全 文 ：抗坏血酸(Ascorbic Acid，AsA)即维生素C，对
于促进人体正常生长发育，提高人体对疾病的抵抗
力等方面发挥着重要的作用, 是正常的人体生命活
动所必需的[1-2]。在果实中属于高丰度的小分子抗氧
化物质，也是果品以及其他许多食品中的重要功能
成分，对于植物的生长发育有着重要的作用[3-4]。
黑穗醋栗 (Ribes nigrum L.) 俗称黑加仑
(Black currant)，属于虎耳草科 (Saxifragaceae)茶
藨子属(Ribes)。黑穗醋栗的营养物质含量极其丰
富，尤其是 AsA 含量非常高 [5]，仅次于猕猴桃，每
100 g成熟鲜果中含有 100～300 mg。但是，在不同
收稿日期：2013-08-03
基金项目：东北农业大学博士启动基金(2010RBC21)；农业部公
益性行业专项基金(201103037)；黑龙江省教育厅科学
技术研究项目(12511050)
作者简介：李曙雷(1987-)，男，在读硕士，主要从事果实品质分析
及采后加工研究。
通讯作者：霍俊伟，男，博士，教授，E-mail:junweihuo@yahoo.com.cn
秦 栋，男，博士，讲师，E-mail:dongq9876@126.com
的品种之间以及果实不同的成熟期，AsA 的含量
差异很大，这就给黑穗醋栗中 AsA 的利用带来了
诸多不便。
目前，对于水果中 AsA 含量的测定方法有很
多种，主要包括：荧光分析法、2, 4- 二硝基苯肼
法、2, 6- 二氯靛酚滴定法、高效液相色谱法、电
位滴定法、紫外分光光度法、碘滴定法等。这些方
法各有特点，但是，对于黑穗醋栗这样的有色果实
中 AsA 含量的测定，尚没有一种准确有效的方
法。本实验以黑穗醋栗果实为实验材料，首次利用
高效液相色谱法对黑穗醋栗果实中的 AsA 含量
进行测定，并对多种 AsA 含量测定方法进行比
较，以期选出一种快速有效的 AsA 含量的测定方
法，为黑穗醋栗中AsA的研究提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
本试验于2011年在东北农业大学进行，试材
为8年生的黑穗醋栗品种布劳德、亚德和露得克，
文章编号：1003-8701(2014)02-0074-04
黑穗醋栗抗坏血酸含量测定方法的比较
李曙雷，霍俊伟*，李芳晓，秦 栋*
(东北农业大学园艺学院，哈尔滨 150030)
摘 要：通过对钼蓝比色法、碘滴定法、2，6-二氯靛酚滴定法和高效液相色谱法等不同的测定抗坏血酸方
法之间回收率、重复性以及精密度的比较，选出最佳的测定方法。结果表明：高效液相色谱法与其他方法相比，
具有较好的线性关系和较高的回收率、精密度以及可重复性。
关键词：黑穗醋栗；抗坏血酸；含量；比较
中图分类号：S663.9 文献标识码：A
Comparing of Methods for Determination of Ascorbic
Acid Content of Black Currant
LI Shu-lei, HUO Jun-wei*, LI Fang-xiao, QIN Dong*
(College of Horticulture, Northeast Agricultural University, Harbin150030,China)
Abstract: The recovery rate, repeatability and accuracy of determining ascorbic acid content by the
molybdenum blue colorimetric method, iodine titration, 2, 6-two chlorine indigo phenol titration and high
performanceliquidchromatographywerecomparedtoselectaoptimalmethod.Theresultsshowedthat:high
performanceliquid chromatographic method has a good linear relationship and high rate of recovery, preci-
sionandrepeatabilitycomparedwithothermethods.
Keywords: Black currant; Ascorbic acid; Content; Comparison
吉林农业科学 2014,39（2）：74-77 Journal of Jilin Agricultural Sciences
DOI:10.16423/j.cnki.1003-8701.2014.02.022
于果实成熟期，在生长健壮的植株上随机采取成
熟果，将同一品种混合后带回实验室进行抗坏血
酸的测定。
仪器：T6 新世纪紫外分光光度计，waters
breezeTM2高效液相色谱仪；实验所用标准品购自
sigma公司。
1.2 方法
1.2.1 钼蓝比色法[6-7]
准确称取5.0 g样品，加入草酸 EDTA 溶液研
磨成匀浆，转入容量瓶定容。取10 mL匀浆液经
3 000 g 离心 10 min 后，取上清液 1 mL 转入具塞
刻度试管中，加草酸 -EDTA4 mL、偏磷酸 - 乙酸
0.5 mL、50% H2SO41.0 mL、5% 钼酸铵2.0 mL，摇
匀后，置于30℃水浴中保温 15 min，在 760 nm波
长下比色，记录吸光度。计算公式如下：
VC含量(mg/100 g·FW)=C·Vt·100%/Vs·FW
其中，C：标准曲线上查的样品中 VC含量
(mg/100 g)；Vt：样品提取液总体积(mL)；Vs：测定
时用样品提取液体积(mL)；FW：鲜重(5.0 g)。
1.2.2 碘滴定法[8-9]
准确称取样品 5.0 g 放入研钵中，加 2%的
HCl研磨至匀浆，转入100 mL容量瓶中。用清洁
干燥二层纱布过滤入干燥的烧杯中，滤液作测定
用。
在 50 mL 的烧杯中，用移液管注入 1%的
KI0.5 mL，0.5%淀粉液 2 mL，以及上述制得的试
液5 mL；再加蒸馏水至总体积 10 mL(加 2.5 mL)。
用 0.001 M 的 KIO3液滴定，滴定至微蓝并且 30 s
不褪色即为终点。计算公式如下：
VC含量(mg/100 g·FW)=V·0.088·b·100/B·a
式中，V：滴定样品所用的 KIO3 毫升数；
0.088：1 毫升 0.001 M 碘酸钾溶液相当的抗坏血
酸的量(mg/mL)；B：滴定时所用样品溶液毫升数；
b：制成样品液的总毫升数；a：样品的克数。
1.2.3 2，6- 二氯靛酚滴定法[10-11]
准确称取样品5.0g放入研钵中，加入2%的草
酸研磨至匀浆，转入100mL容量瓶中定容。取10
mL离心后，加入白陶土吸附色素，过滤后用已经标
定的2，6-二氯靛酚滴定，直至溶液变成粉红色，并
且30 s内不褪色即为滴定终点。同时，用 10 mL
2%的草酸做空白对照试验。计算公式如下：
VC 含量 (mg/100 g·FW)=(V1-V2)·K·V·100/
W·V3
式中，V1：滴定样品液所用去染料体积(mL)；
V2：滴定空白所用去染料体积(mL)；V3：样品测定
时所用滤液体积 (10 mL)；K：1 mL 染料氧化维生
素C的量(mg)；W：称取样品重量(5.0 g)。
1.2.4 高效液相色谱法[12-13]
用标准 AsA 制作标准曲线后，准确称取样品
5.0 g，加草酸后研磨至匀浆，转入 100 mL 容量瓶
中并定容。抽滤，用一次性微孔滤膜打入进样瓶
中，4℃冰箱保存待测。每个样品重复5次，根据标
准曲线，计算出AsA的含量，求平均值。
色谱条件：流动相为 0.1%的草酸，经
0.45μm 滤膜过滤后超声，流速为 1.0 mL/min；检
测波长254 nm，进样10μL；柱温为室温。
2 结果与分析
2.1 回收率
测定方法是否准确、可靠，可以通过回收率来
反映。从表中可以看出，4种方法测得的回收率以
高效液相法为最高，钼蓝比色法次之，碘滴定法和
2，6-二氯靛酚滴定法较低。对数据进行显著性差
异分析，结果显示，用4种方法测定的 3 种黑穗醋
栗果实AsA含量的回收率都达到了显著水平。
2.2 含量对比
从表2中可以看出，4种方法中，用高效液相色
谱法测得的黑穗醋栗果实中 AsA含量最高，布劳德、
亚德、露得克 3个品种的 AsA含量分别为 155.07
mg/100 g、204.15 mg/100 g、279.28 mg/100 g。其次为
钼蓝比色法，分别为 134.79 mg/100 g、185.33 mg/100
g、247.59 mg/100 g。碘滴定法居第三，分别为
119.34mg/100g、169.45 mg/100g、219.37mg/100g。
表 1 4种方法测定的黑穗醋栗果实 VC含量的回收率
测定方法
回收率(%)
布劳德 亚德 露得克
钼蓝比色法 84.29** 87.36** 90.33**
碘滴定法 79.35 91.88 85.47
2,6-二氯靛酚滴定法 81.59** 78.30** 89.52**
高效液相色谱法 98.64** 99.61** 98.79**
注：**：显著水平α=0.05。
表 2 4种方法测定的黑穗醋栗果实 AsA 的含量
测定方法
AsA的含量(mg/100g)
布劳德 亚德 露得克
钼蓝比色法 134.79** 185.33** 247.59**
碘滴定法 119.34 169.45 219.37
2，6-二氯靛酚滴定法 95.33 157.82 186.37
高效液相色谱法 155.07** 204.15** 279.28**
注：**：显著水平α=0.01。
2期 75李曙雷等：黑穗醋栗抗坏血酸含量测定方法的比较
图 1 高效液相色谱法测定 AsA 标准液与样品液
2,6- 二氯靛酚滴定法，分别为 95.33 mg/100 g、
157.82 mg/100 g、186.37 mg/100 g。对数据进行显
著性差异分析，结果表明，4 种方法测得的 3 种黑
穗醋栗果实中 AsA 含量的差异都达到了极显著
水平。
76 39卷吉 林 农 业 科 学
3 讨论与结论
本研究中分别采用了 2，6- 二氯靛酚滴定法、
碘滴定法、钼蓝比色法和高效液相色谱法 4 种方
法，对黑穗醋栗3 个品种布劳德、亚德和露得克果
实中的AsA含量进行了测定。其中，2，6-二氯靛
酚滴定法、碘滴定法和钼蓝比色法都需要 AsA 与
不同的药品反应后，通过间接的方法来测定 AsA
的含量，这就有可能受反应进行程度的影响。而高
效液相色谱法是通过直接检测的方法测定样品中
AsA的含量，与其他3种方法相比，AsA 没有参与
化学反应，减少了中间过程对最后测定结果的影
响。
由于成熟的黑穗醋栗中含有丰富的花青素等
色素，所以成熟的果实呈现浓郁的深紫黑色，AsA
提取液也有较深的颜色，因此在采用 2,6- 二氯靛
酚滴定法和碘滴定法进行测定时，滴定终点的判
断受到很大的影响[15]。虽然在试验中可以采用加
入活性炭或者白陶土的方法进行脱色处理，但是，
加入活性炭进行吸附色素的同时也会吸附 AsA，
会使测定结果偏小[16]。而加入白陶土则不会吸附
AsA，同样白陶土也不会把色素吸附完全，因此依
然存在滴定终点判断不准确的问题，而且还会影
响测定结果。在采用钼蓝比色法时，磷钼酸盐被还
原剂 AsA 还原后，生成亮蓝色的钼蓝络合物，同
样会与深紫红色的样品提取液相互掩盖颜色，缺
点仍然明显。
高效液相色谱法是近年来发展起来的一种新
型的分离分析技术，具有高柱效、高灵敏度、高选
择性、分析速度快和应用范围广的特点，从本试验
中可以看出，高效液相色谱法另一个优点是不受
样品液颜色的影响，即不需要对样品液进行脱色
处理，直接就可以测定出样品中 AsA 的含量，而
且峰形良好(图 1)。从图中可以看出，试样与标准
样的保留时间一致，而且基本没有杂峰。在本方法
中没有特殊试剂，样品处理简单，操作简便，无需
脱色，减少了试验过程中 AsA 的损失，准确度高。
而且结果的重现性好，准确度和回收率高。
由于 AsA 极其不稳定，易分解，因此整个试
验要求操作迅速，防止AsA的氧化。本试验中，除
必要的步骤外，其余时间样品均保存在冰箱里，减
少了AsA的氧化损失，保证了结果的准确性。
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2期 77李曙雷等：黑穗醋栗抗坏血酸含量测定方法的比较
7777777777777777777777777777777777777777777777
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(上接第 70 页)基因进行基因累加，达到广谱抗病的
效果，延缓抗病品种感病化的进程。
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