全 文 ：HPLC同时测定胃力片中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量
徐海燕1， 金 艺2， 张红霞2， 赵怀清2
(1. 沈阳药科大学 高等职业技术学院，辽宁 沈阳 110026;2. 沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 110016)
收稿日期:2009-09-14
作者简介:徐海燕(1983 －)，女，工程师，理学硕士，从事中药质量控制研究。Tel:13840226532 E-mail:haiyan8302@ 163. com
关键词:胃力片;柚皮苷;橙皮苷;新橙皮苷;HPLC
摘要:目的:建立胃力片(半夏、龙胆、枳实等)中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量测定方法。方法:采用 HPLC 法，以
Diamonsil C18柱(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)分离，乙腈-1 %冰醋酸溶液(19 ∶ 81，v /v)为流动相洗脱，流速:1. 0 mL /min，
检测波长:283 nm。结果:柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷分别在 6. 0 ～ 60. 0 μg /mL、2. 24 ～ 22. 4 μg /mL和 10. 2 ～ 102. 0 μg /
mL范围内质量浓度与峰面积呈良好的线性关系，相关系数分别为 0. 999 7、0. 999 7 和 0. 999 3，平均回收率分别为
100. 2%(RSD = 1. 5%，n = 9)、98. 8% (RSD = 2. 9%，n = 9)和 97. 1%(RSD = 0. 86%，n = 9)。结论:本法重复性好、灵
敏度高、定量准确，可作为胃力片质量控制方法之一。
中图分类号:R927. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2010)08-1355-03
Determination of narigin，hesperidin and neohesperidin in Weili Tablet by
HPLC
XU Hai-yan1， JIN Yi2， ZHANG Hong-xia2， ZHAO Huai-qing2
(1. School of Vocation and Technology，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China;2. School of Pharmacy，Shenyang Pharmaceuti-
cal University，Shenyang 110016，China)
KEY WORDS:Weili Tablet;narigin;hesperidine;neohesperidine;HPLC
ABSTRACT:AIM:To develop an HPLC method for determining narigin，hesperidin and neohesperidin in Weili
Tablet(Rhizoma Pinelliae，Radix et Rhizoma Gentianae，Fructus Aurantii immaturus etc.). METHODS:The
analysis was carried out with a Diamonsil C18(4. 6 mm ×250 mm，5 μm)column and the mobile phase of acetoni-
trile-1% glacical acetic acid solution(19:81，v /v). The flow rate was 1. 0 mL /min and column temperature was 30
℃ . The detection wavelength was set at 283 nm. RESULTS:The calibration curve was linear within the range of
6. 0-60. 0 μg /mL，2. 24-22. 4 μg /mL and 10. 2-102. 0 μg /mL for narigin，hesperidin and neohesperidin，respec-
tively. The average recoveries were 100. 2%，98. 8% and 97. 1% for narigin，hesperidine and neohesperidine，re-
spectively. CONCLUSION:The method is reproducible，sensitive and accurate for determination of narigin，hes-
peridin and neohesperidin in Weili Tablet.
胃力片，根据清代太和医室秘方“胆胃通降丹”
研制而成，由半夏、龙胆、枳实、大黄、木香五味药材
组成，具有行气止痛、和胃利胆、消积导滞、通腑降浊
之功效，用于饮食不节、食欲不振、大便秘结，急慢性
胃炎、胆囊炎等症的治疗［1-2］。作者曾建立过同时测
定柚皮苷和橙皮苷的 HPLC 法［3］，用于复方的质量
控制。近来，枳实化学成分和药理作用［4-5］研究表
明，新橙皮苷亦是一种作用于胃肠道平滑肌的黄酮
类化合物，化学结构与柚皮苷和橙皮苷相近，含量高
于柚皮苷和橙皮苷。为了全面、客观地评价胃力片
的质量，本实验在前期研究的基础上，建立了同时测
定复方中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷 3 种黄酮化合
物含量的 HPLC法。
1 仪器与材料
LC-10ATvp泵、SPD-10Avp型紫外检测器(日本
岛津公司)，2010 色谱数据工作站(浙江大学)，AT-
130 型柱温箱(大连中汇达科学仪器有限公司)。
BS124S电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限
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公司)，KQ-50B 型超声波清洗器(昆山市超声仪器
有限公司)。
柚皮苷对照品、橙皮苷对照品、新橙皮苷对照品
(中国药品生物制品检定所)，胃力片(西安某制药
有限公司)，乙腈为色谱纯(天津市康科德科技有限
公司)，甲醇为分析纯(天津大茂化学试剂厂)，水为
自制重蒸水。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
色谱柱为 Diamonsil C18柱(250 mm × 4. 6 mm，
5 μm)，流动相为乙腈-1%冰醋酸溶液(19:81，v /
v)，流速为 1. 0 mL /min，检测波长:283 nm，柱温:30
℃，进样量:20 μL。
2. 2 系统适用性
在上述色谱条件下，柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷
的理论塔板数均不低于 2 000，柚皮苷、橙皮苷和新
橙皮苷色谱峰与相邻色谱峰的分离度均大于 1. 5，
对称因子在 0. 95 ～ 1. 05 之间。阴性对照对样品测
定无干扰。结果见图 1。
图 1 测定柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷色谱图
A. 对照品 B. 样品 C. 阴性 1. 柚皮苷
2. 橙皮苷 3. 新橙皮苷
Fig. 1 Chromatograms of narigin，hesperidin and
neohesperidine in Weili Tablet
A. reference substance B. sample C. blank sapmple
1. narigin 2. hesperidine 3. neohesperidine
2. 3 溶液的配制
2. 3. 1 对照品溶液的配制 分别称取柚皮苷、橙皮
苷和新橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每
1 mL分别含柚皮苷 0. 300 mg、橙皮苷 0. 112 mg 和
新橙皮苷 0. 510 mg 的对照贮备溶液。精密量取上
述对照品贮备液 1. 0 mL置 10 mL量瓶中，用甲醇稀
释至刻度，摇匀，即得(每 1 mL 含柚皮苷 30. 0 μg、
橙皮苷 11. 2 μg和新橙皮苷 51. 0 μg)。
2. 3. 2 供试品溶液的配制 取胃力片 10 片，去除
包衣，研成细粉。取约 0. 1 g 细粉，精密称定，置 50
mL 量瓶中，加入 40 mL甲醇，超声 30 min，用甲醇稀
释至刻度，过滤，滤液经微孔滤膜(0. 45 μm)过滤
后，取续滤液，即得。
2. 3. 3 阴性对照溶液配制 按处方比例称取除枳
实以外的其余药味，按制备工艺制成缺枳实的阴性
样品;按 2. 3. 2 项供试品溶液的配制方法操作，制成
阴性对照溶液。
2. 4 线性关系考察
依次精密量取各对照品贮备液 0. 2、0. 4、0. 8、
1. 2、1. 6 和 2. 0 mL，分别置于 10 mL量瓶中，用甲醇
稀释至刻度，摇匀，制成系列浓度的混合标准溶液。
分别取上述标准溶液各 20 μL，按上述色谱条件进
样分析。以对照品浓度 X(μg /mL)为横坐标，峰面
积 Y 为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，回
归方程分别为:
柚皮苷 Y = 3. 352 × 104 X － 6. 029 × 102(r =
0. 999 7，n = 6)
橙皮苷 Y = 1. 515 × 104 X － 35. 12(r =
0. 999 7，n = 6)
新橙皮苷 Y = 2. 981 × 104 X + 1. 809 × 102(r
= 0. 999 3，n = 6)
结果表明，柚皮苷在 6. 0 ～ 60. 0 μg /mL (r =
0. 999 7)、橙皮苷在 2. 24 ～ 22. 4 μg /mL (r =
0. 999 7)和新橙皮苷在 10. 2 ～ 102. 0 μg /mL (r =
0. 999 3)浓度范围内，Y与 X具有良好的线性关系。
2. 5 仪器精密度
取对照品溶液，在上述色谱条件下连续进样 6
次，计算柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷色谱峰面积的
RSD分别为 0. 68 %，0. 31 %和 1. 2 %(n = 6)。
2. 6 方法重复性
取批号为 050801 的胃力片样品，按 2. 3. 2 项下
供试品溶液的配制方法操作，平行制备 5 份样品，在
上述色谱条件下进行分析测定，柚皮苷、橙皮苷、新
橙皮苷含量的相对标准偏差 RSD 分别为 2. 2 %、
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2. 8 %和 2. 1 % (n = 5)。
2. 7 稳定性
取批号为 050801 的同一供试品溶液，室温静
置，分别于 0、2、4、8、10 和 12 h 按上述色谱条件测
定，测得柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷色谱峰面积的
RSD分别为 2. 5%，2. 0%和 2. 3%(n = 6)，结果表
明供试品溶液室温放置 12 h稳定，
2. 8 加样回收率
采用加样回收法，精密称取已知含量的样品 9
份，每份约 0. 05 g，按低、中、高 3 种浓度分别加入对
照品贮备液，每一浓度 3 份，按上述色谱条件测定。
柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷平均回收率分别为
100. 2%(RSD = 1. 5%，n = 9)、98. 8% (RSD =
2. 9%，n = 9)和 97. 1%(RSD =0. 86%，n = 9)。结
果见表 1。
表 1 胃力片中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷
加样回收率结果(n =9)
Tab. 1 Recoveries of naringin，hesperidin and
neohesperidin in Weili Tablets(n =9)
组分
原有量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD
/%
柚皮苷
0. 633
0. 649
0. 662
0. 360
0. 750
1. 140
0. 991
1. 414
1. 793
99. 5
101. 9
99. 2
100. 2 1. 5
橙皮苷
0. 249
0. 256
0. 261
0. 134
0. 269
0. 403
0. 377
0. 528
0. 664
95. 5
101. 0
100. 1
98. 8 2. 9
新橙皮苷
1. 369
1. 403
1. 431
0. 663
1. 326
1. 989
2. 005
2. 700
3. 367
96. 2
97. 8
97. 4
97. 1 0. 86
2. 9 样品测定
取 3 批胃力片，按 2. 3. 2 项下供试品溶液的配
制方法操作制得供试品溶液，在上述色谱条件下分
析测定，外标一点法计算柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷
含量，结果见表 2。
表 2 胃力片中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量
测定结果(n =3)
Tab. 2 Content of narigin，hesperidin and
neohesperidin in Weili Tablets(n =3)
批号
柚皮苷
含量 /
(mg /片)
RSD
/%
橙皮苷
含量 /
(mg /片)
RSD
/%
新橙皮苷
含量 /
(mg /片)
RSD
/%
050801 7. 62 2. 1 3. 00 1. 8 16. 1 1. 2
050901 8. 92 0. 62 3. 46 1. 4 19. 0 1. 9
050902 8. 49 0. 86 3. 32 1. 2 18. 1 2. 8
3 讨论
近代药理研究表明，新橙皮苷是枳实中含有的
一种黄酮类化合物，化学结构与柚皮苷、橙皮苷相
近，含量高于柚皮苷和橙皮苷，可作用于胃肠道平滑
肌。对其含量进行测定，可为胃力片的质量控制提
供依据。
同时测定胃力片中柚皮苷和橙皮苷的 HPLC
法，检测波长为 283 nm［3］，新橙皮苷全扫描结果表
明，其在 283 nm附近亦有最大吸收，因此，本实验的
检测波长仍选为 283 nm。
同时测定胃力片中柚皮苷和橙皮苷的 HPLC
法，已对样品溶液的制备方法进行考察［3］，又新橙
皮苷的化学结构和柚皮苷、橙皮苷相似［4］，因此，本
实验样品溶液的制备方法仍以甲醇为提取溶剂，超
声 30 min，未再进行考察。
本实验曾采用不同比例的甲醇-1%冰醋酸水溶
液［3］，同时测定复方中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷 3
种黄酮类化合物，结果，3 组分的分离达不到要求。
根据文献［6-8］，考察不同的流动相系统，结果，以乙
腈-1%冰醋酸水溶液(19 ∶ 81，v /v)为流动相，3 种
黄酮类化合物均能达到较好的分离，且分析时间适
中。
本实验对不同色谱柱(柱长分别为 150 mm 和
250 mm)进行了考察，结果，以柱长 250 mm 的色谱
柱对 3 种黄酮类化合物的分离效果佳。
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