全 文 ：樗白皮活性成分对结肠炎模型小鼠
血清相关炎性因子的影响
程富胜1 ,胡庭俊1 ,张 霞 2 ,董鹏程 1 ,孟聚诚 1
(1.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所新兽药工程重点实验室 ,甘肃兰州　 730050;
2.甘肃农业大学生命科学技术学院 ,甘肃兰州　730070)
[收稿日期 ] 2006 11 15　[文献标识码 ] A　[文章编号 ] 1002 1208(2007)02 0016 03　[中图分类号 ] S853.74
[摘　要 ] 　以 2, 4-二硝基氯苯(DNCB)致小鼠结肠炎模型为研究对象 ,探讨了樗白皮活性成分
对小鼠血清中 NO含量和 NOS活性的影响。小鼠分成 4组(即对照组 、预防组 、治疗组 、模型组)。
模型组用 DNCB-丙酮 -橄榄油制剂先腹部涂抹致敏再进行 DNCB-乙醇溶液灌肠;预防组和治
疗组分别在制模前 、后进行药物灌胃;对照组以乙醇灌肠和生理盐水灌胃。利用比色法对各组动
物血清 NO含量和 NOS活性进行测定。结果 ,预防组与治疗组 NO含量较模型组和对照组显著降
低(p<0.001, p<0.01),预防组与治疗组间无差异显著性;预防组 、治疗组 NOS活性较模型组显
著降低(p<0.01),但与对照组间无差异显著性。结论 ,樗白皮活性成分对机体 NO和 NOS具有
调节作用 ,在结肠炎时能促进机体清除 NO含量和下调 NOS的活性 ,对于药物所致的小鼠结肠炎
有缓解作用 。
[关键词 ] 　2, 4-二硝基氯苯;NO;NOS;结肠炎;樗白皮
基金项目:中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所基金项目(myky-04-01)
作者简介:程富胜(1971年 ～ ), 男 ,甘肃甘谷人 ,在读博士 , 副研究员 ,从事天然药物免疫药理及畜禽免疫调节剂的应用与
研究。电话:0931-2651548;E-mail:chengfusheng@126.com
EfectofActiveComponentofAilanthusaltissimaonCorrelative
PhlogisticFactorsinSerumofModelMiceofUlcerativeColitis
CHENGFu-sheng1 , HUTing-jun1 , ZHANGXia2 , DONGPeng-cheng1 , MENGJu-cheng1
(1.KeyLaboratoryofNewAnimalMedicineProject, LanzhouInstituteofAnimal＆VeterinaryPharmaceuticsScience, Lanzhou, Gansu　730050;
2.ColegeofLifeScienceandTechnology, GansuAgriculturalUniversity, Lanzhou　 730070)
Abstract:EfectoftheextractsofAilanthusaltisimaonNOandNOSinserumwasinvestigated, setingthemodel
ofmiceulcerativecolitis(UC)causedby2, 4-dinitrochlorobenzene(DNCB)asthesubject.Micewererandomly
dividedinto4groups:control, prevention, treatmentandmodel.Inmodelgroup, miceweresensitizedbysmea-
ringDNCB(3.3%, solvatedin-oliveoil)ontheabdominalskin, andthenadministratedintra-colonicalyby
DNCB(0.04%, solvatedin60% ethanol).Inpreventiongroup, micewereadministratedintra-gastricalybyex-
tractsofAilanthusaltisimabeforebeingmadeasmodel;butintreatmentgroup, theyweredoneafterbeingmade
asmodel.Incontrolgroup, theywereintra-colonicalyby60%ethanolandadministratedintra-gastricalybyphy-
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siologicalsaline.NOandNOSinserumweredetectedbyspectyophotograph.Asaresult, theNOcontentinpre-
ventionandtreatmentgroupswaslowerremarkablythanthatincontrolandmodelgroups(p<0.001, p<0.01),
andtherewasnodiferencebetweenpreventionandtreatmentgroups.Inpreventionandtreatmentgroups, the
NOScontentwaslowerremarkablythanthatinmodelgroup(p<0.01), buttherewasnodiferencewiththecon-
trol.ItwasconcludedthattheextractsofAilanthusaltisimahadregulationefectsonNOandNOS.Itcouldclear
upNO, reduceNOSactivity, andrelievethemiceulcerativecolitiscausedbymedicineDNCB.
Keywords:2 , 4-dinitrochlorobenzene(DNCB);NO;NOS;ulcerativecolitis;Ailanthusaltisima
　　樗白皮为苦木科植物臭椿(Ailanthusaltissima
(Mil.)swingle)的根皮或树皮 ,苦 、涩 、寒 ,具有清
热燥湿 ,涩肠 ,止血 ,止带 ,杀虫之功用 ,民间多用于
治疗腹泻 、痢疾和寄生虫病。文献报道 ,樗白皮性
偏滑利 ,入气分 ,有清化湿热兼通利之功。但对樗
白皮活性物质及其作用的现代研究报道鲜见 。研
究表明 [ 1] ,樗白皮含有丰富的矿物元素及构成许多
酶辅酶的微量元素 。在对小鼠血清 、脾脏 、肝脏中
黄嘌呤氧化酶(XOD)活性的研究中发现 ,不同剂量
的樗白皮提取物对小鼠体内 XOD活性的作用不
同 ,低剂量时具有抗氧化作用 ,高剂量时表现为促
氧化作用。李雪萍[ 2]报道 ,樗树皮提取物有抗肿瘤
作用。溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis, UC)是一种
原因不明的慢性非特异性胃肠道疾病 ,其发病率有
逐年升高的趋势 [ 3, 4] 。目前医学界还未完全研究清
楚其致病机理 ,因而在治疗上没有一个很好的药
物 ,仍然是一大世界性难题。在对其病因和发病机
制的研究中 ,发现免疫因素 [ 5]和 NO自由基可能起
了很重要的作用 [ 6] 。NO是近年来发现的一个活跃
的生物因子 ,具有广泛的生物学活性 ,是一个炎症
特征性因子 。本文对 UC模型鼠血清中 NO自由基
及其一氧化氮合成酶(NOS)进行了初步研究。
1　实验材料
1.1　试剂及药品　二硝基氯苯(DNCB),北京化工
厂生产;乙醇 、丙酮 、橄榄油;樗树皮提取物为水提
醇沉所得 ,主要成分为大分子糖类物质 ,由课题组
制备。
1.2　材料　实验动物:小白鼠 40只 ,健康 ,雄性 ,
(20±2)g, 购自兰州生物制药厂;微量注射器2 mm
口径硅胶管 、水浴锅 、紫外分光光度计 、离心机;NO
试剂盒和 NOS试剂盒由南京建成公司生产。
2　实验方法
将 40只小白鼠分成 4组:对照组 、预防组 、治
疗组和模型组 ,每组 10只。
2.1　试剂配制及动物处理
腹部涂抹剂:称取 DNCB一定量 ,溶于丙酮 -
橄榄油(3∶1),配成 3.3%的溶液 , 4℃避光保存 。
灌肠液:称取一定量的 DNCB,溶于 60%乙醇 ,
微热搅拌助溶 ,配制成 0.04%溶液 4 ℃保存 ,有沉
淀析出时可稍加热助溶后再用。
结肠炎模型组:动物腹部剪毛 ,面积大小为 3
cm2左右 ,每只小白鼠每日 1次涂抹 50μL涂抹剂 ,
连用 4 ～ 5 d至有结痂。次日用微量注射器套硅胶
管进行灌肠 0.004 mL/g体重 ,大约 5 ～ 7 d,至拉
稀 、血便并依据结肠炎模型特征判定模型成功为
止。
对照组:以同等剂量的 60%乙醇进行灌肠 6d,
然后灌胃生理盐水 0.2mL/只 , 7d。
预防组:首先将提取物灌胃 , 7.8 g/kg体重 ,共
7d,然后同结肠炎模型组方法处理。
治疗组:同结肠炎模型组 ,首先建立动物模型 ,
再将提取物灌胃 , 15.6 g/kg体重(依据该药材煎剂
人临床用药剂量与小白鼠剂量换算 ,结合提取物在
原药材中的提取率 ,并经过毒理安全预试 ,确定治
疗剂量为 15.6 g/kg体重 ,预防剂量减半为 7.8
g/kg体重),共 7 d。
实验期间观察记录动物的大便情况及其他情
况变化。
2.2　样品采集　在饲养结束后 ,采用眼眶采血法 ,
分离收集血清 。按照试剂盒说明 ,在 550 nm和 530
nm波长处分别对 NO、NOS测定 OD值 ,分别按下
列公式计算 NO、NOS的含量和活力。
NO含量(μmol/L)=(测定管 OD值 -空白管 OD
值)/(标准管 OD值 -标准空白管 OD值)×标准
品浓度(100μmol/L)×样品稀释倍数
NOS活力(u/mL)=(测定管 OD值 -测定空白管
OD值)/(标准管 OD值 -标准空白管 OD值)×反
应液总体积 /取样量 /(比色光径 ×反应时间)/1000
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2.3　统计学处理实验数据　以 t检验进行显著分
析 。
3　结 果
樗树皮提取物对结肠炎模型小鼠血清 NO、
NOS的影响结果见表 1、图 1。
表 1　不同组小鼠血清 NO、NOS测定结果(n=10)
Control Model Prevention treatment
NO(μmol/L) 45.32 55.54 33.30 ＊# 31.59＊#
NOS(u/mL) 49.78 60.88 48.62 51.33+
　注:＊表示 p< 0.001(与模型组比较), #表示 p< 0.01(与对照
组比较), +表示 p< 0.01(与预防组 、治疗组比较)。下同。
　　结果显示 ,预防组与治疗组的 NO含量较模型
组和对照组显著降低 ,但预防组与治疗组间无差异
显著性;对于 NOS活性 ,预防组 、治疗组较模型组
显著降低 ,而与对照组间无差异显著性。
图 1　血清中 NO含量和 NOS活性
4　讨 论
DNCB涂腹致敏后的小鼠对小剂量多次 DNCB
灌肠表现出腹泻乃至便血 ,镜下见结肠炎症乃至溃
疡 。在实验诱导的结肠炎模型中 ,用 DNCB作为致
炎剂被普遍认为主要是激活 T细胞而诱导的 [ 7] ,
NO不仅是一种脂溶性气体 ,而且由于其分子结构
中有不配对电子 ,又是一种自由基 ,分子小 ,结构简
单 ,与 Fe2 +有很高的亲和力 ,能通过生物膜在细胞
之间快速扩散 ,相互渗透 ,是一种重要的信息物质 ,
在神经系统中发挥类似神经递质的信息传递功能 ,
在免疫系统中能调节内皮细胞 、平滑肌细胞 ,参与
炎症与组织损伤和杀灭肿瘤细胞 、细菌作用等诸多
的病理生理过程 。NO是组织细胞内源性一氧化氮
合成酶(NOS)催化 L-精氨酸所生成 , NOS分为两
型:原生型(cNOS)和诱生型(iNOS)。 cNOS催化的
NO量少 ,对肠粘膜起保护作用 ,与 cNOS相反 , iN-
OS存在着一个静止的基因调控 ,仅在免疫反应或
炎症时 iNOS基因才被激活 , iNOS活性增强 ,产生
过量的 NO,对肠粘膜有杀伤毒性及促进炎症的作
用[ 8] 。实验中发现有结肠炎病理损伤的小鼠组比
对照组相应值显著增高 ,说明 NO自由基的大量生
成参与了组织的损伤 。从实验结果看 , NO含量与
NOS活力 ,表现出基本同步变化的特点。在模型组
中 , NO、NOS分别明显高于其他各组 ,对于 NO产
生 ,药物不仅能起到调节作用 ,而且可能具有促进
机体消除 NO的作用 。但对于 NOS,药物能很好地
调节 NOS至正常水平 ,该药物是否参与了 NOS的
基因调控机制 ,还有待进一步探讨 。
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