全 文 ： 2005, Vol. 26, No. 4 食品科学 ※分析检验222
大叶紫薇(Lagerstroemia specious L.)为千屈菜科的
落叶乔木，主要生长于澳洲和热带亚洲，在我国广东、
广西、福建等省也有种植，其树高 5～15m，叶长 12～
2 5 c m，在菲律宾等亚洲其他国家，大叶紫薇被称为
bana ba，大叶紫薇的叶、花、果和茎传统上被用来制
作保健饮料，具有降低血糖的效果[1 ,2 ]。近年来，大叶
紫薇对糖尿病的治疗作用日益引起人们的重视，日本、
美国、菲律宾等许多国家对其降糖和治疗糖尿病的功效
成分和药理作用进行了广泛研究，并发现了大叶紫薇叶
的抗氧化[3,4]和减脂[5]等新功能，大叶紫薇叶已被加工成
保健茶、口服液等多种食品。
许多研究结果表明，大叶紫薇叶降血糖的主要作用
成分为 2α - 羟基齐墩果酸、2α - 羟基熊果酸[6 ,7 ]、齐
墩果酸等，它们都是三萜类物质。本文采用薄层色谱
分离、分光光度法测定大叶紫薇叶中的总三萜含量，确
定了测定的适宜条件，并且同HPLC法测定的结果进行
了比较。
l 材料与方法
1.1 试剂与仪器
齐墩果酸(化学标准品，天津尖峰天然产物研究开
发有限公司)、 2α - 羟基齐墩果酸、2α - 羟基熊果酸
(无锡杰西医药研究所提供，纯度≥ 95%)。硅胶G(青岛
海洋化工厂)，冰醋酸、香草醛、高氯酸等均为分析
纯。 大叶紫薇叶，产于广西桂林和广东珠海。
UV-754紫外可见分光光度计、WATERS Platform
薄层分离—分光光度法测定大叶
紫薇叶中的总三萜含量
纵 伟 1，夏文水 1 ,*，崔宝良 2
(1.　江南大学食品学院, 江苏 无锡 214036；2. 无锡杰西医药科技有限公司, 江苏 无锡 214036)
摘 要：采用薄层色谱分离 -分光光度法测定大叶紫薇叶中的总三萜含量.研究了展开剂的组成，显色反应的条件，
并对该法的精密度、准确性及稳定性等进行了探讨．结果表明，适宜的展开剂组成为氯仿:丙酮 =4:1；显色反应
的适宜条件为：5%香草醛醋酸溶液 0.3ml, 高氯酸 1ml，60℃反应 15min,该法具有较好的精密度、准确性及稳定性，
测定结果同HPLC法分析结果相比无明显差异，可用于大叶紫薇叶中的总三萜含量的测定。
关健词：大叶紫薇；总三萜；薄层分离；分光光度法
Determination of Total Triterpene in Lagerstroemia specious L. by
Thin Layer Chromatography-spectrophotometry
ZONG Wei1，XIA Wen-shui1,*，CUI Bao-liang2
(1. School of Food Science,Southern Yangtze University,Wuxi 214036, China；
2.Jiexi Pharmaceutical Technology Co.Ltd., Wuxi 214036, China)
Abstract ：The procedure of thin layer chromatography-spectrophotometry analysis of total triterpene in Lagerstroemia specious
L. leaf was investigated in this paper. The results showed that the accuracy of determination was high, processing with the following
procedure: acetone (4:1 in volume ratio) as developer,0.3ml of 5% vanillin/glacial acetic acid added to 1ml perchloric acid solution,
heating 15 minutes at 60℃, and the absorbance measured at 542 nm after being added 5ml glacial acetic acid and cooling. The recovery
of the procedure was 100.22% and RSD 2.05%(n=5).The result showed no sharp difference with HPLC result.
Key words：Lagerstroemia specious L；total triterpene；thin layer chromatography；spectrophotometry
中图分类号：O657.3 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2005)04-0222-04
收稿日期：2004-04-19 *通讯作者
作者简介：纵伟( 1 9 6 5 -)，男，副教授，博士生，研究方向为功能性食品。
223※分析检验 食品科学 2005, Vol. 26, No. 4
ZMD 4000液相色谱仪、恒温水浴锅、电热烘箱、超
声发生器等。
1.2 实验方法
1.2.1 展开剂的选择
取经活化的 0.5%羧甲基纤维素钠 -硅胶G薄板，用
微量取样器取大叶紫薇提取液点样，分别加入不同组成
的展开剂，在层析缸中展开，展开后取出，挥干溶剂，
喷 10%硫酸乙醇，105℃烘箱中 10min显色，研究不同
组成的展开剂的分离效果。
1.2.2 标准曲线的测定
配制 1.11mg/ml的齐墩果酸标准品甲醇溶液，依次
量取 20、40、60、80、100和 120μl 的标准品甲醇溶
液在经活化的 0.5%羧甲基纤维素钠 -硅胶G薄板上点样，
同时在点样部分旁点上相同的溶液作为对照样，在层析
缸中展开，展开后取出，挥干溶剂，在对照样的部分
喷 10%硫酸乙醇，105℃烘箱中 10min显色，然后刮取
于红紫色部分相对应的样品样部分的条带，用甲醇为溶
剂 200 W 超声提取、洗脱三次，每次 10m in，洗脱液
加入到具塞试管中，85℃水浴蒸干溶剂后，加 0.3ml的
5%香草醛冰醋酸溶液和 1ml高氯酸，60℃反应 15min，
冰水冷却，加 5ml 冰醋酸，在 542nm 测定吸光度，绘
制标准曲线。线性方程为：Y=0.0046x-0.0079，其中X
为含量(μg)，Y为吸光度，R 2 =0.9989。
1.2.3 大叶紫薇叶中总三萜的提取和含量的分析
取 10g大叶紫薇叶，粉碎到 60目，加 100ml甲醇
80℃回流 2h，过滤，残渣继续回流两次，合并三次滤
液，真空浓缩，浓缩液在 25 ml 容量瓶中定容，备用。
用微量取样器取大叶紫薇提取液在薄板上点样，同
时在点样部分旁点上相同的溶液作为对照样，薄层分
离、洗脱后，水浴蒸干，加 5% 香草醛醋酸溶液和 1ml
高氯酸，60℃反应 15min，冰水冷却，加 5ml 冰醋酸，
测定吸光度，计算总三萜的含量。
1.2.4 比色条件的选择
1.2.4.1 最大吸收波长的确定
取齐墩果酸标准品甲醇溶液，薄层分离、洗脱
后，水浴蒸干，加 5% 香草醛醋酸溶液和高氯酸，60℃
反应 15min，冰水冷却，加 5m l 冰醋酸，在可见光区
进行扫描，确定最大吸收波长。
1.2.4.2 香草醛用量的选择
取 80μl 齐墩果酸对照品甲醇溶液，薄层分离、洗
脱后，水浴蒸干，加不同体积的 5% 香草醛冰醋酸溶液
和 1ml高氯酸，60℃反应 15min，冰水冷却，加 5ml冰
醋酸，在 54 2n m 波长下测定吸光度。
1.2.4.3 高氯酸用量的选择
取 80μl 标准品甲醇溶液，薄层分离、洗脱后，水
浴蒸干，加 0.3ml 5%香草醛冰醋酸溶液和不同体积的高
氯酸，60℃反应 1 5m in，冰水冷却，加 5 ml 冰醋酸，
在 542nm波长下测定吸光度。
1.2.4.4 显色温度的选择
取 80μl 齐墩果酸标准品甲醇溶液，薄层分离、洗
脱后，水浴蒸干，加 0.3ml 5%香草醛冰醋酸溶液和 1ml
的高氯酸，不同温度下反应 15min，冰水冷却，加 5ml
冰醋酸，在 542 nm 波长下测定吸光度。
1.2.4.5 显色时间的选择
取 80μl 齐墩果酸标准品甲醇溶液，薄层分离、洗
脱后，水浴蒸干，加 0.3ml 5%香草醛冰醋酸溶液和 1ml
的高氯酸，60℃反应不同时间，冰水冷却，加 5m l 冰
醋酸，在 54 2n m 波长下测定吸光度。
1.2.5 测定方法的评价
1.2.5.1 测定方法的稳定性
取 80μl 齐墩果酸标准品甲醇溶液，薄层分离、洗
脱后，水浴蒸干，加 0.3ml 5%香草醛冰醋酸溶液和 1ml
的高氯酸，不同温度下反应 15min，冰水冷却，加 5ml
冰醋酸，在 542nm 波长下测定吸光度，然后测定经过
不同时间的吸光度变化。
1.2.5.2 测定方法的精密度
取 80μl齐墩果酸标准品甲醇溶液 5份，薄层分离、
洗脱后，水浴蒸干，分别加 0.3ml 5%香草醛冰醋酸溶
液和 1ml的高氯酸，60℃下反应 15min，冰水冷却，加
5ml冰醋酸，在 542nm波长下测定吸光度。
1.2.5.3 加样回收率
将样品准确测定后，加入已知量齐墩果酸进行测
定，然后用差减法求出齐墩果酸的回收率。
1.2.6 总三萜的HPLC分析
1.2.6.1 色谱条件
分析柱：LunaC-18 (2.6mm× 250mm，5μm)；流
动相A乙腈，流动相B 0.1%甲酸；梯度洗脱:60%A→
100%A， 30min；柱温：30℃；流速：1ml /min；进
样量：2 0μl；检测波长：2 0 5 n m。
1.2.6.2 测定方法
精密称取 2α - 羟基齐墩果酸、2α - 羟基熊果酸、
齐墩果酸对照品甲醇溶解并定容。绘制标准曲线； 提
取液经过 0.45μm滤膜过滤后进行HPLC分析。根据标准
曲线计算 2α - 羟基齐墩果酸、2α - 羟基熊果酸、齐
墩果酸含量。总三萜的含量为三者含量之和。
2 结果与讨论
2.1 展开剂的选择
对不同组成和配比的展开剂进行比较后发现，氯
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仿:丙酮 =4:1的展开剂效果最好，在该条件下展开、显
色后，各三萜类组分呈现红紫色和紫蓝色，各部分条
带无拖尾，分离较好。
2.2 反应条件的选择
2.2.1 最大吸收波长的确定
通过将显色溶液在可见光区进行扫描，得最大吸
收波长为 542nm(图 1)，而空白对照组在此波长下无吸
收。所以选用此波长为比色分析的波长。
2.2.2 香草醛用量的选择
从图 2可见，当 5%香草醛醋酸溶液用量达到 0.3ml
后，反应的吸光度基本保持不变，因此，选用 0.3ml 5%
香草醛醋酸溶液用量为香草醛醋酸溶液的适宜用量。
2.2.3 高氯酸用量的选择
从图 3中可见,当高氯酸用量为 1ml时，反应的吸光
度基本保持不变，因此，选用 1ml高氯酸用量为高氯酸
的适宜用量。
2.2.4 显色温度的选择
从图 4 中可见,随着温度的提高，反应的吸光度增
加，但温度超过 6 0℃，空白的颜色增加，因此，选
用 60℃为反应的适宜温度。
2.2.5 显色时间的选择
从图 5 可见，随着时间的增加，反应的吸光度增
图2 5%香草醛醋酸溶液用量对显色反应的影响
Fig.2 The effect of 5% vanillin/glacial volume on reaction
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
香草醛(ml)
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
A
加，但时间超过 1 5m in，增加减慢，所以选用反应的
适宜时间为 15min。
2.3 测定方法的评价
2.3.1 测定方法的稳定性
从图 6可见，30min内吸光度稳定,所以测定应该在
显色后 30min内测定。
2.3.2 测定方法的精密度
从表 1可见，连续测定 5次，其 RSD =1.9 %，表
图3 高氯酸用量对显色反应的影响
Fig.3 The effect of perchloric acid volume on reaction
0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6
高氯酸用量(ml)
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
A
图4 显色温度对显色反应的影响
Fig.4 The effect of temperature on reaction
20 30 40 50 60 70 80
温度(℃)
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
A
图5 显色时间对显色反应的影响
Fig.5 The effect of time on reaction
0 5 10 15 20 25 30
时间(min)
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
A
图1 显色体系的光吸收曲线
Fig.1 Absorbance cruve of system
000.0 431.3 462.5 453.8 526.0 659.3 587.5 518.8 650.0
1.000
0.800
0.600
0.400
0.200
-1.000
A
波长(nm)
225※分析检验 食品科学 2005, Vol. 26, No. 4
通过方差分析可知，薄层色谱分离 -分光光度法和
HPLC法测定大叶紫薇叶中的总三萜含量所得结果无明显
差异，薄层色谱分离 - 分光光度法测定的结果略高于
HPLC法。HPLC法测定大叶紫薇叶中的总三萜含量具有
测定准确、灵敏度高的特点，但薄层色谱分离 - 分光光
度法简便，快速，测定结果于HPLC法无明显差异，可
作为测定大叶紫薇叶中的总三萜含量的方法。
3 讨 论
3.1 大叶紫薇提取物中，除含有三萜类成分外，还含
有大量叶绿素、黄酮、蛋白质、多糖等成分，如果
直接将提取物用于比色反应，由于以上物质的干扰，无
法准确进行三萜类成分的测定，将提取物采用薄层色谱
先进行分离，可有效去除以上成分的干扰。
3.2 采用薄层色谱分离、分光光度法测定大叶紫薇茶
中的总三萜含量，具有简单、操作方便，且灵敏度高
的特点，测定结果与HPLC法测定的大叶紫薇叶中的总
三萜含量无明显差异，可用于大叶紫薇茶及其其它产品
的质量分析。
参考文献：
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测定次数
吸光度 平均吸光度
相对标准偏差
(RSD) (%)
1 0.412
2 0.404
3 0.398 0.405 1.9
4 0.414
5 0.398
表1 测定方法的精密度
Table 1 Accuracy of measurement
加入量 测定量 回收率 平均回收率 相对标准偏差(RSD)
(μg) (μg) (%) (%) (%)
20 20.60 103.02
30 30.36 101.21
40 39.64 99.10 100.22 2.05
50 49.73 99.45
60 58.98 98.30
表2 齐墩果酸的回收率
Table 2 Recovery of measurement
明该法具有较好的精密度。
2.3.3 加样回收率
从表 2可见，加样回收率为 100.22%，RSD=2.05%，
表明加样回收可以满足要求。
2.3.4 薄层色谱分离 -分光光度法和HPLC法测定总三
萜的比较
分别采用薄层色谱分离 -分光光度法和HPLC法对所
采集的几种广西桂林产大叶紫薇叶和广东珠海产大叶紫
薇叶中的总三萜含量进行了分析，结果见表 3。
图6 显色反应的稳定性
Fig.6 Stability of reaction
0 10 20 30 40 50 60
时间(min)
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
A
样品
薄层色谱分离-分光光度法 HPLC法 p
(n=3, X± s) (n=3, X± s)
1 1.79± 0.16 1.72± 0.13 p＞ 0.05
2 1.92± 0.18 1.80± 0.10 p＞ 0.05
3 1.82± 0.17 1.73± 0.13 p＞ 0.05
表3 薄层色谱分离-分光光度法和HPLC法测定总三萜的比较
Table 3 The comarision result of thin layer chromatography-
spectrophotometry method and HPLC method