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黑参提取物体内抗肿瘤作用研究



全 文 :实用中医药杂志 2015年11月 第31卷11期(总第274期)
JOURNAL OF PRACTICAL TRADITIONAL CHINESE MEDICINE 2015.Vol.31 No.11
·988·
[基金项目] 黑参抗肿瘤药效物质基础研究(20121135)
黑参提取物体内抗肿瘤作用研究
袁 媛,甘 雨,王 菲,黄 赫,杜佳林,李显华
(辽宁省中医药研究院,辽宁 沈阳 110034)
[中图分类号]R285.5 [文献标识码]B [文章编号]1004-2814(2015)11-0988-03
[摘 要] 目的:探讨人参新炮制品—黑参提取物体内抗肿瘤的活性。方法:采用S180实体瘤、HepA肝癌腹水瘤
制备荷瘤小鼠,通过测定肿瘤质量、生存时间、脾脏胸腺质量,计算黑参抗肿瘤的抑瘤率、生命延长率和胸腺脾脏指
数,观察黑参抗实体瘤、腹水瘤及免疫功能调整作用。结果:黑参高剂量组可以抑制荷瘤小鼠S180实体瘤肿瘤生长,延长
HepA肝癌腹水瘤小鼠的存活时间,改善免疫功能指标。结论:黑参提取物在抗肿瘤和肿瘤免疫调节方面作用较好。
[关键词] 黑参;抗肿瘤;实验研究
[Abstract]Objective:To study the anti-tumor activities in vivo of extract from black ginseng, the new processing product
of ginseng. Method:The tumor-bearing mice were prepared by mouse S180 solid tumor and HepA liver cancer ascites tumor. We
observe black ginseng’s anti-tumor activity and adjusting immunity according to examining the tumor weight,survival time,
thymus and spleen weight and calculating the tumor inhibition rate,life prolonging rate,thymus and spleen index. Result:high
dosage of black ginseng group was found to inhibit the growth of S180 tumor in mice,extend the living time of HepA ascites tumor
loaded mice,as well as improve the immunity. Conclusion:The extract from black ginseng has good effect of anti-tumor and
immunoregulation.
[Key Words] Black ginseng; Anti-tumor; Experiment
对稳定的特性,与心理性格具有相关性[4]。李晓晨提出
体质是人体的一种状态[5]。在先天、后天因素共同作用
下具有先天遗传性、差异多样性、形神一体性、群类趋
同性、相对稳定性、动态可变性、连续可测性、后天可
调性的特点[6],故体质现象是生命活动的表现形式,是
具有某些共性,决定着人体对某种致病因子易感性及其
病变类型的倾向性[7]。体质学说的理论特色在于注重调
节人体整体机能,重视个体间体质差异性以及与疾病的
关系[8],即运用中医学理论对患者的各种临床资料进行
分析综合,概括为完整的体质证型。反之,从体质证型
及其分布特点可以推测生命活动、疾病发生发展规律,
找出其病机特点,采取相应的措施避免致病因子对人体
的侵袭,积极改善特殊体质,增强自身的抵抗力,从而
实现对特殊人群的病因预防[9]。
“ 早 孕 反 应 ” 属 于 中 医 “ 恶 阻 ” “ 子 病 ” “ 病
儿”“阻病”等范畴。中医治疗早孕反应历史悠久,如
《金匮要略·妇人妊娠病脉证并治》曰:“妇人得平
脉,阴脉小弱,其人渴(《金匮要略心典》解此处渴作
呕),不能食,无寒热,名妊娠,桂枝汤主之”,“干
姜人参半夏丸治疗妊娠呕吐不止”,提出早孕反应为妇
人妊娠所患,并明确记载其脉证、治疗方药。中医学对
人体生理病理以及养生防病等方面都十分重视体质差异
[10],虽然有不少关于中医药对早孕反应的防治具有较
好疗效的报告及古代医籍的记载,但目前关于早孕反应
尚无统一的中医体质证型标准,也无大样本的中医体质
证型调查研究。
研究显示,早孕反应中医体质证型共有9类,按百
分比排名顺序分别为平和质、湿热质、痰湿质、阳虚
质、阴虚质、气虚质、瘀血质、气郁质、特禀质。其中
平和质所占比例达68.0%,说明早孕反应的主要证型以平
和质为主,符合临床早孕期孕妇体态适中,面色红润,
精力充沛的状态,与现代医学早孕反应是妇女早期妊娠
的正常生理反应相符,代表早孕期孕妇强健壮实的体质
状态;湿热质、痰湿质比例高于阳虚质、瘀血质、气郁
质,可能与重庆地域湿热之气较重、人民嗜食肥甘厚腻
有关,与中医学中“天人相应”相符。体质也决定着某
些疾病的症类型[11],体质的偏颇对某些疾病具有易感性
的特点,对疾病的转归和预后均具有一定程度的影响。
通过分析早孕反应的中医体质分布规律,可对早孕期
孕妇行个体化调治,改善其生活质量,提高优生优育率。
[参考文献]
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[收稿日期]2015-07-06
实用中医药杂志 2015年11月 第31卷11期(总第274期)
JOURNAL OF PRACTICAL TRADITIONAL CHINESE MEDICINE 2015.Vol.31 No.11
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肿瘤是威胁人类健康的重大疾病之一,目前放化
疗抑制肿瘤的同时对人体有很大的伤害。较多的研究
报道表明人参的抗肿瘤作用明显,红参的抗肿瘤活性
优于人参。为探讨黑参的抗肿瘤活性,笔者通过实体
瘤S180生长的抑制作用、HepA肝癌腹水瘤的生命延长
作用以及免疫功能调整作用,对黑参提取物、红参提
取物的抗肿瘤活性进行了比较,确定了黑参的抗肿瘤
疗效。
1 实验材料
动物与瘤株:昆明种小鼠270只,体质量18~22g,
雌雄各半,购自辽宁长生生物技术有限公司,许可证号
SCXK(辽)2010-0001。S180瘤株、HepA肝癌腹水瘤均
购于上海轩研生物科技有限公司。
仪器:超净工作台(型号class Ⅱ TYPE A2 BSC系列
生物安全柜,北京东联哈尔仪器制造有限公司生产)。
药品:消癌平(南京圣和药业有限公司生产,生产
批号201304241),环磷酰胺(通化茂祥制药有限公司
生产,生产批号130201),黑参提取物(低、中、高剂
量)自制得到[1,2],红参提取物(低、中、高剂量)自
制得到。
2 实验方法[3,4]
2.1 实体瘤S180抑瘤作用
荷瘤小鼠造模。将S180瘤株用生理盐水以1000r/min经
10min离心洗涤2次后,洗掉细胞中胰蛋白酶和培养液中
血清等成分,用台盼蓝染色法计数活细胞数,用生理盐
水将肿瘤细胞稀释成1×106~1×107浓度,进行传代。
无菌条件下取S180腹水瘤小鼠,抽取传代第8日的荷瘤小
鼠的腹水置于盛有生理盐水的带塞试管中,按瘤株与生
理盐水1∶3稀释,每个接种点以0.2mL,1×106~1×107
个细胞数,用1mL的皮下注射器注射接种到右前肢腋窝
处腋下部皮下,共90只,整个操作于30min内完成。
给药及计算抑瘤率。接种24h后将小鼠按体质量随
机分为9组,每组10只。环磷酰胺西药对照组,给药浓
度为25mg/kg;消癌平中药对照组,给药浓度为25mg/
kg;6个给药组分别给予红参、黑参提取物低、中、高
剂量,折合生药量分别为13.6mg/kg、27.2mg/kg和40.8mg/
kg;模型对照组给予同体积的蒸馏水。以上各组均为灌
胃给药,0.8mL/20g,1日1次,连续给药10日,荷瘤小鼠
末次给药24h后称体质量,脱臼处死,剥离取下腋下肿
瘤并用滤纸吸干,立即称取瘤重,计算抑瘤率,进行疗
效评价。计算公式为肿瘤生长抑制率(%)=(空白对照
组平均瘤质量-给药组平均瘤质量)/空白对照组平均瘤
质量×100%。
2.2 HepA肝癌腹水瘤生命延长作用
荷瘤小鼠造模。无菌条件下抽取传代第8日的荷瘤
小鼠的腹水置于盛有生理盐水的带塞试管中,按瘤株与
生理盐水1∶3稀释,作为HepA小鼠肝癌腹水瘤细胞悬
液。用一次性注射器或经高压消毒的注射器吸取HepA小
鼠肝癌腹水瘤细胞悬液0.2mL,于经碘酊、乙醇消毒过
的腹部皮肤作腹腔注射。共90只,整个操作于30min内
完成。
给药及计算生命延长率。接种24h后将小鼠按体
质量随机分为9组,每组10只。环磷酰胺西药对照组,
给药浓度为25mg/kg;消癌平中药对照组,给药浓度为
25mg/kg;6个给药组分别给予红参、黑参提取物低、
中、高剂量,折合生药量分别为13.6mg/kg、27.2mg/kg和
40.8mg/kg;模型对照组给予同体积的蒸馏水。以上各组
均为灌胃给药,0.8mL/20g/次/日,连续给药10日,荷瘤
小鼠末次给药24h后称重,从第11天开始停止给药,继
续饲养观察,在观察期间记录小鼠的一般情况(饮食、
外观、行为、分泌物、排泄物、中毒表现和死亡情况
等)。计算存活时间及生命延长率。计算公式为生命延
长率(%)=(给药组平均生存时间-空白对照组平均生
存时间)/空白对照组平均生存时间×100%。
2.3 免疫功能调整作用
将接种S180瘤株24h的小鼠按体质量随机分为9组,每
组10只。环磷酰胺西药对照组,给药浓度为25mg/kg;消
癌平中药对照组,给药浓度为25mg/kg;6个给药组分别
给予红参、黑参提取物低、中、高剂量,折合生药量分
别为13.6mg/kg、27.2mg/kg和40.8mg/kg;模型对照组给予
同体积的蒸馏水。以上各组均为灌胃给药0.8mL/20g,日
1次,连续给药10日,荷瘤小鼠末次给药24h后称重,断
尾取血,测白细胞数。之后处死小鼠,摘取胸腺、脾脏
称重,计算胸腺指数、脾脏指数。计算公式为胸腺指数
=(胸腺质量/小鼠质量)×10,脾脏指数=(脾脏质量/
小鼠质量)×10
2.4 统计分析
采用spss软件对数据进行处理,数据以(x±s)表
示,组间比较采用t 检验,P<0.05为差异有统计学意义。
3 实验结果
各组对S180实体瘤抑制作用见表1。
表1 各组对S180实体抑瘤作用
组别
动物数
(只)
给药前体质
量(g)
给药后体质量
(g)
瘤质量
(g)
抑瘤率
(%)
模型对照组 10 18.50±1.18 23.50±1.59 1.516±0.217 0
消癌平组 10 18.67±1.22 22.09±1.78 0.666±0.242 56.06
环磷酰胺组 8 18.67±1.14 20.84±0.84 0.230±0.093△ 84.83△
黑参高剂量组 10 18.43±1.05 23.43±3.89 0.574±0.190△ 62.16△
黑参中剂量组 10 18.28±0.92 22.19±2.14 0.903±0.325 40.48
黑参低剂量组 10 18.40±1.24 22.51±2.37 1.073±0.510 29.27
红参高剂量组 10 18.40±1.07 20.97±1.37 0.721±0.189△ 52.43△
红参中剂量组 10 18.50±1.10 19.83±0.89 0.744±0.162 50.95
红参低剂量组 10 18.50±0.96 21.72±1.21 1.270±0.139 16.24
注:与模型对照组比较,△P<0.05。
各组对HepA肝癌腹水瘤的生命延长作用见表2。
表2 各组对HepA肝癌腹水瘤生命延长
组别
动物数
(只)
体质量
(g)
生存天数
(d)
生命延长
率(%)
模型对照组 10 20.89±1.26 13.0±1.6 —
消癌平组 9 20.27±1.74 14.5±1.9 31.0
环磷酰胺组 10 21.44±1.72 16.2±2.1 38.2
黑参高剂量组 10 20.68±1.82 19.3±2.2△ 48.2△
黑参中剂量组 10 20.60±1.19 15.4±1.8 35.1
黑参低剂量组 10 20.16±1.48 15.1±1.9 33.8
红参高剂量组 10 20.54±1.90 16.1±1.9 37.9
红参中剂量组 10 20.74±1.17 15.7±1.7 36.3
红参低剂量组 10 20.76±1.33 15.3±1.5 34.6
注:与模型对照组比较,△P<0.05。
各组免疫功能调整作用见表3。
表3 各组胸腺及脾脏指数比较
组别
动物数
(只)
胸腺指数 脾脏指数
模型对照组 10 0.37±0.15 0.08±0.07
消癌平组 10 0.40±0.17 0.08±0.09
环磷酰胺组 10 0.25±0.21 0.07±0.11
黑参高剂量组 10 0.53±0.08△ 0.09±0.02△
黑参中剂量组 10 0.49±0.12 0.08±0.07
黑参低剂量组 10 0.45±0.11 0.08±0.08
红参高剂量组 10 0.46±0.20 0.08±0.09
红参中剂量组 10 0.44±0.19 0.08±0.10
红参低剂量组 10 0.42±0.14 0.08±0.05
注:与模型对照组比较,△P<0.05。
实用中医药杂志 2015年11月 第31卷11期(总第274期)
JOURNAL OF PRACTICAL TRADITIONAL CHINESE MEDICINE 2015.Vol.31 No.11
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4 讨 论
常规化疗药物多为细胞毒性药物,在杀伤瘤细胞同
时也损害机体的免疫系统,而免疫功能低下又可促进肿
瘤的发生和发展,因此肿瘤的发生与机体的免疫状况密
切相关。因此,通过用一些增强免疫功能的药物可使肿
瘤消退或延缓其发展。
人参(Panax ginseng C.A.Meyer)为五加科植物人参
的干燥根,是亚洲常见药材,具有很高的药用和历史文
化价值,被誉为“草药之王”,在科学研究领域和国际
市场一直占有极其重要的地位,被广泛应用。其性平,
味甘、微苦,微温,用于大补元气、复脉固脱、补脾益
肺、生津止渴、安神益智。现代临床医学和药理学研究
表明,人参具有提高机体免疫力、抗疲劳、抗肿瘤、降
血糖以及抗炎等多种活性,在医学及养生方面具有可观
的价值。近年来,各种各样的人参炮制品作为功能食品
用于饮食,其中包括白参、红参、黑参等。黑参是利用
传统的九蒸九曝炮制方法将人参反复蒸制烘干而得到的
一种人参深加工品,是继红参后的又一人参新产品[1]。
黑参比白参和红参有更强的抗肿瘤、抗炎、提高免疫力
等生物活性。实验表明,黑参高剂量组可以抑制荷瘤小
鼠S180实体瘤肿瘤生长,延长HepA肝癌腹水瘤小鼠的存
活时间,改善免疫功能指标。提示黑参在抗肿瘤以及肿
瘤免疫调节方面具有进一步研究和开发的价值。
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[收稿日期]2015-05-15
慢性肾衰竭是指各种慢性肾脏疾病进行性进展,引
起肾脏结构和功能不可逆的丧失,导致以代谢产物和毒
物潴留、水电解质和酸碱平衡紊乱以及肾脏内分泌功能
失调为特征的临床综合征[1]。王爱民主任中医师为重
庆市第二批老中医药专家学术继承指导老师,从医近40
年,现将王老师诊治慢性肾衰竭的临证经验介绍如下。
1 病因病机
慢 性 肾 衰 竭 属 中 医 “ 水 肿 ” 、 “ 癃 闭 ” 、 “ 虚
劳”、“溺毒”、“关格”等范畴。是内因正气不足,
外因风寒、风热、时行病毒所致。外邪入侵途径有二,
一是邪毒从皮毛玄府而入,因肺于皮毛相合,又因少
阴肾脉注入肺中,外邪因肺经气血之道侵犯于肾。二是
邪毒从气道而入,结于咽喉,少阴肾脉注入肺循于咽
喉,外邪经咽喉随少阴经脉下犯于肾,伤其封藏之功,
经脉、血络之能,精血外溢;邪毒不解,盘踞于肾,损
及肾阳温煦脏腑之力,导致五脏六腑气化不足。由于肺
不布津、脾失转运、肾失开合、肝失疏泄导致水谷代谢
失常,水液不行、五谷不化而产生水湿之邪;水湿停积
日久,化热化浊,又产生湿热、痰浊之邪;浊邪蕴结日
久,化瘀化毒,又产生瘀血、溺毒之邪。王老师认为水
湿、湿热、痰浊、瘀血、溺毒之邪既是病变过程中的病
理产物,又是疾病的恶化因素,与正虚互为因果,形成
标虚本实、内外相感的多环节病理局面。肾先受邪,封
藏失职,为病之始;授之于肺,通调失司,为病之表;
传之于脾,枢机不利,为病之里;伤之于肝,气机不
疏,为病之重;陷之于心,血脉瘀阻,为病之凶;还之
于肾,为病之终。
2 治疗方法
掌握其发生发展规律及传变途径,早发现,早治
疗,如有些慢性肾衰的早中期患者,血肌酐已经有所升
高,但无症状。王老师主张口服百苓胶囊、尿毒清颗粒
或降浊中药汤剂。缓解后防止其复发。注重摄生保健。
做好患者的思想工作,正确对待疾病,认为“静则神
藏,躁则消亡”。意志坚定,心情愉快,家庭和睦,积
极配合非常重要。其次是低盐低脂优质蛋白饮食,忌过
敏过咸过腻之品,以及伤胃败肾之味;伴水肿者春天可
啖荸荠,冬天可啖鲜萝卜。避风寒湿外袭,适应季节变
化,防止外感疾病;房事慎行,防伤败己亏之肾气;根
据《素问·宣明五气》“久卧伤气,久坐伤内”之训,
鼓励病者在体力允许的前提下,做些轻微劳动。以促进
体内新陈代谢。气虚、贫血者,用太子参、黄芪各15g,
陈皮10g,枸杞子15g,鸭子1只,猪夹心肉100g,味精
3g,食盐、酱油各6g, 绍酒10g,葱白15g,生姜6g,菜
油75mL,上汤500mL。表现为脾肾阳虚,尿频、肢冷、
便溏者予以狗肉200g,菟丝子3g,附片1.5g,食盐0.5g,
味精、姜适量。尿毒症表现恶心、呕吐、食欲缺乏者予
以橘皮、竹茹、柿饼各30g,生姜3g,白糖适量。
治病求于本,强调维护肾气。《黄帝内经》曰“治
病必求于本”,本者,致病之由也。张景岳说“反治病
者,在必求干本,或本于阴,或本干阳,求得其本,然
后可以施治”“未有不明阴阳而能知疾病者”。肾为水
火之脏,五脏六腑之精藏于此,气化于此,精即阴中之
水也,气即阴中之火也,故肾之水火,为诸脏腑之化
源。明代《虞抟学正传》曰:“肾元盛则寿延,肾元衰
则寿夭。”王老师对慢性肾衰病机的分析,认为肾病日
久,因失治或误治致肾功能日益衰退,气血阴阳虚惫,
肺脾心肝等内脏功能亦为之虚损,故在治疗中强调维护
肾气和其他内脏的功能,切不可用克伐之品而损阴伤
阳,促使肾及其他内脏功能的进一步衰竭。
重视脾胃调理,尤其是补脾阴。汪机《石山医案.病
王爱民治疗慢性肾衰竭经验
胡江华
(重庆市万州区中西医结合医院肾病科,重庆 404000)
[中图分类号]R249.7 [文献标识码]B [文章编号]1004-2814(2015)11-990-02
老中医经验