全 文 ：2016 年 7 月 第 18 卷 第 7 期 中国现代中药 Mod Chin Med Jul. 2016 Vol. 18 No. 7
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△ ［基金项目］ 公益性行业科研专项(No. 201507004-03)
* ［通信作者］ 高慧，教授，博士;研究方向:中药炮制原理;电话:0411-85890146，E-mail:gaohuitcm@ 163. com
胆南星辅料成分分析及其清热作用
△
陈江宁1，2，单国顺1，2，刘晓瑜1，2，高慧1，2*
(1. 辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600;
2. 辽宁省中药炮制工程技术研究中心，辽宁 大连 116600)
［摘要］ 目的:通过比较猪、牛、羊胆汁中胆酸类成分和对发热小鼠清热作用的差异，为胆南星炮制辅料的筛
选提供参考依据。方法:采用 HPLC-CAD法检测三种胆汁中胆酸类成分(胆酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆
酸、牛磺胆酸钠)。色谱条件为Waters C18色谱柱(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，流动相为 0. 5%甲酸(A)-乙腈(B) ，梯
度洗脱，体积流量:1 mL·min －1;进样量:20 μL，Corona 参数:氮气压力为 35 psi(241. 3 Kpa) ，Filter:high，
Ｒange 200 pA。以干酵母制备小鼠发热模型，观察猪、牛、羊胆汁对发热小鼠体温的影响。结果:猪、牛、羊胆汁
中胆酸类成分存在明显差异，五种胆酸总量分别为 1. 495 0%、0. 354 0%、0. 597 6%，猪胆汁中猪去氧胆酸含量最
多，为 1. 128 7%。猪、牛、羊胆汁对发热小鼠均有一定的清热作用，猪胆汁在 6 h时表现出清热作用但不持久。牛
胆汁在 8 h时表现出较明显的清热作用。羊胆汁清热作用最明显且持久。结论:猪、牛、羊胆汁无论胆酸类成分含
量还是清热作用均存在明显差异，提示我们应对药典规定的胆南星的三种胆汁进行区分，将其分别发酵制成胆南星
后并结合药效评价再进行筛选。
［关键词］ 胆南星胆汁;高效液相色谱;胆酸;解热
Composition Analysis and Compare of Clearing Heat Effects among
Arisaema cum Bile Processing
CHEN Jiangning1，2，SHAN Guoshun1，2，LIU Xiaoyu1，2，GAO Hui1，2*
(1. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China;
2. Chinese Materia Medica Processing Engineering Center of Liaoning Province，Dalian 116600，China)
［Abstract］ Objective:To compare bile acids composition in pig’s bile，bilis bovina，shee Pbile and differences of
clearing heat effect in mice， and provide a reference basis for screening out the arisaema cum bile processing
adjuvants. Methods:HPLC-CAD method was used to detect the bile acid composition (cholic acid，deoxidationcholic acid，
hyodeoxycholic acid，chenodeoxycholic acid，sodium taurocholic acid)in three kinds of bile. The chromatographic condition
was following:Waters C18 column (250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，0. 5% Formic acid water (A)-Acetonitrile (B) ，gradient
elution，Volume flow:1 mL·min －1，Corona parameters:the nitrogen pressure was 35 psi (241. 3 Kpa) ，the Filter:high，
Ｒange 200 pA. The fever model of mice was induce with dry yeast，the effects of clearing the heat on the model among pig’s
bile，bilis bovina and shee Pbile were observed and compared. Ｒesults:The total amount of the five kinds of bile acids in
pig’s bile，bilis bovina，shee Pbile were 1. 495 4%，0. 354 0% and 1. 495 4% . pig’s bile contains the most amount of
hyodeoxycholic acid，was 1. 128 7%. The 3 kinds of biles all showed clearing heat function. The pig’s bile showed clearing
heat effect at 6 h but not persistent. Bilis bovina showed a significant effect of clearing heat at 8 h. Shee Pbile could clear heat
significant and persistent. Conclusion:Both the contents of five kinds of bile acids and the effects of clearing heat are different
among the pig’s bile，bilis bovina，shee Pbile，In pharmacopoeia we distinguish the Pinellia Cum Bile with three kinds of
bile，then we use pharmacodynamic evaluation to filt the which bile fermente Arisaema Cum Bile is best．
［Keywords］ Arisaema cum Bile;HPLC-CAD;cholic acid;clearing heat
doi:10． 13313 / j． issn． 1673-4890． 2016． 7． 008
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2016 年 7 月 第 18 卷 第 7 期 中国现代中药 Mod Chin Med Jul. 2016 Vol. 18 No. 7
胆汁为来源于猪科动物猪 Sus scrofa domestica
Brisso，牛科动物黄牛 Bos Taurus domesticus Gmelin或
水牛 BubalusL，牛科动物山羊 CaprahircusL 及绵羊
OvisariesL的胆汁［1］。胆汁性苦寒，具有清热解毒、
利湿、止咳、通便等功效［2］。胆南星是由天南星与
猪、牛、羊胆汁混合，经发酵制成，药性由温转凉，
功效由温化寒痰转变为清化热痰。目前胆南星的炮
制辅料和炮制工艺尚无统一标准。由于胆汁中的胆
汁酸类成分具有一定的药效活性，故本文通过比较
研究三种胆汁中胆酸类成分和对发热小鼠清热作用
的差异，为筛选发酵胆南星所需的辅料和统一胆南
星的炮制工艺提供参考依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器
LC-20AB 高效液相色谱仪(日本岛津公司) ;
Corona电雾式检测器(美国 ESA 公司) ;KQ-250DB
型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ;
Mettler AE240 型十万分之一分析天平(瑞士 Mettler
公司) ;FA1004B 型电子天平(上海精密科学仪器有
限公司) ;HWS-080 恒温恒湿箱(上海精宏实验设备
有限公司) ;电子体温计(欧姆龙(大连)有限公司) ;
干酵母(安琪酵母股份有限公司)。
1. 2 试药
胆酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸对照品均购自中
国食品药品检定研究院，批号分别为 100078-
201415、110724-200207、100087-201411，质量分数
均≥98%;鹅去氧胆酸、牛磺胆酸钠对照品均购自
上海 源 叶 生 物 科 技 有 限 公 司，批 号 分 别 为
ZO1011LA14、Z25M3L1，质量分数均≥ 98%;乙
腈、甲醇为色谱纯;水为纯水。猪、牛、羊胆汁购
于大连开发区湾里商场。
2 方法与结果
2. 1 胆酸类成分含量测定［3］
2. 1. 1 胆酸类成分对照品溶液的制备 精密称取胆
酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺胆酸
钠适量，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成质量浓度分
别为 0. 0426、0. 0453、0. 051、0. 026、0. 024 mg /mL
的混合对照品溶液。
2. 1. 2 胆酸类成分供试品溶液的制备 猪、牛、羊
胆汁为趁鲜破胆取得，置棕色瓶，于 － 20 ℃保存，
备用。
精密称取猪、牛、羊胆汁各 2 g，置 50 mL量瓶
中，加入适量甲醇并超声提取 1 h，放冷至室温，补
足甲醇至刻度，摇匀，即得。
2. 1. 3 胆酸类成分含量测定色谱条件 Waters C18色
谱柱(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)流动相为 0. 5%甲酸
(A)-乙腈(B) ，梯度洗脱条件:0 ～ 5 min，40% A ～
50%A;5 ～ 25 min，50% A ～ 57% A;体积流量:
1 mL·min －1;进样量:20 μL，Corona 参数:氮气压力
为 35 psi(241. 3 Kpa)，Filter:high，Ｒange200pA［2］。
图 1 胆酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、
牛磺胆酸钠对照品色谱图
图 2 羊胆汁中胆酸类成分色图谱
2. 1. 4 方法学考察
2. 1. 4. 1 线性关系考察 精密吸取各胆酸类对照品
溶液适量，注入液相色谱仪，测定，并记录峰面积。
以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲
线，得到回归方程，胆酸:Y = 3 149 097. 5910x +
49 800. 590 2 (r = 0. 999 2) ，去 氧 胆 酸: Y =
1 319 880. 859 2x + 2 677. 169 0 (r = 0. 999 7) ，猪去
氧胆酸:Y = 1 022 475x － 26 477. 385 4 (r =
0. 999 7) ，鹅去氧胆酸:Y = 275 884. 168 5x +
341. 337 0 (r = 0. 999 9) ，牛 磺 胆 酸 钠:Y =
1 834 609. 853 1x － 15 358. 426 2(r = 0. 999 7) ，结果
表明五种胆酸类成分的进样量与峰面积呈良好的线
性关系。
2. 1. 4. 2 精密度试验 精密吸取各对照品溶液
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20 μL，重复进样 6 次，计算得胆酸、去氧胆酸、猪
去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺胆酸钠峰面积的 ＲSD
值分别为 1. 5%、1. 8%、2. 1%、1. 1%、1. 3%，结
果表明仪器精密度良好，色谱图见图 1。
2. 1. 4. 3 稳定性试验 取猪胆汁供试品溶液，分别
在 0、2、4、6、10、24 h 进样，计算得胆酸、去氧
胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺胆酸钠峰面
积的 ＲSD 值分别为 1. 9%、2. 0%、1. 2%、1. 6%、
1. 5%，结果表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2. 1. 4. 4 重复性试验 精密称取同一批猪胆汁 6 份，
制备供试品溶液，进样测定，计算得胆酸、去氧胆
酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺胆酸钠质量分
数的 ＲSD 值分别为 0. 7%、1. 2%、2. 4%、1. 4%、
2. 1%，结果表明本方法重复性良好。
2. 1. 4. 5 加样回收率试验 取已知含量的猪胆汁样
品 1 g，平行 6 份，精密称定，分别精密加入
0. 042 6 mg·mL －1胆酸、0. 051 mg·mL －1猪去氧胆酸、
0. 024 mg·mL －1牛磺胆酸钠、0. 026 mg·mL －1鹅去
氧胆酸、0. 0453 mg·mL －1去氧胆酸对照品溶液适
量，制备供试品溶液，进样测定，计算回收率，结
果见表 1。
2. 1. 5 含量测定 分别精密吸取牛、羊、猪胆汁供
试品溶液 20、10、10 μL，按照 “2. 1. 3”项下色谱
条件进行含量测定，外标法计算各胆汁中五种胆酸
类成分的质量分数，结果见表 2。
2. 1. 6 结果 猪、牛、羊三种胆汁中所含的成分有
一定的差异。羊胆汁中检测出上述五种胆酸类成分，
但在牛胆汁和猪胆汁中分别未检测出鹅去氧胆酸和
去氧胆酸。同时，胆酸类成分的含量差异亦较大，
猪、牛、羊胆汁中五种胆汁酸类成分总量分别为
1. 495 0%、0. 354 0%、0. 597 6%，猪胆汁含有猪去
氧胆酸的量最多，为 1. 128 7%。三种胆汁中牛磺胆
酸钠含量均达到 0. 2%以上。
2. 2 小鼠清热实验
2. 2. 1 干酵母混悬溶液的制备［4-6］ 称取干酵母 2 g
于乳钵中，逐渐加入蒸馏水研磨为均匀的悬浆，并
定容于 10 mL 量瓶中，即得 20%酵母混悬液(现用
现配)。
2. 2. 2 动物及造模给药［7］ SPF 级 KM 小鼠 40 只，
体重 18 ～ 22 g(购于辽宁长生生物技术有限公司，许
可证号:SCXK(辽)2015-00011)。小鼠适应性喂养
一周，自由饮食饮水，室温(22 ± 2)℃。
表 1 猪胆汁中五种胆酸成分加样回收率试验(n = 6)
组分
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
平均回收
率 /%
ＲSD /%
胆酸 0. 465 0. 127 6 0. 591 5 99. 1 0. 5
0. 465 0. 127 6 0. 590 4
0. 465 0. 127 6 0. 590 9
0. 465 0. 127 6 0. 592 0
0. 465 0. 127 6 0. 591 9
0. 465 0. 127 6 0. 591 4
猪去氧胆酸 11. 287 0. 306 11. 596 6 100. 5 1. 0
11. 287 0. 306 11. 590 2
11. 287 0. 306 11. 598 8
11. 287 0. 306 11. 591 4
11. 287 0. 306 11. 595 1
11. 287 0. 306 11. 594 2
牛磺胆酸钠 2. 007 0. 096 2. 103 1 99. 5 0. 8
2. 007 0. 096 2. 102 1
2. 007 0. 096 2. 103 4
2. 007 0. 096 2. 102 7
2. 007 0. 096 2. 101 9
2. 007 0. 096 2. 101 5
鹅去氧胆酸 1. 191 0. 104 1. 295 2 101. 5 0. 9
1. 191 0. 104 1. 297 6
1. 191 0. 104 1. 295 5
1. 191 0. 104 1. 297 1
1. 191 0. 104 1. 296 9
1. 191 0. 104 1. 296 5
去氧胆酸 0 0. 135 9 0. 132 0 98. 6 1. 0
0 0. 135 9 0. 133 8
0 0. 135 9 0. 136 1
0 0. 135 9 0. 134 6
0 0. 135 9 0. 133 0
0 0. 135 9 0. 133 8
表 2 不同胆汁中胆酸类成分含量(%)
样品
名称
胆酸
猪去
氧胆酸
牛磺胆
酸钠
鹅去
氧胆酸
去氧
胆酸
总量
牛胆汁 0. 000 4 0. 022 1 0. 328 9 — 0. 002 6 0. 345 0
羊胆汁 0. 060 3 0. 018 0 0. 481 7 0. 023 4 0. 0142 0. 597 6
猪胆汁 0. 046 5 1. 128 7 0. 200 7 0. 119 1 — 1. 495 0
注:—表示未检测出该成分
造模前，小鼠分别于每日上午 8:00 和下午
3:00测量肛温，连续测定 3 天。(将体温计于探头
后 3 cm处进行标记，确保体温计每次伸入动物体内
的长度一致)选取体温在 36. 6 ～ 38. 0 ℃且连续体温
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变化小于 0. 3 ℃的小鼠，取其平均值作为正常基础
体温。按照体温基础值和体重均衡随机分成 5 组，
每组 8 只，分别为空白组、模型组、猪胆汁组、羊
胆汁组、牛胆汁组。称重后各组小鼠以 10 mL /kg 剂
量皮下注射 20%干酵母混悬液进行造模，同时灌胃
胆汁(10 mL /kg) ，空白对照组注射和给予同体积生
理盐水。于给药后 2. 0、3. 0、6. 0、7. 0、8. 0、9. 0、
10. 0、12. 0 h 测定肛温，与基础体温比较，计算
温差。
2. 2. 3 统计学处理 实验数据用 SPSS 17. 0 进行分
析，所测数据以 x ± s 表示;采用单因素方差分析，
判断各组差异的统计学意义，结果见表 2。
2. 2. 4 结果 观察小鼠体温 12 h 内的变化情况，由表
3 可以看出，各组和模型组相比，猪、牛、羊胆汁
对发热小鼠均有一定的清热作用。其中，猪胆汁在
6 h时表现出清热作用但不持久。牛胆汁在 8 h 时表
现出较明显的清热作用。羊胆汁清热作用最明显且
持久。
表 3 三种胆汁对发热小鼠体温变化的影响(x ± s，n =8)
组别 2 h 4 h 6 h 7 h 8 h 9 h 10 h 12 h
空白对照组 － 0. 26 ± 0. 07 － 0. 43 ± 0. 31 0. 35 ± 0. 16 0. 73 ± 0. 19 0. 16 ± 0. 08 0. 72 ± 0. 13 0. 57 ± 0. 12 0. 9 ± 0. 24
模型对照组 － 0. 73 ± 0. 21 1. 79 ± 0. 14 2. 75 ± 0. 32 2. 69 ± 0. 37 2. 77 ± 0. 80 2. 44 ± 0. 48 2. 81 ± 0. 80 2. 07 ± 0. 26
牛胆汁 － 1. 11 ± 0. 72 － 0. 33 ± 0. 97* 0. 49 ± 1. 38* 1. 09 ± 0. 65* 0. 42 ± 0. 64＊＊ 0. 67 ± 0. 46＊＊ 1. 19 ± 0. 88* 0. 84 ± 0. 92
羊胆汁 － 1. 86 ± 0. 70* － 1. 31 ± 1. 00＊＊－ 0. 60 ± 1. 25＊＊ 0. 63 ± 0. 68＊＊ － 0. 41 ± 0. 73＊＊ － 0. 87 ± 0. 74＊＊ 0. 03 ± 0. 58＊＊ 0. 41 ± 1. 03*
猪胆汁 － 0. 65 ± 0. 44 1. 70 ± 0. 28 1. 52 ± 1. 37* 1. 71 ± 1. 67 1. 83 ± 0. 93 2. 63 ± 1. 83 1. 88 ± 2. 11 2. 05 ± 2. 20
注:与模型组比较* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
3 讨论
由于胆汁中的胆酸类成分没有紫外吸收，王一
博［3］等对 HPLC-CAD法和 HPLC-ELSD法测定胆汁中
胆酸类成分进行了分析比较，结果表明 HPLC-CAD
法更适合胆酸类成分的测定，因此本实验采用
HPLC-CAD法检测猪、牛、羊胆汁中五种胆酸类成
分的含量，本方法简便、准确，重复性较好。实验
数据表明，猪、牛、羊胆汁中胆酸类成分存在明显
差异，五种胆酸总量分别为 1. 495 0%、0. 354 0%、
0. 597 6%，其中猪胆汁中 5 种胆酸总量最高，主要
是猪去氧胆酸含量高，为 1. 128 7%，但去氧胆酸未
检出。牛胆汁中 5 种胆酸总量最低，其中鹅去氧胆
酸未检出，胆酸含量明显偏低。三种胆汁中牛磺胆
酸钠含量相对比较接近，在 0. 2% -0. 5%之间。
猪、牛、羊胆汁对发热小鼠均有一定的清热作
用，其中，猪胆汁在 6 h 时表现出清热作用但不持
久。牛胆汁在 8 h 时表现出较明显的清热作用。羊
胆汁清热作用最明显且持久。
胆南星是一味药用历史悠久的曲剂，清朝的
《幼幼集成》记载 “能装过九胆诚为至宝，任彼真
正牛黄莫能及此”［8］。虽然胆南星有着较好的临床疗
效，但是现行的药典和各省炮制规范对胆南星的炮
制工艺并没有一个统一的标准，市场加工及应用情
况较为混乱，没有最大的发挥出胆南星的药用价值。
本实验对不同胆汁中的胆酸成分和解热作用进行了
比较研究，发现猪、牛、羊胆汁无论胆酸类成分含
量还是清热作用均存在明显差异，我们应对药典规
定的胆南星的三种胆汁进行区分，将其分别发酵制
成胆南星并结合药效评价再进行筛选。包括制成胆
南星后的成分及作用比较，筛选出胆南星的适宜辅
料、统一胆南星的炮制工艺。
参考文献
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(收稿日期 2016-02-01)
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