全 文 ：第 l0卷 第 2期
2 0 0 2年 6月
中 国 生 态 农 业 学 报
Chinese Journal of Eco—Agriculture
VO1．10 NO．2
June， 2002
西藏卓巴百合组织培养技术研究
潘锦旭 邢 震 郑维列
(西藏农牧学院林学系 林芝 860000)(西藏高原生态研究所 林芝 860000)
摘 要 对西藏野生卓巴百合(Lilium wardlii stapf)进行组织培养结果表明，选用球茎内层、基部的鳞片作为外殖
体，转绿率最高；在参试的培养基 中MS+BA0．5mg／kg+NAA0．5～1．0mg／kg的培养基对诱 导愈伤组织(EC)和不
定芽的效 果较好，MS+IBA1．0mg／kg对促进 小鳞 茎生根 效果最佳 ；茎盘切 块在 MS+BA0．2～0．5mg／kg+
NAA0．5～1 0mg／kg的培养基上能正常转绿，形成愈伤组织和不定芽；活性碳有助于小鳞茎生根；组培苗移栽到松
锯 末 中其 成活率 可达到 95％。
关 键词 卓 巴百 合 组 织培 养 鳞 片 茎盘 不定芽
Tissue culture of Lilium wardli．PAN Jin—Xu，XING Zhen(Forestry Department of Tibet Agricuhural and Animal Col—
lege，Linzhi 860000)，ZHENG Wei—Lie(Plateau Ecological Research Institute of Tibet，Linzhi 860000)，CJEA，2002，
l0(2)：26～28
Abstract Tissue culture of Lilium wardlii shows that the most perfect method of inducing EC(calus)and uncertain
budlets belongs the medium of MS and BA 0．5mg／kg and NAA0．5～1．0mg／kg：the best medium inducing roots from lit—
tie bulbs is the medium of MS and IBA1．0mg／kg；the sterm cuts can be green and induce EC and uncertain budlets in the
medium of MS and BA0．2～0．5mg／kg and NAA0．5～1．0mg／kg；the active carbon can help little bulbs striking rots
when the tissue culture plants are moved to raise in the pine sawdust and their survival rate is 95 percent．
Key words Liliurn wardlii，Tissue culture，Bud scale，Sterm cut，Uncertain budlets
国内有关百合栽培与栽培种的组织培养研究较多 。。 ，但对卓巴百合 的组织培养 目前 尚未见报道。“卓
巴百合”(Lilium wardli stapf)是 我 国原 始 野生 特 有 百合 种 ，花 浅 紫 色或 粉 红 色 ，具 深紫 色 斑点 ，无珠
芽 ，观赏价值较高 ；性寒 、味苦 、甘 ，润肺止咳 ，可作为药材 或保健 野菜。在野生生境 中“卓 巴百合 ”主要
通过根系繁殖鳞茎 ，繁殖 系数较低 ，为有效保护和科学开发利用野生百合资源 ，本研究 应用 组织 培养技术对
“卓 巴百合”进行快速繁殖 ，并取得一定成果 。
1 试验材料与方法
将林芝地区鲁朗县(海拔 2500m左右)采集的“卓巴百合”鳞茎分成 2组，直径>0．8cm的为第 1组，称
为大鳞茎；直径<0．8cm的为第 2组，称为小鳞茎。用流水分别将 2组“卓巴百合”的鳞茎冲洗2～3h后用细
刷刷去表面污垢 ，分别剥 取大 鳞茎 和小鳞 茎 的外层 、内层鳞 片 ，在 无菌 条件 下用 70％酒精 浸泡 30s，再 用
1．0g／kg的 HgC1，浸泡 10min作常规 灭菌 ，最后用 无菌滤纸 吸干水 分等待接种 。将不 同外植 体分别接 种在
MS、1／2MS附加不 同种类 和浓度激 素的 固体 培养基上 ，观察统 计其成 活及生长情 况。培养基 蔗糖浓 度为
30g／kg，琼脂量为 5．5g／kg，pH为 5．6，培养温度 25±2C，光照 1500～20001x，每天光照时数 10～16h，2组鳞
片切成上部 、基部 2部分后分别进行培养 ，茎盘切成 0．2cm×0．2cm 的小块进行培养 。
2 结果与分析
将大 、小 2组鳞片分外层 、内层并按上部 、基部取样 ，共 8种类型的外植体 ，将其切成 0．2cm×0．2cm 的
小块分别接种在 MS+BA0．5mg／kg+NAA0．5mg／kg培养基上进行培养 ，14d后观察统计其鳞片 的转绿率。
由表 1可知，分别用大鳞茎外层、内层的上部与基部 ，小鳞茎内层、外层的上部与基部鳞片作外植体，大鳞茎
内层上部与 基部 和小鳞 茎 内层与 基部在 MS+BA0．5mg／kg+NAA0．5mg／kg培 养基上 的转绿 率最高 ，为
100％，而小鳞茎外层上部的鳞片转绿率最低。若分别按球茎大小统计，则大鳞茎和小鳞茎的平均转绿率分
别为 73．5％和 73．8％，二者无明显差异 ；若分上部 、基部 2组统 计 ，其平均转绿率分别为 55．9％和 94．1％，
收稿 日期 ：2000·09·24 改回日期 ：2000—12-06
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第 2期 潘锦旭等：西藏卓巴百合组织培养技术研究 27
差异达极显著 ；若分内层 和外层 2组统计 ，其平
均转绿 率分别 为 96．8％和 43．75％，差 异达极
显著 ，这说 明转绿率与鳞 茎的大小无关 ，而取决
于鳞 片在球 茎 中 的部位 和 鳞 片 的部位 。据 观
察 ，“卓巴百合”的大 、小球茎鳞 片基部 可形成 致
密的愈伤组 织群 ，但 在培 养过程 中鳞茎 的外层
鳞片转绿 率明显低 于 内层 鳞片 ，且 在鳞 茎形成
阶段鳞茎 由 内向外 生长 ，随着鳞 茎外层 膨 大鳞
片内干物 质含量增 加 ，鳞 片脱 分化 的可能性增
加 ，故选用球茎内层 、基部 的鳞 片作 为外植体 效
果最好。
表 1 鳞 片的选择
Tab．1 The choice of bud scales
外植体类型 接种数／块 转绿数／块 转绿率／％
Material types Sum of culturing Sum of greening Rate of greening
表 2 诱导 愈伤组 织与不 定芽的培 养基选择
Tab 2 The medium choice for inducing EC and shoots from scale cuts
取小 鳞 茎的鳞 片基 部
切块 ，接种在不同培养基上
60d后观察结果见表 2。由
表 2可 知 ，MS+BA 0．5
mg／kg+NAA0．5mg／kg培
养基对 愈伤 组织 的诱 导 率
最 高 ，为 100％，且 健 壮 不
定芽数 目最多 ，每个切块达
7～ 1 3个 ；其 次 为 MS+
BA0．5mg／kg+NAA1．0mg／kg培养基 ，愈伤组织的诱导率 达 96．7％，每个切块有 5～8个不定芽 ，且愈伤组
织生长速度较快 、质量较高 ，二者差异不显著。当 NAA浓度增 到 1．5mg／kg时 ，愈伤组织 的产生 受到抑制 ，
诱导率为 40％左右，其表面泛褐色，结构疏松，呈水渍状 ，每个切块只有 2～3个不定芽，若不加 NAA则几乎
不能产生愈伤组织，每个切块仅有 1～2个不定芽，与前二者差异显著。愈伤组织产生后在同一培养基上增
殖时发现 ，在 MS+BA0．5mg／kg+NAA0．5～1．0mg／kg上启动并增殖的愈伤组织增殖效果最为 明显 ，增殖达
30～40倍 ；在 MS+BA0．5mg／kg+NAA1．5mg／kgJ2其表层发褐的愈伤组织不见分化 ，下层愈伤组织能够增
殖 ，增殖达 4～8倍 ，后期表面变褐 ，呈水渍状 ；而 在 MS+BA1．0mg／kg+NAA1．0mg／kg、MS+BA0．2mg／kg
+IAA 1．0～1．5mg／kg~其愈伤组织增殖缓慢 。
为进 一 步 了解 不 同
激素 对诱 导 愈 伤 组 织 和
不 定 芽 的 影 响 ，切 取
0．2cm×0．2cm 的正 常愈
伤组 织块 接 种 到 不 同 培
养基上 (见 表 3)，1个 月
后 的 观 察 结 果 表 明 ，在
MS+BA0．5meJkg+NAA
0．5n 培养基上愈伤组
织 的不定芽 诱导率 最高 ；
在其 他 5种 培 养 基上 愈
伤组织 的表面严重 变褐 ，
表 3 不 同激 素对愈伤 组织诱导 不定芽 的影响
Tab．3 Effect of hormones on EC inducing
芽诱导率低，且肥大、扭曲，仅有少数形成小鳞茎。
用鳞片切块萌发的不定芽接种到 MS+BA0．5mg／kg+NAA0．5mg／kg培养基上培养 2个 月形成小 鳞茎
后 ，再接种到 5种培养基上(见表 4)，1个月后进行观察结果表 明，在 MS+IBA1．0mg／kg的培养基上小鳞 茎
生根率最高，达到 100％，平均每个茎块生根 3．5条，当 IBA含量增加到2．0mg／kg以上时其生根率下降，但平
均每个茎块生根数量相差 不大 ，且根系较粗 壮。此外在 1／2MS+BA2．0mg／kg+BA0．5mg／kg的培养基上加
0．3％的活性 炭 ，其生根率由 0提高到 60％。
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中 国 生 态 农 业 学 报 第 10卷
表 4 小鳞茎 的生根试 验
Tab．4 The rooting experiment of little bulbs
为 100％，愈伤组织分化 明显 ，生长 良好且有
不 定 芽 产 生。 分 别 接 种 到 MS+BA0．5
mg／kg+NAA0．5～1．0mg／kg上后不定芽 、愈
伤组 织增殖 明显 。不 定芽 形成 的小 鳞茎 接
种到 MS+IBA1．0mg／kg上能够 分化形成根
系。已生根 的小 鳞茎 经 14d室 内常 规炼 苗
后栽种到经高温灭菌 的松 锯末中 ，栽后 用薄
膜覆盖 ，四周 压实 ，1个 月后 观察 ，其成活 率
达 95％ 。
3 小结与讨 论
把茎 盘切块 接种 到各
种培 养基 上 14d后观 察统
计结果 (见 表 5)表 明，茎盘
在 NAA0．5～ 1．0mg／kg的
培养基 上均 不能 分化 形成
愈伤 组织 ，而茎 盘在 MS+
BA 0．2 mg／kg+ IAA 1．0
mg／kg 和 MS + BA 0．5
mg|kg+NAA0．5mg|kg培
养基 上均 能成活 ，转绿率
表 5 激素 对茎盘 的影响
Tab．5 Effect of hormones on short stems
外植体采集的时问直接影响 了鳞 片切块愈伤组织和不定芽诱 导成 功率 ，取 材时间若选择在春季萌发时
小鳞茎外层鳞片的上部(2～1)切块不能转绿 ，而在冬季休 眠期取 材时仅有 20％能正 常转绿 ，并形成 了愈伤
组织，且在春季取材的“卓巴百合”经在 MS+BA0．5mg／kg+NAA0．5～1．0mg／kg上培养 4个月后少数能够
直接形成根系，在休眠期取材的“卓巴百合”经 4个月在同一培养基上培养后依然分化大量的愈伤组织；鳞片
切块的转绿是产生不定芽 、愈伤组织 的必要条件 ，在未转绿 的鳞片上试验范围内任何 1种培养基均不能诱导
其生成愈伤组织或不定芽 ，但转绿后鳞片切块在适宜培养基上均能诱导生成愈伤组织或不定芽 ；部分通过愈
伤组织诱导形成的不定芽展叶后叶片肥厚、扭曲，现象同黄济明所述 ]，但由于试验条件所限，无法确定其真
正原因，故在组织培养繁殖“卓巴百合”时为保持原种的特性，目前应采用由鳞片切块直接形成的不定芽产生
的幼苗 ；在愈伤组织诱导期 中愈伤组织形成后应及时转瓶 ，否则易导致下层愈伤组织分化形成粗壮 的根系 ；
在培养试验 中采用野外植株根 系切段进行试验 ，根系增粗 ，无愈伤组织 、不定芽形成 ，而培养过程 中由愈伤组
织直接生成 的根系在 MS+BA0．5mg／kg+NAA0．5mg／kg上可脱 分化后形成不定芽 、愈伤组织 ，其原 因尚有
待于进一步试验研究。
参 考 文 献
1 中国科学院青藏高原综合科学考察队 西藏植物志 北京：科学出版社，1987．542
2 赵详云等．百合珠芽的组培及脱毒研究 园艺学报 ，1993，20(3)：284～288
3 黄济明 百合的组织培养和试管内诱发多倍体试验 园艺学报 ，1983，10(2)：125～127
4 黄敏玲等 透百合离体快速繁殖 植物生理学通讯，1993，29(6)：43
5 陈为民 百合离体培养再生植株 植物生理学通讯 。1983(3)：46
6 陈为民等 卷丹和青岛百合的组织培养及植株分化．植物生理学通讯，1982(2)：35～36
7 杨增海等 植物生长调节剂对百合组织培养繁殖的效应 西北农业大学学报 ，1987(3)：72～78
8 杨成德．百合鳞片不同部位的小鳞茎分化与激素调节研究．兰州大学学报(自然版)，1988，24(3)：95～99
9 王兆禄等．宜兴百合生长发育特征及其增产技术的初步研究．中国蔬菜，1986(3)：30～33
10 龙雅宜等 百合属资源的保护与利用 植物资源与环境 ，1998，7(1)：40～44
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