全 文 ：　 [ 收稿日期] 2008-12-24
　 [ 作者简介] 桂劲松 (1977-), 男 , 河北遵化人 , 讲师 , 硕士生 , 从事电化学 、 色谱方面的研究工作。
doi:10.3969/ j.issn.1673-1409(R).2009.01.028
差示分光光度法测定白背叶中总黄酮含量
　　桂劲松 , 韦汉燕 , 戴　平 , 朱开梅　(桂林医学院药学院 , 广西 桂林 541 004)
[ 摘要] 目的:探索并建立白背叶中总黄酮含量的测定方法。方法:采用差示分光光度法 , 不经分离直接
测定。结果:线性范围4 ～ 20μg ·ml-1 , 回归方程 D (425)=0.0375 C-0.0072 , r=0.9998 , 平均回收率和
RSD分别为 100.54%和 1.38%。结论:差示分光光度法操作简单易行 , 快速 、 准确 , 而且对仪器设备的
要求不高 , 适用于黄酮类物质的含量测定。
[ 关键词] 差示分光光度法;白背叶;黄酮;含量
[ 中图分类号] R914.1 [文献标识码] A　　 [文章编号] 1673-1409 (2009)01-R064-02
　　
白背叶为大戟科植物白背叶 Mallo tus apel ta (Lour ·)Muell-A rg ·的干燥叶 , 为广西民间常用草
药 , 具清热 、利湿 、 止痛 、解毒 、 止血之功效 , 主治淋浊 、胃痛 、 口疮 、 痔疮 、溃疡 、 跌打损伤 、蛇咬
伤 、外伤出血等症[ 1] 。药理实验表明 , 以白背叶的叶为主的复方醇提取物对大鼠实验性胃溃疡有明显的
抑制作用[ 2] 。这一复方的临床观察表明 , 对急性胃 、十二指肠出血的临床治愈率达 94.1%[ 3] 。
黄酮类化合物提取时多采用水 、 甲醇 、 体积分数 70%乙醇作溶剂 , 用乙酸乙酯作萃取剂。本文以
芦丁作为对照品 , 采用差示分光光度法对白背叶总黄酮含量的测定方法进行探讨 , 旨在建立一套简便 、
快速 、准确的方法 , 为充分利用我国丰富的白背叶资源 , 进一步研究和开发白背叶医药保健品提供参考。
1　试剂与仪器
1.1　试剂　白背叶 (桂林市郊雁山采集);芦丁对照品 (国家药品生物制品检定所制 110831-200302);
二氯氧锆 、石油醚 、 乙醇均为分析纯。
1.2　主要仪器　722 分光光度计 (上海精密科学仪器有限公司);JA1003 电子天平 (上海天平仪器
厂);SG3300H 超声波清洗仪 (上海冠特超声仪器有限公司)。
2　方法与结果
2.1　白背叶黄酮的提取　精密称取白背叶叶粉末 (过 20目筛)约 50g , 置 2 000m l圆底烧瓶中 , 加 15
倍量 60 ～ 90℃沸程的石油醚脱脂 1h , 过滤 , 滤渣中再加入 12倍量 60 ～ 90℃沸程的石油醚脱脂 0.5h ,
过滤 , 滤渣连同滤纸置于另一 2 000ml圆底烧瓶中 , 加入 25倍量 60%乙醇加热回流三次 , 每次 1h , 过
滤 , 滤渣用 60%乙醇洗涤 , 合并提取液 , 浓缩 , 用 60%乙醇定容至100ml , 即得黄酮类化合物的提取液。
2.2　黄酮的定性鉴别　经紫外光下呈色反应 、浓氨水反应 、 三氯化铝反应 、 乙酸镁反应 、盐酸-镁粉反
应 , 均为阳性反应 , 表明白背叶提取物中含有黄酮。
2.3　芦丁对照品标准曲线的绘制
2.3.1　对照品溶液的制备　准确称量于 105℃下干燥至恒重的芦丁对照品 10mg , 置于 100m l容量瓶
中 , 加 60%乙醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 即得浓度为 100μg ·ml-1的芦丁对照品储备溶液。
2.3.2　标准曲线的绘制　精密量取芦丁对照品溶液 0.5 、 2 、 3 、 4 、 5m l各 2份置于 25m l容量瓶中 ,
一份用乙醇稀释定容至 25ml作为参比液 , 一份加 2%二氯氧锆的乙醇溶液 4ml , 再用 60%乙醇定容至
25m l , 混匀静置 lh后 , 分别在 425nm 处测定不同浓度溶液络合前后差示光密度值 D (425) , 以 D (425)与
芦丁对照品溶液浓度做回归处理 , 求得回归方程为:D(425) =0.0375C -0.0072 , r =0.9998 。
·64· 长江大学学报 (自然科学版)　2009年 3月 第 6卷 第 1期:医学Journal of Yangtze University (Nat Sci Edit)　Mar.2009 , Vo l.6 No.1:Medicine
　　结果表明:芦丁 2 ～ 20μg ·ml-1的浓度范围内与差示光密度值 D (425)线性关系良好 。
2.4　白背叶总黄酮含量测定
2.4.1　供试品溶液的配制　将 2.1项中的溶液超声 30min , 摇匀 , 静置 , 冷却至室温 , 吸取上清夜 ,
即得供试品溶液 。
2.4.2　供试品溶液的含量测定　精密吸取供试品溶液 1.0m l , 共 4份 (1 份做空白), 分别置于 50ml
容量瓶中 , 按照 2.3.2项下的方法操作 , 得供试品待测液 , 分别测定光密度 , 根据芦丁标准曲线方程得
到供试品待测液中总黄酮的浓度 , 计算白背叶总黄酮的含量。含量计算公式为:含量%=(供试品待测
液中总黄酮的质量 g/50g)×100%。白背叶总黄酮的含量为 0.024%(n =3)。
2.5　测定方法的考察
2.5.1　测定波长的选择　精密量取对照品储备溶液 3ml 2份 , 一份用 60%乙醇稀释定容至 25ml作为
参比液 , 一份加 2%二氯氧锆的乙醇溶液 4ml , 再用 60%乙醇定容至 25m l , 混匀静置 1h 后 , 于 250 ～
500nm 波长范围内扫描测定。结果表明 , 芦丁对照品络合反应前后在 425nm 波长处有最大差示光密度
值。另取白背叶供试品溶液 1m l 2份 , 同上法操作 , 记录样品络合反应前后的差示吸收光谱 , 可见对照
品和供试品溶液络合反应前后的差示吸收光谱基本一致 , 同样在 425nm 波长处有较大的差示光密度值 ,
故选择 425nm 作为测定波长 。
2.5.2　精密度实验　精密吸取供试品溶液 1.0m l , 共 6 份 (1份做空白), 分别置于 50ml 容量瓶中 ,
按照 2.3.2项下的方法平行操作 , 连续测定 5份试液的吸收度差 。RSD=0.84%, 表明测定方法的精密
度良好 , 测定结果精确。
2.5.3　稳定性实验　精密吸取供试品溶液 1.0m l , 共 2 份 (1份做空白), 分别置于 50ml 容量瓶中 ,
按照 2.3.2项下的方法操作 , 于 0 、 30 、 60 、 90 、 120min测定光密度 。结果显示 , 在室温为 25℃左右
时 , 120min内测得光密度的 RSD=2.737%, 表明在 120min内完成测定时结果准确 、稳定。
2.5.4　加样回收率实验　精密吸取供试品溶液 1.0ml , 共 6 份 (1份做空白), 分别置于 50ml容量瓶
中 , 加入芦丁标准液适量 (1.0m l), 按照 2.3.2 项下的方法操作 , 测定光密度 , 计算回收率 , 回收率
计算公式为:回收率%= [ (加入芦丁后测得的总黄酮的量-样品中总黄酮的量)/芦丁标准品加入量]
×100%。由芦丁标准曲线计算含量 , 根据公式计算回收率 , 得到平均回收率为 100.54%, RSD =
1.38%(n =5), 说明该方法系统误差较小 , 准确度较高 。
3　讨　　论
分析中药成方制剂中总黄酮的含最一般采用比色法测定 , 该法操作过程相对简捷 , 但由于制剂中常
存在其他组分的干扰 , 测定值往往偏高 。有报道采用大孔吸附树脂 、聚酞胺柱层析或固相萃取等前处理
可以排除干扰[ 4] , 但处理过程相对烦琐 、 费时 。采用差示分光光度法不需对样品进行特殊处理 , 可直接
测定白背叶中总黄酮的含量 , 并可消除白背叶中其它杂质的干扰 , 操作简便 、 准确 、快速。
3.1　络合剂加入量的影响　精密吸取芦丁对照品和供试品溶液 3m l各 6份 , 分置于 25m l量瓶中 , 加
人 2%的二氯氧锆乙醇溶液 0.0 、 1.0 、 2.0 、 3.0 、 4.0 、 5.0m l , 然后以乙醇稀释至刻度 , 摇匀 。放 lh
后 , 以不加络合剂的溶液为参比 , 在 425nm 波长下测定各溶液的差示光密度值 。结果表明络合剂的加
入量在 4ml时 , 对照品与供试品的差示光密度值较稳定。
3.2　供试品提取条件的确定　白背叶药材中含挥发油 , 通过比较脱脂前后的光密度值 , 可知极性较小
的脂溶性成分对测定产生干扰 , 因此本实验首先采用 60 ～ 90℃沸程的石油醚脱脂 2次 , 有利于黄酮的
提取 , 使测定结果更加准确。此外 , 石油醚提取液经黄酮定性反应为阴性 , 表明脱脂不会造成黄酮损
失。本次实验还选择比较了 4种不同溶剂即 60%乙醇 、 70%乙醇 、 80%乙醇加热回流及水煎煮提取实
验 , 结果表明用 60%乙醇回流提取的效率最高 , 故选用 60%乙醇提取 。此次实验也做了提取次数的比
较 , 在实际工作中至少应提取 2次 , 总黄酮提取率才能达到 90%以上 。
在我国白背叶分布广泛 , 资源丰富 , 药用价值比较高 。本实验对其含量测定做了初步的研究 , 有利
于白背叶的进一步开发与利用 , 以便充分利用天然植物资源。
(下转第 76页)
·65·第 6 卷 第 1 期:医学 桂劲松等:差示分光光度法测定白背叶中总黄酮含量 　
萄糖酸钙 10ml , 献血者一般不会出现枸橼酸盐中毒反应。有的献血者对枸橼酸盐过敏 , 会引起枸橼酸
盐中毒的低钙反应 , 出现畏寒 、口唇发麻等早期症状[ 3] , 加量给予 10%葡萄糖酸钙 10 ～ 30m l口服后 ,
上述症状均可减轻或恢复正常 。
表 1　单采献血中不良反应与各种原因的关系 (n =54)
原　　因 反应例数 轻度反应
n %
中度反应
n %
重度反应
n %
枸橼酸盐中毒 24 21 88 2 8 1 4
精神紧张 6 4 67 2 33 0
空腹 、 饥饿 10 6 60 2 20 2 20
穿刺疼痛 6 6 100 0 0
睡眠不足或疲劳 6 2 33 3 50 0
其它 2 2 100 0 0
合计 54 41 76 9 17 3 6
心理因素是发生单采献血不良反应的重要因素 , 多见于初次参加单采献血者进行单采献血时 , 因其
情绪过度紧张 、 机器频繁报警 、采集时间过长 、 心理恐惧 , 反射性引起迷走神经兴奋 , 血压下降 , 脑供
血不足而引发不良反应。体质因素如空腹或饥饿状态下 , 劳累疲倦时 , 献血者机体处于应急阶段 , 通过
迷走神经反射 , 引起短暂的血管扩张 , 外周阻力下降 , 血压下降 , 脑血流量减少 , 发生反应 。穿刺时对
局部刺激产生疼痛 , 皮肤神经末梢产生刺激 , 引起强烈疼痛 , 全身神经高度紧张 , 反射性引起广泛的小
血管扩张 , 随之血流缓慢 , 继而血压下降 , 脑供血不足 , 发生反应 。此外 , 气温过高或过低以及医护人
员态度欠佳 , 语言生硬等也是诱发单采献血不良反应的因素。
由于单采血小板需时较长 , 有异于全血的捐献 , 对献血者的要求相对也高 。单采献血不良反应的预
防除了营造安静 、舒适的环境 , 同时做好单采献血前的宣教工作。参加单采成分血的献血者大都是我们
献血的积极分子 , 但由于对血细胞分离机性能不了解 , 对看似复杂的管道可能产生恐惧 、紧张心理 , 医
务人员应用鼓励性语言进行心理疏导 , 做好解释工作 , 给献血者以心理安慰 , 教会他们放松的技巧 , 或
播放轻松的音乐 、电视电影节目等以分散其注意力 , 消除献血者的焦虑紧张情绪和害怕心理;与献血者
交谈 , 了解其基本情况 , 特别初次单采献血者 , 有必要向其解释单采的全流程 、单采原理等 。
采血人员应熟练掌握操作技术 , 穿刺应准确 、操作轻柔 , 尽量一针见血 , 减轻因反复穿刺而造成或
增加单采献血者的紧张害怕心理 , 使献血者对单采顺利进行有信心和安全感 , 尽量减少献血者痛苦。
减少献血不良反应的发生 , 提高全程服务质量 , 不仅保证单采过程的顺利进行 , 更重要的是保证了
血小板的质量 , 稳定并扩大低危固定无偿单采血小板献血者队伍 , 确保临床用血的需要 。
[参考文献]
[ 1] 张宏 , 高磊.单采血小板发生献血反应情况分析 [ J] .中国输血杂志 , 2004 , 17 (4):257.
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[ 3] 王培华.输血技术学 [ M] .北京:人民卫生出版社 , 1998:9-17.
[ 编辑] 　一　凡
(上接第 65页)
[参考文献]
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[ 编辑] 　一　凡
·76· 　 陈宝葵:单采血小板献血者发生不良反应调查分析 第 6卷 第 1 期:医学
Abstract:Objective:To evalua te the clinical effect o f percutaneous co re decompression plus Intervention ex terna catheter
the rapy fo r ear ly-stag e avascular necro sis of the femoral head.Methods:50Patients diagno sed on the basis of Radio-
g raphs , CT , MRI and clinical sym ptom.are treated with percutaneous co re decompression , placed ex terna catheter into
ischemic necro sis section o f the femora l head and rese rved the externa cathe te r in a week.Result:Veinous ma rrow re turn
volume is pr omo ted in 50patients;X-ray radiog raphs show s com ple te r epair of the femo ral head in 35pa tients , par tial re-
pair of the femoral head in 15patients;MRI show s the marr ow edema o f the femo ral head dissipates in 48patients , small
do t-like edema signal focus remains in 2pa tients;Hip pain and disorder s of joint func tion ar e eliminated in 43patients.The
rate o f improvement is 100%.Conclusion:This ther apy can improve the femoral head blood supply and promote the nec-
rosis repair and reconst ruction of the femora l head.
Key word:Nec rosis of the femo ral head;I nte rventional radiolog y;Percutaneous core decompression;Venogr aphy
50 Study of Cat Model for Spreading Cortical Depression and the Plane of Magnetic Resonance Imaging
RENBo-xu , CAI Xing-yu , HUANG Jin-bai　(Med ical S chool o f Yang tz e Universi ty , J in gzhou 434023 , Ch ina)
CHENG Cang-yi , LEI Hong-wei 　(X-ray dep artment , the First Hosp i ta l o f Yangtz e Universi ty , J in gzhou 434000 , Ch ina)
Abstract:Objective:To establish ca t model fo r spr eading cor tical depression and explo re appropriate plane on magnetic
resonance imag ing.Methods:Cranio tomies w ere pe rfo rmed in both orbital sinuses and the sinuse s w ere filled w ith
agar.Cranio tomies over the supra sy lvian gy ri and durectomy expo sed the sur face o f supr asy lv ian gy ri fo r the injection of
KCl/ agar solution.The anatomical images included high-re so lution T1W images covering the who le br ain in ver tical trans-
verse , sagittal and corona l planes.The ana tomic char acte ristics w ere show n on each image.Results Bo th o rbital sinuse s
were filled w ell.The t ransve rse images of the cat brain revealed the continuity of the g rey mat te r between adjacent gy-
ri.But each transverse section displayed a limited reg ion of g rey matter only.Images in the sagittal planes revealed the
marginal and suprasy lv ian gy ri more fully but one slice pro vided an image of only one.Images in the co ronal plane w hich
include bila te ral ma rginal and suprasy lv ian gy ri revealed not only the leng th o f these gy ri , but also the rela tionship of ad-
jacent g yri , and provided the contrahemishe re as cont rast.Conclusion:Filled orbital sinuses can improve quality of MR
imaging.The suprasy lvian gy rus is most suitable fo r SCD initiation and imaging.The cor onal plane w hich includes bilater-
al marg inal and suprasylvian gyri is an ideal imag ing plane fo r SCD study thr ough functional M RI.
Key words:Spreading cor tical depression;Magnetic re sonance imaging;Cats;Anatomy
64 The Content Determination of Total Flavones in Mallotus Apelta Leaf by Difference Spectrophotometry
GUI Jin-song , WEI Han-yan , DAI Pinng , ZHU Kai-mei 　 (Department o f Pharmacy , Gul in Med ica l Co llege , Guang xi
541004 , Ch ina)
Abstract:Objective:To explo re the de te rmination of content of total flavonoids in Mallo tus apelta leaf.Methods:Differ-
ence Spectropho tometry is applied to determine the content of to ta l f lavones in Mallo tus apelta leaf without separa tion.
Results:There is a g ood linear relationship with the abso rbability w hen the concentration of rutin w as within a range in 4
～ 20μgom l-1(r=0.9998), the ave rage recovery w as 100.54%, RSD=1.38% (n=5).The to tal flav ones in the M all-
o tus apelta leaf by alcoho l could achieve 0.024%.Conclusion:Diffe rence Spectr opho tomet ry is accurate and applicable e-
ven w ithout sophisticated appara tus and thus ho lds good fo r the de te rmination o f content of f lavones.
Key words:Diffe rence spectr opho tomet ry;Mallo tus apelta;Total flavone s;Content
72 Mental Health Status and Mental Nursing of Kidney-Transplant-Patients in Community
TIAN Hong　(Nursing Department o f Liwan Hosp i ta l , Guang zhou Medical Col lege , Guangzhou 510170 , China)
Abstract:Objec tive: To investiga te mental health status and mental nur sing o f kidney- transplant-patients in
community.Methods:Data were collected from sixty kidney-transplant-pa tients who had ente red communities af ter oper a-
tion.The data were analyzed by the use of symptom-self-evalua tion table(SCL-90).Result:I t w as found that kidney-
transplant-patients we re in poo r mental health.Par ticular ly those w ho had a high education level we re superio r to tho se
who had a low education level in mental health.Conclusion:The poor conditions o f psychical health of the community-
dw elling pa tients after renal t ransplantation ar e primarily due to long-time suffer ance of diseases , heavy economic burdens
and alte red r ole s in family and society.Nursing should focus on building up socia l suppo rts for the patients , improving pa-
tient education and giving them consulta tions on how to adjust themselve s.
Key words:Kidney- transplant-patient;Community health;Mental H ealth Status;M etal health
Translated &Edited by DU Xiao-hui (杜小惠)
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