全 文 ：［收稿日期］ 2010113(009)
［基金项目］ 中央高校基本科研业务费专项资金 (SWJ-
TU09BK220;SWJTU09ZT29)
［第一作者］ 万军，西南交通大学生命科学与工程学院讲师，博
士学位，主要从事中药新药研究与教学工作，E-
mail:wwangyidi@ 126. com
紫外分光光度法测定胆南星中总胆酸的含量
万军，翟羽佳，闫翠起，贾程程
(西南交通大学生命科学与工程学院，成都 610031)
［摘要］ 目的:建立中药胆南星中总胆酸含量测定的方法。方法:以鹅去氧胆酸为对照品，直接采用加入 50%硫酸溶液，
75 ℃水浴加热反应显色，于紫外分光光度计(377 ± 2)nm 波长处测定。结果 鹅去氧胆酸在0. 000 0 ～ 0. 431 2 g·L － 1呈良好
线性关系(r = 0. 999 1)，平均回收率为 98. 79%(n = 5)，RSD 为 3. 02%。结论 本方法准确，简便，重复性好，可用于中药胆南
星中总胆酸含量测定。
［关键词］ 胆南星;鹅去氧胆酸;总胆酸;含量测定;紫外分光光度法
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ B ［文章编号］ 1005-9903(2010)14-0071-03
Determination on Contents of Total Bile Acid in Bile Arisaema
by Ultraviolet Gpectrophometry
WAN Jun，ZHAI Yu-jia，YAN Cui-qi，JIA Cheng-cheng
(Life Science ＆ Engineering College of South-west Jiao-tong University，Chengdu 610031，China)
［Abstract］ Objective:To establish the methods of determination on the contents of total bile acid in Bile
Arisaema by ultraviolet spectrophometry. Method:To add 50% sulfuric acid to the sample and react in water bath
at 75 ℃ . The contents of total bile acid were determined by ultraviolet spectrophometry on (377 ± 2)nm，using
chenodeoxycholic acid (CDCA) as the chemical reference substance. Result:The linear response range was
0. 000 0 ～ 0. 431 2 g·L － 1，r = 0. 999 1. The average recovery was 98. 79%(n = 5)，RSD 3. 02% . Conclusion:
The method was accurate，simple and reproducible which could be used for the determination of total bile acid in
Bile Arisaema.
［Key words］ Bile Arisaema;chenodeoxycholic acid;total bile acid;determination;ultraviolet spectroph-
ometry
胆南星系由天南星科植物天南星 Arisaema
erubescens(wall.)Schott.，异叶天南星 A. heterophyl-
lum Bl. 或东北天南星 A. amurense Maxim. 的干燥块
根细粉与牛、羊或猪胆汁炮制加工而成，胆汁制南
星，既可减低生南星毒副作用，又使其药性由温转
凉，变温化寒痰药为清化热痰、息风定惊之品，用于
治疗痰热咳嗽、咯痰黄稠、中风痰迷，癫狂惊痫等症。
《中国药典》2005 年版一部主要针对原药材进行显
微和理化鉴别［1］，而未对成品中的胆汁质量进行控
制。笔者采用鹅去氧胆酸作为胆南星中总胆酸含量
的评价指标，建立专属性较强的含量测定方法，拟有
效控制胆南星的内在质量，使标准更加完善。
1 仪器与试药
TU-1901 双光束紫外-可见分光光度计(北京普
析通用仪器有限责任公司);Sartorius BS 224 S(德国
赛多利斯公司)精密电子天平;SK8200LH 超声仪
(上海科导超声仪器有限公司);DK-98-1 型电热恒
温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司)。
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2010 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 16，No. 14
Oct.，2010
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2010.14.038
胆南星，由成都中药饮片有限公司提供，批号
090802，091001，091002，091101，091102，091103;鹅
去氧胆酸对照品购自中国药品生物制品检定所，供
含量测定用，批号 110806-200704;其余试剂均为分
析纯。
2 方法与结果
2 . 1 对照品溶液的制备 精密称取鹅去氧胆酸对
照品 10. 0 mg，置 10 mL 量瓶中，加冰醋酸制成 1 g·
L － 1鹅去氧胆酸溶液，即得对照品溶液。
2. 2 供试品溶液的制备［2-3］ 取胆南星样品粉末
1. 0 g，精密称定，置锥形瓶中，加乙酸乙酯 80 mL，水
浴回流 2. 5 h，于提取结束时加入 0. 6 g 活性炭，继续
回流 0. 5 h，滤过，滤液水浴蒸干，用 60% 的冰醋酸
溶解，并转移至 25 mL 量瓶中，定容，摇匀(依情况进
行过滤)，精密吸取此溶液 1. 0 mL，置 20 mL 带刻度
试管中，加入 50%硫酸溶液 14 mL，混匀，置 75 ℃水
浴中保温 10 min，迅速移至冰浴中放置 2 min，即得。
2. 3 检测波长的确定 按供试品溶液的制备方法，
以 60%冰醋酸溶液作为空白。将对照品溶液、供试
品溶液在 200 ～ 400 nm 波长进行光谱扫描。结果供
试液和对照溶液在 377 nm 处有最大吸收，故选择
377 nm 波长作为测定波长。见图 1。
图 1 鹅去氧胆碱、胆南星样品 UV 光谱图
A. 对照品;B. 样品
2. 4 标准曲线的制备 分别精密吸取 0. 0，1. 0，
1. 5，2. 0，2. 5，3. 0，3. 5 mL 的鹅去氧胆酸对照品溶
液(C = 0. 123 2 g·L － 1)置 20 mL 带刻度的试管中，
以 60% 冰醋酸溶液作为空白，依法测定吸光度，以
吸光度 A 为纵坐标，对照品浓度 C 为横坐标，绘制标
准曲线，回归方程 A = 1. 263C + 6. 9 × 10 － 3，r =
0. 999 1。结果表明鹅去氧胆酸在0. 000 0 ～ 0. 431 2
g·L － 1的线性关系良好。
2. 5 精密度、重复性、稳定性 精密称取胆南星样
品粉末，按供试品溶液制备方法制备，以 60% 冰醋
酸溶液作为空白对照液，在 377 nm 处测定其吸收
度，重复测定 5 次，RSD 0. 14%，表明仪器精密度良
好。
精密称取胆南星样品粉末，5 份，测定，平均值
为 78. 49 mg·g － 1，RSD 0. 67%，结果表明该方法重
复性良好。
取同一份样品，依法操作，在 0. 0，0. 5，1. 0，1. 5，
3. 5，6. 0 h 时间在 377 nm 处测定吸收度，RSD
2. 89%，表明供试品溶液在 6h 内测定基本稳定。
2. 6 加样回收率试验 取胆南星样品粉末，5 份，
精密称定，分别加入鹅取氧胆酸对照品适量，依法操
作，在 377 nm 处测定其吸收度，结果平均值为
98. 79%，RSD 3. 02%。
2. 7 样品测定 按照以上方法测定 6 批胆南星样
品 (090802，091001，091002，091101， 091102，
091103)，结果总胆酸含量以鹅去氧胆酸计分别为
78. 5，104. 6，91. 7，85. 2，88. 3，90. 0 mg·g － 1，平均值
为 89. 7 g·g － 1(n = 6)。
3 讨论
3. 1 指标成分的选择 目前，对胆南星中的胆酸质
量控制研究较少，主要集中在薄层色谱鉴别及胆汁
化学成分的分析［4-6］，尚未见胆南星中总胆酸含量的
仪器分析报道。根据张能荣研究的牛、羊、猪胆汁的
15 种成分的结果，只有鹅去氧胆酸是 3 种胆汁共有
成分［7］，因此，采用鹅去氧胆酸作为指标成分，对胆
南星中总胆酸的含量进行测定。
3. 2 供试品溶液制备方法的考察
3. 2. 1 提取溶剂考察［8］ 以 60%冰醋酸溶液为空
白，用 UV 法在 200 ～ 400 nm 波长间扫描各样品的
最大吸收波长，并在(377 ± 2)nm 处进行含量测定，
结果氯仿 +乙醇(2 ∶ 1)作为提取溶剂，胆酸的浓度
最高(0. 548 g·L － 1)，但 UV 扫描得到其最大吸收
波长为 292 nm，与对照品的最大吸收波长(377 ± 2)
nm 不符，乙酸乙酯与对照品的最大吸收波长亦不
符，故不予采用;氯仿作为提取溶剂，提取液进行 UV
扫描得到其最大吸收波长为 377 nm，但由于其稳定
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中国实验方剂学杂志
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Vol. 16，No. 14
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性差(样品放置 20 min，其最大吸收波长变为 292
nm)，同时考虑氯仿毒性较大，不建议采用。因此，
选用乙酸乙酯 +活性炭为提取溶剂。
3. 2. 2 提取时间考察 分别采用乙酸乙酯回流提
取 1. 5，2，2. 5，3，3. 5，4 h，依法操作，并在(377 ± 2)
nm 处进行吸光度的测定，结果回流时间 4 h，胆酸成
分的浓度最大(0. 330 0 g·L － 1)，但进行 UV 光谱扫
描得到其最大吸收波长为 292 nm，与对照品的最大
吸收波长(377 ± 2)nm 不符，而提取 3 h，其最大吸
收波长仍在 376 nm 处;因此，提取时间定为 3 h。
3. 2. 3 提取方法考察 参考文献［3，5，8］，胆酸成分的
提取多采用水浴回流法，故试验选用回流法，不再进
行提取方法的考察。
3. 3 活性炭用量考察 试验发现活性炭的加入对
胆南星提取液中的干扰成分有较好的吸收，而对胆
酸类成分吸收较小，且活性炭用量对最大吸收波长
有一定影响。参考活性炭常用量，选用 0. 35 g 及
0. 6 g 作为考察水平。结果表明加入 0. 35 g 活性炭，
其最大吸收为(291 ± 2)nm 波长处;而加入 0. 60 g
活性炭得到的供试品溶液，进行 UV 光谱扫描，其最
大吸收为(377 ± 2)nm 波长处，与对照品光谱扫描
结果一致，且稳定性及重复性好，故活性炭用量为
0. 60 g。
3. 4 高效液相色谱法测定鹅去氧胆酸含量 试验
曾探索采用 HPLC 测定样品中鹅去氧胆酸含
量［9-10］。色谱条件岛津 LC-20AT 高效液相色谱仪，
色谱条件 KP100-5C18色谱柱(4. 6 mm × 150 mm，5
μm)，柱温 35 ℃;流动相甲醇-水(70 ∶ 30);流速 0. 8
mL·min － 1;检测波长 203 nm。精密吸取的鹅去氧
胆酸对照品溶液 10 μL 进样，结果在 60 min 仍没有
色谱峰出现，后又将流动相调整为甲醇-水(82∶ 18)，
依然没有峰值检出。
后考虑到胆汁酸类成分无紫外吸收基团，故采
用柱前衍生法对具有紫外吸收基团的衍生产物进行
色谱检测［11］，以对溴乙酰基硝基苯为衍生化试剂，
18-冠醚-6 为相催化剂。但经多方联系，均未购买到
18-冠醚-6，故其实验研究待下一步展开。
［参考文献］
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总胆酸含量测定［J］.中药材，2008，31(5):654.
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［5 ］ 张绍轩，黄青，王学农，等 . 胆南星的薄层色谱鉴别
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［责任编辑 顾雪竹］
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