全 文 ：[饮片炮制]
HPLC测定青皮生品及炮制品中橙皮苷的含量
李先端 , 　顾雪竹 , 　林　生 , 　毛淑杰
(中国中医研究院中药所　北京 100700)
收稿日期:2004-02-02
基金项目:国家科技部“十五”攻关课题(2001BA701A11-04)
作者简介:李先端(1995～ ),副研究员 ,研究方向:中药分析 ,电话 010-64014411-2955。
关键词:青皮生品;炮制品;橙皮苷;HPLC
摘要:目的:建立青皮中主要成分橙皮苷的含量测定方法 , 评价青皮生品 、炮制品质量优劣。方法:样品用甲醇超声提取
30min , 以甲醇-水-醋酸(35∶61∶2)为流动相 ,检测波长 284nm。结果:橙皮苷得到良好分离 , 在 0.202～ 2.424μg 线性关系
良好(r=0.9995),加样回收率为 98%,重现性为 2.3%。结论:本方法简便 、准确 、可靠 , 可用于青皮中橙皮苷的含量测
定。
中图分类号:R927.2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2004)09-724-03
Method study for determination of hesperidin in Citri reticulatae by HPLC
LI Xian-duan , 　GU Xue-zu , 　LIN sheng , 　MAO Shu-jie
(Inst itute of Chinese Materia Medica , China Academy of Tradi tional Chinese Med icine , Beij ing 100700 , China)
KEYWORDS:cit ri reticulatae;processed product;hesperidin;HPLC
ABSTRACT:AIM:To establish a quantitative method fo r determination of hesperidin in Cit ri reticulatae in or-
der to evaluate their quality .METHODS:Sample w as ex tracted w ith methanol by means of sonication for
30min.ODS column was used with methanol-water-acetic acid(35∶61∶2)as mobile phase.Detection w aveleng th
w as at 284nm.RESULTS:Hesperidin in sample solution w as w ell separated.Linearity was good(r=0.9995)in
range of 0.202 ～ 2.424μg.The average recovery was 98%, RSD of repeatability was 2.3%.CONCLUSION:
This method is simple , accurate and reliable , which may well be used for the determination of hesperidin.
　　青皮为常见中药 ,具有疏肝理气 、消积化滞等功
效。用于胸胁胀痛 、疝气 、乳核 、乳痛 、食积腹痛等 。
青皮中含多种成分 ,其中橙皮苷含量最高 ,达 20%
左右 ,经现代药理证明橙皮苷为其主要有效成分 。
目前 ,青皮药材及其中成药制剂的质量评价 ,均以橙
皮苷含量为依据。2000年版中国药典也收载本方
法考察青皮药材质量 。但我们发现样品中成分提取
不完全 ,故本文对这种高效液相法测定青皮饮片中
成分的方法进行方法学考察研究 ,并测定了不同地
区市售及自行炮制的青皮饮片中橙皮苷含量 ,为制
定青皮饮片质量标准提供实验依据 。
1　仪器 、药品和试剂
1.1　仪器 　美国惠普 1100型单泵高效液相色谱
仪 ,紫外检测器 。
1.2　药品
橙皮苷标准品由中国药品生物制品检定所提
供 。
青皮饮片:个青皮 ,产地为杭州 、湖北宜昌及市
售品。四花青皮 ,产地为四川 、浙江 、江西 、福建 。经
鉴定为芸香科植物橘 Citrus reticulata Blanco 及其
栽培变种的干燥幼果或未成熟果实的果皮 。药材均
为正品药材 ,自行切制而成 。炮制品为醋制等 ,有市
售品与自制品。粉碎过 80目筛 ,备用 。
1.3　试剂　甲醇 、醋酸 、水;甲醇为分析纯 、色谱纯;
水为高纯水 。
2　实验部分
2.1　色谱条件 Kromasil-C18(5μg , 4.6mm ×250mm
北京分析仪器厂填充);流动相为甲醇-水-醋酸溶液
(35∶61∶2),流速 1.0mL·min-1;检测波长 284nm ,
柱温 35°C 。
此条件下橙皮苷 、个青皮及四花青皮色谱见
图 1。
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第 26 卷　第 9 期
中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
September 2004
Vol.26　No.9
图 1　橙皮苷 、个青皮和四花青皮 HPLC色谱图
A 橙皮苷对照品　B 个青皮　C 四花青皮
2.2　线性关系考察
2.2.1　标准品溶液制备:精密称取橙皮苷标准品
5.05mg ,置于 25mL 量瓶中。加甲醇溶解 ,并稀释
至刻度备用。
2.2.2　线性关系:分别精密吸取橙皮苷标准品溶液
0.5 , 1.0 , 2.0 ,4.0 , 6.0mL 置 10mL 量瓶中 ,加 50%
甲醇稀释至刻度 。各吸取 20μL 注入液相色谱仪进
行分析 ,以橙皮苷的量为横坐标 ,峰面积为纵坐标作
回归计算 ,得回归方程 Y =1620998X +16357 , r =
0.9995 ,线性范围为 0.202 ～ 2.424μg 。
2.3　样品处理方法考察
2.3.1　不同溶媒提取比较:取供试品 6份 ,1 ,2 号
加甲醇 25mL溶解 , 3 ,4号加 50%甲醇 25mL 溶解 ,
5 、6号加水 25mL 溶解 。超声 30min ,放冷 ,过滤 ,精
密量取续滤液 3mL 置 10mL 量瓶中 , 1 , 2 ,3 ,4 号用
50%甲醇加至刻度 , 5 ,6 号用甲醇加至刻度 。以上
样品 ,摇匀 ,用微膜(0.45μm)滤过 ,取续滤液即得 。
表 1　 不同提取溶媒
样品 溶媒 称样量(mg) 百分含量(%)
青皮
1 甲醇 31.20 13.21
2 甲醇 30.45 13.01
3 50%甲醇 31.10 3.45
4 50%甲醇 30.36 3.98
5 水 30.08 1.71
6 水 30.71 1.84
　　由表 1可知 ,甲醇对橙皮苷的提取能力较强 ,因
此确定以甲醇为溶媒进行提取 。
2.3.2　不同提取方式的比较:取样品 6份 ,1 、2 号
置锥形瓶中 ,加 25mL 甲醇冷浸过夜 ,称重 ,加甲醇
补足重量;3 、4号置锥形瓶中 ,加 25mL 甲醇 ,超声
处理 15min , 放冷过滤 , 精密量取续滤液 3mL 置
10mL 量瓶中 ,用 50%甲醇加至刻度;5 、6号置烧瓶
中 ,回流 30min ,放冷 ,称重 ,甲醇补足重量 。以上样
品用微膜(0.45μm)滤过 ,取续滤液即得。
表 2　 不同提取方式
样品 处理方法 称样量(mg) 百分含量(%)
青皮
1 冷浸 31.12 14.88
2 冷浸 30.56 14.19
3 超声 15min 30.77 14.89
4 超声 15min 30.47 13.87
5 回流 30.73 14.39
6 回流 30.64 14.08
　　由表 2可知 ,冷浸过夜和回流提取能力较强。
但相对于超声处理方法较复杂 ,且含量差别不是较
大 ,因此 ,选取超声处理的方法较为合理。
2.3.3　不同提取时间的比较:取样品 6份 ,置锥形
瓶中 ,超声处理;其中 , 1 、2 号超声处理 15min , 3 、4
号样品超声处理 30min , 5 、6 号样品超声处理
45min。放冷过滤 ,精密量取续滤液 3mL 置 10mL
量瓶中 ,用 50%甲醇加至刻度 ,微膜(0.45μm)滤
过 ,取续滤液即得 。
表 3　 不同提取时间
样品 超声时间 称样量(mg) 百分含量(%)
青皮
1 15 30.77 14.89
2 15 30.47 13.87
3 30 31.20 13.21
4 30 30.45 13.01
5 45 30.95 13.98
6 45 30.18 13.76
　　由表 3可以看出 , 3种不同超声时间对于橙皮
苷含量差异不显著 。为方便起见 ,选择超声 30min
为本实验提取方法 。
2.3.4　精密度考察:取供试品溶液 ,连续进样 5次 ,
测得橙皮苷峰面积 RSD 为 0.42%。
2.3.5　稳定性试验:精密称取个青皮样品 ,按含量
测定方法制备供试品溶液 ,分别于制备后 0 , 1 ,2 ,4 ,
8 , 24h 测定橙皮苷含量 ,结果显示橙皮苷在 24h 内
基本稳定。
2.3.6　重复性试验:精密称取青皮样品 5份 ,按含
量测定方法进行 ,结果橙皮苷含量为 16.3%, RSD
为 1.84%。
2.3.7　回收率试验:采用加样回收法 ,精密称取已
知含量的青皮样品 6份 ,精密加入橙皮苷对照品溶
液(0.0455mg·mL-1),按含量测定方法制备样品溶
液 。计算回收率。结果见表 4 。
2.4　样品制备
2.4.1 　对照品溶液的制备:精密称取橙皮苷
2.57mg ,置25mL量瓶中 ,甲醇加至刻度 。再量取
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表 4　 橙皮苷回收率测定结果
称样量
(mg)
样品中含量
(mg)
加入量
(mg)
测出量
(mg)
检出量
(mg)
回收率
(%)
平均回
收率 RSD
25.10 2.937 2.275 5.126 2.189 96.22
25.86 3.026 2.275 5.334 2.308 101.45
26.27 3.074 2.275 5.344 2.270 99.78
24.27 2.840 2.275 5.069 2.229 97.98
23.11 2.704 2.275 4.884 2.180 95.82
25.65 3.001 2.275 5.202 2.202 96.79
98.0% 2.3%
3mL 置 10mL 量瓶中 , 50%甲醇定容(每 1mL 含橙
皮苷 0.03084mg)。
2.4.2　供试品溶液制备:取不同产地 ,不同品种青
皮样品粉末(过 80目)约 30mg ,精密称定 ,置 50mL
锥形瓶中 ,精密加甲醇 25mL ,超声处理 30min 。放
冷 ,过滤 ,精密量取续滤液 3mL 置 10mL 量瓶中 ,
50%甲醇加至刻度 ,摇匀 ,微膜(0.45μm)滤过 。测
量不同产地青皮生品 、炮制品中橙皮苷的含量 ,结果
见表 5。
3　小结与讨论
3.1　橙皮苷是青皮中的主要成分 ,本实验确定了一
种比较好的测定青皮中橙皮苷的方法 ,选择出最佳
溶媒甲醇和比较方便的超声时间 。本方法简单易
行 ,易于操作 ,通过测定不同产地生品及炮制品中橙
表 5　 各地区生 、制品青皮中橙皮苷含量
样品 橙皮苷含量(%)R SD(%)
个青皮
湖北宜昌生品(药典正品) 21.03 0.67
湖北生品(药典正品) 23.30 0.65
杭州生品(药典正品) 15.61 1.68
天津清炒(市售) 17.91 1.11
天津醋炒(药典正品) 19.64 0.97
天津醋炒(药典正品) 16.30 1.13
江西生品(药典正品) 16.44 0.95
北京盐炒(市售) 21.24 2.13
北京人卫醋炒(药典正品) 17.97 0.51
北京琪景醋炒(药典正品) 25.80 0.14
四花青皮
四川生品(药典正品) 13.38 0.74
四川 炒(市售) 12.85 1.71
四川炒炭(市售) 7.00 1.31
福建生品(药典正品) 11.83 0.42
杭州生品(药典正品) 9.28 0.79
江西生品(药典正品) 13.80 0.31
江西生品(药典正品) 17.38 2.44
广东阳江醋炒(市售) 9.77 0.14
皮苷的含量确定本方法的可行性 。
3.2　通过不同产地青皮样品测定 ,发现含量差别很
大 。个青皮与四花青皮含量也有差别 ,总的规律是
个青皮含量高 ,四花青皮含量普遍低 。本测定给工
艺及质量标准研究打下一定基础 。
原子荧光光谱法测定乌梅饮片中微量砷 、汞的含量
许腊英 , 　毛维伦 , 　李路军 , 　夏　荃 , 　裴彩云
(湖北中医学院　湖北　武汉 430061)
收稿日期:2004-02-09
基金项目:国家十五攻关课题“乌梅饮片炮制规范化研究”编号:2001BA701A11
作者简介:许腊英(1953～ ),女 ,湖北仙桃人 ,副教授,硕士生导师 ,研究方向:中药材 、中成药质量标准的研究 ,电话:027-68889108。
关键词:原子荧光光谱法;砷;汞;痕量检测
摘要:目的:测定净乌梅和乌梅炭中微量砷 、汞的含量。方法:采用原子荧光光谱法。结果:乌梅中砷的含量分别为
0.0597～ 1.0001mg·g-1 , 汞的含量为 0.0198～ 0.0300mg·g -1。结论:本方法操作简便 ,定量准确。
中图分类号:R927.2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2004)09-0726-02
Trace detection of arsenic and mercury in Fructus Mume by atom fluorescene spec-
trum
XU La-ying , 　MAO Wei-lun , 　LI Lu-jun , 　XIA Quan , 　PEI Cai-yun
(Hubei Col lege of TCM , Wuhan 430061 , China)
KEYWORDS:atomic fluorescence spect rometry;arsenic;mercury;t race detection
ABSTRACT:AIM:To determine the content of the trace arsenic and mercury in Fructus M ume and Fructus
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第 26 卷　第 9 期
中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
September 2004
Vol.26　No.9