全 文 ：阿魏侧耳水溶性多糖免疫活性的研究＊
邓春生　吕作舟＊＊
(华中农业大学应用真菌研究室 ,武汉 430070)
摘要　采用碳粒廓清试验 、淋巴细胞转化试验以及肿瘤坏死因子(TNF)的诱生及其活性检测试验 , 观察阿
魏侧耳水溶性多糖的免疫活性。结果表明 ,阿魏侧耳子实体水溶性粗多糖 PFWP1具有非特异性免疫功能和特
异性细胞免疫功能;阿魏侧耳菌丝体水溶性粗多糖 PFWP2和阿魏侧耳子实体水溶性多糖 PFWP3免疫活性不明
显。
关键词　阿魏侧耳;水溶性多糖;免疫活性
中图法分类号　S 646.1+4
　　阿魏侧耳(Pleurotus ferulae Lanzi)又名阿魏
蘑 ,是一种食 、药两用大型真菌 ,因寄生或腐生在一
种药用植物阿魏上而得名[ 1] 。有关阿魏侧耳多糖
的研究报道屈指可数 ,而且多集中在最近几年 。本
研究采用碳粒廓清试验 、淋巴细胞转化试验以及肿
瘤坏死因子(TNF)诱生及其活性检测 3个免疫学试
验 ,观察了阿魏侧耳水溶性多糖的免疫活性。
1　材料与方法
1.1　多糖的提取
阿魏侧耳子实体:由北京金信食用菌有限公司
提供;菌丝体:由液体静置培养得到 。粗多糖的提
取:参照文献[ 2] 的方法进行。粗多糖的纯化:参照
文献[ 3]的方法进行 。
1.2　水溶性多糖免疫活性的观察
供试昆明小鼠:由湖北省医学科学院实验动物
中心提供;健康家兔:由华中农业大学畜牧兽医学院
动物实验室提供;L929成纤维细胞瘤细胞系:由武汉
大学细胞培养中心提供。
碳粒廓清试验:参照文献[ 4]的方法进行 。淋巴
细胞转化试验:参照文献[ 5] 的方法进行。TNF 诱
生:常规制小鼠脾细胞悬液 , 细胞数 2×106/ml。
RPM I 1640完全培养液配方参照文献[ 5]的方法
配制。TNF 的活性检测:参照文献[ 6]的方法进行 ,
以 L929细胞作为反应细胞 ,用酶联免疫检测仪 ,以检
测波长650 nm 下测OD值 ,并以OD650为检测指标 。
2　结果与分析
2.1　粗多糖 、多糖的得率
阿魏侧耳子实体和菌丝体水溶性粗多糖分别为
9.95%和 5.26%,子实体多糖得率为 1.96%,可见
子实体粗多糖得率高于菌丝体粗多糖得率。
2.2　多糖的免疫活性
1)碳粒廓清试验 。阿魏侧耳子实体水溶性粗多
糖 PFWP1 、多糖 PFWP3对小鼠碳粒廓清作用及碳
粒廓清指数 、吞噬指数等指标的影响结果如表 1。
Dunnet t t 检验结果表明:粗多糖 PFWP1在 10
mg/kg 和 20 mg/kg 2种剂量(均为每日剂量 ,下同)
上都能明显提高碳粒廓清指数 K ,与对照组比较存
在极显著性差异(P <0.01),表明粗多糖 PFWP1在
这 2种剂量上能使正常小鼠的碳粒廓清速率提高 。
粗多糖 PFWP1在 10 mg/kg 剂量上吞噬指数 α与对
照组比较有明显提高 ,存在显著性差异(P<0.05);
在 20 mg/kg 剂量上吞噬指数 α与对照组比较有明
显提高 ,存在极显著性差异(P <0.01);表明粗多糖
PFWP1在 10 mg/kg 和 20 mg/kg 2种剂量上 ,均能
增强巨噬细胞的吞噬功能。多糖 PFWP3在 10 mg/
kg 和 20 mg/kg 这 2种剂量上不能明显提高碳粒廓
收稿日期:2002-07-02
＊湖北省重点科技计划项目(95ZP1007)
＊＊通讯作者
邓春生 ,男 , 1977年生 ,硕士.现在工作单位:江西中医学院 ,南昌 330000
第 21 卷 第 5 期
2002年　10 月
华　中　农　业　大　学　学　报
Journal of Huazhong Agricultural University
Vol.21　No.5
Oct.2002 , 447～ 449
DOI :10.13300/j.cnki.hnlkxb.2002.05.011
表 1　阿魏侧耳水溶性多糖对小鼠碳粒廓清作用的影响
Table 1　Effects of water soluble polysaccharides from P .ferulae on carbon clearance test in mice
样品
Sam ple
鼠数
Number
剂量/mg·kg-1
Dosage
体重变化(w/ g)
S tart / Finish
碳粒廓清指数( x ±S)
Index of K
吞噬指数( x ±S)
Index of α
H2O(CK)
PFWP1
PFWP1
PFWP3
PFWP3
5
5
5
5
5
/
10×8
20×8
10×8
20×8
18.2/ 25.7
18.1/ 26.8
18.2/ 27.1
18.6/ 26.1
18.4/ 25.9
0.023 2±0.002 10
0.033 7±0.003 96＊＊
0.036 7±0.002 98＊＊
0.027 7±0.004 02
0.028 8±0.004 76
7.222±0.618
7.982±0.545＊
8.218±0.352＊＊
7.312±0.400
7.251±0.324
清指数 K 和吞噬指数α,表明多糖 PFWP3这 2种剂
量上不能使正常小鼠的碳粒廓清速率明显提高 ,不
能增强巨噬细胞的吞噬功能。
2)淋巴细胞转化试验 。阿魏侧耳子实体水溶性
粗多糖 PFWP1 、菌丝体水溶性粗多糖 PFWP2对
ConA刺激脾 T 淋巴细胞增殖反应的影响结果如
表 2。
表 2　阿魏侧耳水溶性多糖对 ConA诱导
的脾 T淋巴细胞增殖反应的影响
Table 2　Effects of water soluble polysaccharides
from P .ferulaeon spleen T lyphocyte
transformation stimulated by ConA
样品
Sample
剂量/mg·kg -1
Dosage
体重变化(w/g)
Start/ Finish
刺激指数( x±S)
Index of stimulat ion
H2O(CK)
PFWP1
PFWP1
PFWP2
PFWP2
/
10×10
20×10
10×10
20×10
18.9/ 22.6
17.9/ 25.9
17.6/ 26.2
18.7/ 26.7
18.6/ 26.1
1.05±0.03
1.12±0.05
1.34±0.19＊＊
1.17±0.10
1.20±0.10
Dunnet t t 检验结果表明:在 ConA刺激的小鼠
脾 T 淋巴细胞增殖反应中 ,加入不同种类和不同浓
度的阿魏侧耳水溶性多糖所得结果不同 ,其中粗多
糖 PFWP1在 20 mg/kg 剂量上刺激指数(SI)与对照
组相比存在极显著性差异(P <0.01),表明粗多糖
PFWP1在这一剂量上可以明显促进 ConA 刺激的小
鼠脾 T 淋巴细胞的增殖反应 。而粗多糖 PFWP1在
10 mg/kg 剂量上 ,刺激指数(SI)与对照组相比有所
提高但差异不显著(P >0.05),表明粗多糖 PFWP1
在这一剂量上不能明显促进 ConA 刺激的小鼠脾 T
淋巴细胞的增殖反应。粗多糖 PFWP2在 10 mg/
kg ,20 mg/kg 2 种剂量上 ,刺激指数(SI)有所提高
但差异不显著(P>0.05),表明粗多糖 PFWP2在这
2种剂量上不能明显促进 ConA刺激的小鼠脾 T 淋
巴细胞增殖反应。
3)肿瘤坏死因子(TNF)的诱生及其活性检测 。
不同剂量的阿魏侧耳子实体水溶性粗多糖 PFWP1
对肿瘤坏死因子(TNF)的诱生作用结果如表 3。
Dunnet t t 检验结 果表 明:粗 多糖 PFWP1 在
5 mg/kg ,10 mg/kg和 20 mg/kg 3 种剂量上 OD值
均明显小于空白对照 OD值 ,且均存在极显著性差
异(P<0.01),表明 TNF 活性显著增强 ,因此粗多
糖 PFWP1具有明显促进家兔释放 TNF 的作用 。
阿魏侧耳子实体水溶性粗多糖对脂多糖
PFWP1诱生肿瘤坏死因子的影响结果如表 4。
Dunnet t t 检验结果表明:腹腔注射 LPS 和粗
多糖 PFWP1+LPS测得OD值均明显小于对照 OD
值 ,并存在极显著性差异(P<0.01),表明 LPS和粗
多糖 PFWP1+LPS均能明显促进 TNF 的诱生。
表 3　阿魏侧耳子实体水溶性粗多糖对肿瘤坏死因子的诱生作用
Table 3　Effect of water soluble crude polysaccharide from P .ferulae fruid body on the production of tumor necrosis factor
剂量
Dosage
/mg·kg -1
吸光度 　Absorbance( x ±S)
1∶1 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32
0
5
10
20
0.62±0.01
0.28 ±0.01＊＊
0.22± 0.01＊＊
0.23± 0.01＊＊
0.80±0.02
0.34± 0.03＊＊
0.26 ±0.01＊＊
0.28 ±0.01＊＊
0.85±0.06
0.42 ±0.02＊＊
0.29± 0.01＊＊
0.34 ±0.04＊＊
0.89±0.06
0.58 ±0.02＊＊
0.37 ±0.02＊＊
0.45 ±0.03＊＊
0.91±0.02
0.68 ±0.02＊＊
0.46 ±0.03＊＊
0.55± 0.03＊＊
0.94±0.05
0.77± 0.03＊＊
0.48 0.04＊＊
0.70 ±0.05＊＊
448 　　 华 中 农 业 大 学 学 报 第 21 卷　
表 4　阿魏侧耳子实体水溶性粗多糖对脂多糖诱生肿瘤坏死因子的影响
Table 4　Effects of water soluble crude polysaccharide from P.ferulae fruid body on TNF induced by LPS
样品
Sam ple
剂量
Dosage
/mg·kg -1
吸光度 　Absorbance( x±S)
1∶1 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32
H2O(CK)
LPS
PFWP1+
LPS
/
0.025×1
10×9
0.025×1
0.62±0.01
0.19±0.02＊＊
　
0.17±0.03＊＊
0.80±0.02
0.23±0.01＊＊
　
0.21±0.02＊＊
0.85±0.06
0.28±0.04＊＊
　
0.26±0.01＊＊
0.89±0.06
0.31±0.01＊＊
　
0.30±0.02＊＊
0.91±0.02
0.35±0.02＊＊
　
0.33±0.04＊＊
0.94±0.05
0.39±0.01＊＊
　
0.38±0.02＊＊
3　讨　论
免疫试验结果表明 ,粗多糖 PFWP1在 3项免疫
学试验中免疫活性均有显著表现 ,而由子实体粗多
糖 PFWP1纯化所得多糖 PFWP3免疫活性不显著 。
因为粗多糖是多种级分的多糖和蛋白质 、核酸等物
质的混合物 ,可能纯化的 PFWP3不是活性级分 ,也
可能 PFWP 3必须和其它级分混和或者与蛋白质 、核
酸等物质混合才能表达活性 ,因此 ,多糖的有效组分
有待进一步研究。同时 ,与粗多糖 PFWP1有显著免
疫活性不同 ,粗多糖 PFWP2免疫活性也不明显 ,其
中与那些因素有关还有待于进一步研究 。
根据报道 ,羧甲基茯苓多糖能对 ConA 、PHA 等
协同诱生 TNF ,诱生效果与采用的多糖剂量 、靶细
胞种类 、 TNF 检测方法等因素有关。粗多糖
PFWP1对 LPS诱生 TNF 效果与多糖剂量以及其它
因素的关系有待于进一步探讨 。
致　谢　华中农业大学畜牧兽医学院王大菊副教授
对本研究给予了大力支持 ,在此表示衷心感谢!
参　考　文　献
1　黄年来主编.18种珍稀美味食用菌栽培.北京:中国农业出版社 ,
1997
2　张　欣 ,吕作舟.香菇菌盖多糖的提取纯化及其理化性质的研究.
华中农业大学学报 , 1998 , 17(6):537～ 541
3　甘　勇 ,吕作舟.阿魏蘑多性理化性质及免疫活性的研究.菌物系
统 , 2001 , 20(2):228～ 232
4　龚晓健 ,季　晖 ,卢顺高等.人工虫草多糖对小鼠免疫功能的影
响.中国药科大学学报 , 2000 , 31(1):53～ 55
5　林清华编.免疫学实验.武汉:武汉大学出版社 , 1999
6　王格林 ,林志斌.香菇多糖的免疫调节作用.药学学报 , 1996 , 31
(2):86～ 90
Study on Immunological Activities of Water Soluble
Polysaccharides from Pleurotus ferulae Lanzi
Deng Chunsheng　Lǜ Zuozhou
(Huazhong Agricultural University , Wuhan 430070 , China)
Abstract　Carbon clearance test , lyphocy te transformation test and TNF induction and i t s t iter assay
test were used to evaluate the immunological activities of w ater soluble poly saccharides from P.ferulae
(PFWP).Results show ed that w ater soluble crude poly saccharide from fruid body of P .ferulae(PFWP 1)
could improved the celluar immunological function.Water soluble crude polysaccharide from mycelium of P .
ferulae(PFWP2)and fruid body of P .ferulae(PFWP3)could not.
Key words　Pleurotus ferulae Lanzi , water soluble poly saccharides , immunological activity
(责任编辑:陈红叶)
449　第 5 期 邓春生等:阿魏侧耳水溶性多糖免疫活性的研究