势。可见提取时间对提取
图 4 提取时间对黄花忍冬中总黄酮提取率的影响
图 5 pH值对黄花忍冬中总黄酮提取率的影响
1973140 卷 28 期 王 薇等 黄花忍冬果中总黄酮的提取工艺研究
率有一定影响。因此确定最佳提取时间为 1． 5 h。
2． 2． 5 pH值对黄花忍冬中总黄酮提取率的影响。图 5 表
明，总黄酮在 pH ＞10(强碱)以及 pH ＜ 6(酸性)的条件下稳
定性较差，提取率极低，在 pH7 ～9时，提取率逐渐提高，且以
pH 8时效果最好。故确定最佳 pH为 8。
表 2 L16(4
5)正交试验结果
试验号
因素
A B C D E
总黄酮提
取率∥%
1 1 1 1 1 1 1． 67
2 1 2 2 2 2 1． 21
3 1 3 3 3 3 0． 29
4 1 4 4 4 4 0． 27
5 2 2 1 3 4 0． 17
6 2 1 2 4 3 1． 39
7 2 4 3 1 2 4． 41
8 2 3 4 2 1 3． 71
9 3 3 1 4 2 3． 66
10 3 4 2 3 1 5． 28
11 3 1 3 2 4 1． 36
12 3 2 4 1 3 1． 78
13 4 4 1 2 3 3． 11
14 4 3 2 1 4 2． 02
15 4 2 3 4 1 6． 62
16 4 1 4 3 2 3． 92
K1 3． 44 7． 71 8． 61 9． 88 17． 28
K2 9． 68 9． 78 9． 90 9． 39 13． 20
K3 12． 08 9． 68 12． 68 9． 66 6． 57
K4 15． 67 13． 07 9． 68 11． 94 3． 82
R 12． 23 5． 36 4． 07 2． 58 13． 46
2． 3 正交试验 由表 2 可知，RE ＞ RA ＞ RB ＞ RC ＞ RD，由 R
值分析得对黄花忍冬果实中黄酮类化合物提取影响的大小
因素依次是:pH值 ＞提取温度 ＞料液比 ＞提取时间 ＞乙醇
浓度;黄花忍冬中黄酮类化合物提取的最佳工艺条件为:pH 8，
乙醇浓度 60%，温度 80 ℃，料液比为 1∶40，提取时间为 1． 5 h。
2． 4 总黄酮含量测定 在最佳提取工艺条件下，将进行 3次
平行的黄花忍冬果实中总黄酮的提取，测吸光度值，根据回归
方程计算出黄花忍冬果中总黄酮的平均含量为 6． 62%。
3 结论
根据单因素试验和正交试验结果分析表明，采用溶剂浸
提法对黄花忍冬果实中总黄酮的最佳提取工艺条件为:乙醇
浓度 60%，提取温度 80 ℃，料液比 1∶40，提取时间 1． 5 h，pH
8;在此条件下，总黄酮的提取率为 6． 62%。
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114．
(上接第 13767 页)
用主要表现在增加了菜薹中可溶性糖和还原糖含量以及降
低硝酸盐含量方面，对菜薹中 VC 和可溶性蛋白含量的作用
不显著。
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