免费文献传递   相关文献

白背叶根提取物的体外抑菌试验



全 文 :(总 )广西中医药 2012年 6月第 35卷第 3期
白背叶根为广西民间常用草
药,原植物为大戟科野桐属植物白
背木 Mallotus apelta(Lour.)Muell.
Arg.的干燥根,别名白背叶、白鹤
叶、白面戟、白面风、白桃叶。其性
平,味微苦、涩,归肝、脾经。具有清
热解毒、收涩消瘀的作用,用于慢
性肝炎、肝脾肿大、子宫脱垂、脱
肛、白带、妊娠水肿等[1]。民间常用
其鲜根水煎服治疗急慢性肝炎、妇
科炎症。为了探索白背叶根的最佳
体外抑菌效果,现对白背叶根四种
不同溶剂提取物进行体外抑菌试
验,为进一步研究白背叶根提供科
学依据。
1 实验材料
1.1 材料 白背叶根采于广西博
白县顿谷镇云飞嶂深山,经广西民
族医药研究院生药鉴定室副主任
药师周丽娜鉴定为大戟科野桐属
植物白背木Mallotus apelta(Lour.)
Muell.Arg.的干燥根。 白背叶根提
取液,由广西中医药大学现代中药
制剂工程研究中心制备。
1.2 菌种 金黄色葡萄球菌敏感
株(G+)、金黄色葡萄球菌耐药株
(G+)、大肠杆菌(G-)、变形杆菌
(G-)、枯草杆菌(G+)、绿脓杆菌
(G-)均购于中国药品生物制品检
定所。
2 方 法
2.1 白背叶根四种提取物的制备
2.1.1 白背叶根水提物 称取100 g
白背叶根置于圆底烧瓶中,按料液
比1∶10加入1 000 ml纯化水,加热
提取2次,每次1 h,过滤,合并滤
液,浓缩至2 g/ml药液,4 ℃冰箱保
存备用。
2.1.2 白背叶根50%醇提物 称
取100 g白背叶根置于圆底烧瓶
中,按料液比1∶8加入800 ml 50%
乙醇,用电热套加热,回流提取2
次,每次1 h,过滤,合并滤液,减压
浓缩至2 g/ml药液,4 ℃冰箱保存
备用。
2.1.3 白背叶根70%醇提物 称
取100 g白背叶根置于圆底烧瓶
中,按料液比1∶8加入800 ml 70%
乙醇,用电热套加热,回流提取2
次,每次1 h,过滤,合并滤液,把滤
液减压浓缩至1.4 g/ml药液,4 ℃冰
箱保存备用。
2.1.4 白背叶根90%醇提物 称
取100 g白背叶根置于圆底烧瓶
中,按料液比1∶8加入800 ml 90%
乙醇,用电热套加热,回流提取2
次,每次1 h,过滤,合并滤液,减压
浓缩至1.7 g/ml药液,4 ℃冰箱保存
备用。
2.2 体外抑菌实验
2.2.1 细菌平板计数及菌液的制
备 从琼脂斜面上分别挑出受试
菌株的菌落,接种到3 ml肉汤里摇
匀,置37 ℃恒温培养箱培养24 h
后,从培养24 h的肉汤中取一环接
种至新鲜配制并灭菌的肉汤,37 ℃
恒温培养箱培养18 h后,按常规平
板计数方法进行细菌计数。根据平
板计数的结果,选取待测菌用生理
盐水稀释到1×107 CFU/ml(其中变
白背叶根提取物的体外抑菌试验
王志萍 广西中医药大学 530001 南宁市明秀东路179号
冯 桥 广西民族医药研究院 530001
沈树虎 曾 瑜 广西中医药大学2009级硕士研究生 530001
摘 要 目的:比较白背叶根四种溶剂(水、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇)提取物的体外抑菌作用。方法:
采用平皿二倍稀释法分别观察白背叶根四种提取物对金黄色葡萄球菌敏感株(G+)、金黄色葡萄球菌耐药株
(G+)、大肠杆菌(G-)、变形杆菌(G-)、枯草杆菌(G+)、绿脓杆菌(G-)等六种病原菌的体外抑菌活性。结果:四
种白背叶根提取物对六种供试菌均有不同程度的抑制作用,其中水提物及90%醇提物的体外抗菌MIC浓度
均≥140 mg/ml;70%醇提物对金黄色葡萄球菌敏感株的体外抗菌MIC浓度为70 mg/ml,对余五种供试菌的体外
抗菌MIC浓度均≥140 mg/ml;50%醇提物对六种供试菌的体外抗菌MIC浓度均≤140 mg/ml。结论:白背叶根四种
提取物体外均有广谱的抑菌活性,其中以50%醇提物抑菌效果最好。
关键词 白背叶根;体外抑菌;实验研究
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1003-0719(2012)03-0055-02
基金项目:广西自然科学基金创新研究团队项目(2011GXNSFF018006)
网络出版时间:2012-06-15 网络出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/45.1123.R.20120615.0836.002.html
·55·179
(总 ) 广西中医药 2012年 6月第 35卷第 3期
复方抗感滴丸是根据中医理
论和临床经验设计而来,由野菊
花提取物、莪术油、广藿香油等组
成,具有清热解毒、疏风消肿之功
效,用于治疗风热感冒、高血压、
口疮、痈肿疔毒、湿疹、肺炎、呼吸
道炎症等。本文通过止咳、化痰实
验来研究复方抗感滴丸对呼吸系
统的作用,为临床用药提供理论
依据。
1 实验材料
1.1 动物 SPF级KM小鼠,18~22 g,
雌雄各半,由广州中医药大学实验
动物中心提供,许可证号:SCXK
(粤)2008-0020。家鸽,普通级,
180~250 g,由广州中医药大学实
验动物中心提供。
1.2 药物与试剂 复方抗感滴丸
(由广州中医药大学新药中心提
供,批号20091022);氢溴酸右美沙
芬片(广州白云山光华制药股份有
限公司,批号T29050);氨水(天津
市百世化工有限公司,批号
20100218);浓硫酸(广州化学试剂
厂,批号20090202-1);亚硫酸氢钠
(广州化学试剂厂,批号20070302-
2);苯酚红(上海试剂三厂,批号
920924);沐舒坦(广州白云山光华
制药股份有限公司,批号T29050)。
1.3 仪器 高精密度家用型电子
秤(型号ZL-3,广州白云正力电子
厂);Shimadzu分析天平 (型号
AUY120,广州湘仪机电设备有限
公司);紫外分光光度计[型号UNI-
CO7200,尤尼柯(上海)仪器有限
公司]。
2 方 法
2.1 对浓氨水致咳的作用[1] 取
KM小鼠50只,随机分为5组:模型
组,阳性对照组和复方抗感滴丸
高、中、低剂量组,每组10只。模型
组灌胃给予等容积蒸馏水;阳性对
照组灌胃给予氢溴酸右美沙芬
0.02 g/kg(相当于20倍临床日用
表1 白背叶根提取物的体外抗菌MIC结果 (mg/ml)
试验菌株
白背叶根
水提物
白背叶根50%
醇提物
白背叶根70%
醇提物
白背叶根90%
醇提物
金黄色葡萄球菌敏感株 140.00 35.00 70.00 140.00
金黄色葡萄球菌耐药株 140.00 35.00 140.00 140.00
大肠杆菌 140.00 140.00 >140.00 >140.00
变形杆菌 140.00 70.00 140.00 140.00
枯草杆菌 140.00 140.00 >140.00 140.00
绿脓杆菌 >140.00 140.00 >140.00 140.00
形杆菌浓度为1×105 CFU/ml)。
2.2.2 平板培养基及含药平板培
养基的制备 将牛肉膏汤琼脂培
养基配好,高压蒸汽灭菌,冷却
至55 ℃左右时倒入灭菌的平皿
中,制成平板培养基。调整白背
叶根水提物浓度为1.4 g/ml,然
后用蒸馏水倍比稀释成 10个浓
度:1 .4,0 .70,0.35,0.175,0.088,0.044,
0.022,0.011,0.006,0.003 g/ml。依次
取上述各浓度药液1 ml加至9 ml营
养琼脂中,混匀制成含药平板,则含药
平 板 相 应 的 药 物 浓 度 为 :
140.00,70.00,35.00,17.50,8.75,4.40,
2.20,1.10,0.55,0.27 mg/ml。剩余
三种提取物按同样方法制成含药
平板。同时设置接种细菌不给予药
物的空白对照平板和不接种细菌
的空白对照平板。
2.2.3 细菌接种孵育 用接种环
(1~2 μl)进行接种,置37℃孵育18 h。
同时接种不含抗菌药物的空白对
照平板,以检测整个实验过程中检
测菌的存活状态。
3 结 果
结果表明,白背叶根四种提取
物对所选的六种革兰氏阳性菌和
革兰氏阴性菌均有不同程度的抑
制作用,其中水提物及90%醇提物的
体外抗菌MIC浓度均≥140 mg/ml;
70%醇提物对金黄色葡萄球菌敏感
株的体外抗菌MIC浓度为70 mg/ml,
对余五种供试菌的体外抗菌MIC浓
度均≥140 mg/ml;50%醇提物对六
种供试菌的体外抗菌MIC浓度
均≤140 mg/ml。提示白背叶根50%
提取物抑菌效果明显优于其余三
种提取物。结果详见表1。
4 讨 论
本试验选用金黄色葡萄球菌
敏感株、金黄色葡萄球菌耐药株、
大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、绿
脓杆菌共六种临床常见的致病菌
为受试菌,观察白背叶根四种提取
物的体外抑菌效果。结果表明,白
背叶根四种提取物对所选的革兰
氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有不
同程度的抑制作用,其中50%醇提
取物抑菌效果明显优于其余三种,
提示白背叶根的抑菌作用以50%
乙醇为其最佳提取溶剂。这为进一
步探索广西白背叶根的抗菌谱、活
性成分以及合理开发利用奠定了
基础。
上述体外试验结果表明,白背
叶根具有广谱的体外抑菌效果,为
进一步研究其抑菌作用,后期的研
究应在体外试验的基础上,进行相
应的体内抗菌试验观察。
参考文献
[1]《全国中草药汇编》编写组.全国中草
药汇编:上册[M]. 北京:人民卫生出
版社,1973:297-298.
(2011-12-15 收稿/编辑 陈明伟)
·56· 180