全 文 ：·中药及天然药物 ·
驱虫斑鸠菊高效液相色谱指纹图谱分离条件的优化
刘晓东1 ,闫　明2＊ ,张兰兰1 ,霍仕霞1(1.石河子大学药学院 , 新疆 石河子 832003;2.新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究
所 ,新疆 乌鲁木齐 830049)
摘要:目的　建立驱虫斑鸠菊高效液相色谱法指纹图谱(H PLC-FPs)分离的优化条件。方法　采用 HPLC 法 , 用 C18柱(150 mm
×4.6 mm , 5μm), 流动相为乙腈-0.5%磷酸水溶液 ,检测波长为 220 nm ,柱温为 30 ℃ , 考察驱虫斑鸠菊水提取物在不同梯度洗
脱条件下的分离情况。结果　优选出的驱虫斑鸠菊 H PLC-FPs 分离条件 ,可使驱虫斑鸠菊水提物中各组分达到较佳分离 , 稳定
性 、精密度 、重现性好。结论　该色谱分离条件可用于建立驱虫斑鸠菊药材 HPLC-FPs 的分离条件。
关键词:驱虫斑鸠菊;高效液相色谱;指纹图谱;分离条件
中图分类号:R927.2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1004-2407(2009)02-0101-03
Optimization of separation conditions of fingerprint for Vernonia anthelmintica
(L.)Willd by high performance liquid chromatography
LIU Xiaodong1 , YAN Ming 2＊ , Zhang Lanlan1 , H uo Shixia1(1.Pharmacy College of Shihezi University , Shihezi 832003 , China;
2.X inJ iang Institute of T rad itional Uighur Medicine , Urumqi 830049 , China)
Abstract:Objective To optimize the sepa ration conditions o f fing erprint for Vernonia anthelmintica(L.)Willd by high perfo rmance
liquid chromatog raphy and lay a foundation of studies on its finge rprint by high pe rformance liquid chr omatog raphy.Methods A
reve rsed-pha se high perfo rmance liquid chromat-ogr aphic method w as adopted.The samples w ere ex tracted by aqueous so lution
and separ ated by a linear g radient elution on a C18 co lumn(150 mm×4.6 mm , 5 μm), with the acetonitrile-0.5% pho sphoric acid
so lution as mobile phase.The eluent was detected at UV 220 nm and the co lumn w as maintained a t 30 ℃.Du-ring the linea r gr a-
dient elution pr og ram , the volume frac tion o f acetonitrile in mobile phase changed as follow s:0-20 min , fr om 5% to13%;20-80
min , fr om 13% to 25%;the flow rate was 1 m L·min -1 .Results The separation conditions described above achieved good results
in the a spects o f separa tion effect , stability , sensitivity , and reproducibility.Conclusion The optimum separa tion conditions of fin-
gerprint w ould be useful for establishing the method of finge rprint for Vernonia anthelmintica(L.)Willd by high per formance liq-
uid chroma to g raphy.
Key words:Vernonia anthelmintica(L.)Willd;high perfo rmance liquid chr omatog raphy;fingerprint;separation conditions of chro-
matog ram
基金项目:国家科技支撑计划项目(No.2007BAI30B01 ,
2007BAI48B06)
作者简介:刘晓东 ,男 , 硕士研究生
＊通讯作者:闫明 ,男 , 研究员 ,硕士生导师
　　以高效液相色谱法指纹图谱(HPLC-FPs)来评
价中药材及其制剂的质量已成为我国中药研究的热
点之一 ,但优选适宜的分离条件一直是色谱分析和中
药材及其制剂分析中最困难的步骤之一 。因此 ,探求
色谱保留值的变化规律 ,从而实现色谱条件的优化一
直是色谱指纹图谱评价中药材及其制剂质量的首要
任务[ 1] 。驱虫斑鸠菊为新疆维吾尔医治疗白癜风的
常用药材 ,其化学成分复杂 ,性质各异 ,许多药效活性
成分尚不明确。因此 ,笔者采用高效液相色谱法 ,通
过考察不同色谱条件下的分离效果 ,以得到尽可能多
的指纹峰 ,优选驱虫斑鸠菊 HPLC-FPs的分离条件 ,
从而为驱虫斑鸠菊药材入血成分的研究 、物质作用基
础研究及以后的药效学研究奠定基础。
1　材料与方法
1.1　材料与仪器
1.1.1　材料　驱虫斑鸠菊购于新疆维吾尔自治区维
吾尔医医院制剂室 ,经新疆维吾尔自治区药物研究所
张彦福研究员鉴定为菊科植物驱虫斑鸠菊 Vernonia
anthelm intica(L.)Willd 的干燥成熟果实;甲醇 、乙
腈为色谱纯;水为超纯水;其它试剂均为分析纯 。
1.1.2　仪器　美国Wate rs 1525二元泵高效液相色
谱仪 ,Waters 2996二极管阵列检测器 , Empowe r 数
据采集系统;Milli-Q 超纯水纯化系统(18 MΨ, M il-
lipore公司);SGT7200HBT 型超声清洗器(上海冠
特超声仪器有限公司);BS110S 电子天平(北京赛多
利斯有限公司);TGL-16B 型离心机(上海安亭科学
仪器厂制造)。
1.2　方法　文献报道较多的是驱虫斑鸠菊黄酮类有效
部位 ,本研究根据药材所含成分性质选择二元流动相的
溶剂组成 、检测波长;通过比较不同流动相系统下的色
谱峰峰形及分离效果;利用梯度洗脱程序对色谱分离不
佳的部分进行优化 ,从而使各组分达到最有效的分离。
2　结果与讨论
2.1　色谱条件的选择
2.1.1　色谱模式及色谱柱的选择　中药成分复杂 ,
含有从弱极性 、中等极性到强极性的各类化合物。液
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相色谱具有分离模式多种多样 、应用面广 、分离效率
高等优点 。在液相色谱中 ,反相液相色谱以其操作简
单 、数据重现性好而被广泛应用。通常样品能够采用
反相液相色谱分离的应尽量使用反相色谱模式[ 2] 。
黄酮类化合物在 HPLC 分析中通常采用的是
ODS 柱 。因此 , 本研究采用反相 HPLC 模式和
S him-pack VP-ODS C18柱 。
2.1.2　流动相的选择　流动相组成的改变 ,既可以
调节保留时间 ,也可以调节选择性 。采用高效液相色
谱法测定中药及其制剂中黄酮类成分的文献报道较
多[ 3 , 4] ,驱虫斑鸠菊中含有黄酮类成分 ,多酚羟基或
含有羧基 ,因此 ,驱虫斑鸠菊的主要有效成分多具有
一定的极性和酸性 ,容易解离出质子 ,所以在流动相
中添加适当比例的磷酸抑制解离以获得稳定的色谱
峰。笔者比较甲醇-水 、乙腈-水 、甲醇-0.5%磷酸水溶
液 、乙腈-0.5%磷酸水溶液等流动相的分离效果 ,结果
表明 ,采用乙腈体系作为流动相 ,可以避免甲醇体系对
低波长吸收化合物检测的影响[ 2] ,同一条件下乙腈较
甲醇对驱虫斑鸠菊总提取物的分离效果较佳。因此 ,
选择乙腈和磷酸作为基本的流动相单元(见图 1)。
图 1　不同流动相系统下最优的 HPLC-FPs
A:甲醇-水(0 ～ 80 min , 甲醇体积分数 20%～ 50%;流量:
1 mL ·min -1);
B:乙腈-水(0 ～ 80 min , 乙腈体积分数 10%～ 40%;流量:
1 mL ·min -1);
C:乙腈-0.5%磷酸(0 ～ 20 min , 乙腈体积分数 5%～ 13%;
20 ～ 80 min , 乙腈体积分数 13%～ 25%;流量:1 mL·min-1)
2.1.3　检测波长的选择　驱虫斑鸠菊成分的最大吸
收波长在 205 , 220 ,242 ,280 ,289和356 nm等处吸收
峰较多 , 在 205 nm 处 ,色谱峰基线漂移较严重 ,在
220 nm 处吸收较多 ,且基线较平稳 ,因此 ,选择 220
nm 为检测波长 。
2.1.4　柱温的选择　在同一条件下考察 20 , 25 , 30 ,
35和 40 ℃柱温对各组分的影响 ,结果温度较低则色
谱柱压力较大 ,故以 30 ℃为最佳。
2.2　供试品溶液的制备
2.2.1　提取溶剂的选择　本文对比研究了驱虫斑鸠
菊醇提取物 , 半仿生提取物(最优条件为:三煎用
pH6.0 ,6.5和 8.0 的体积分数 80%乙醇;煎煮时间
为1 ,0.5和 0.5 h)及水提物高效液相色谱指纹图谱 ,
通过考察色谱峰形 、出峰数目 、分离度及各主要共有峰
的峰面积大小等优化指标 ,确定用水作为提取溶剂。
2.2.2　供试品溶液的制备　称取驱虫斑鸠菊药材 4
g(过 30目筛),精密称定 ,加水适量 ,加热回流提取 3
次(3次加水量依次为药材的 10 ,8和 8倍),3次煎煮
时间依次为 2 , 1和 1 h;将各煎煮液过滤 ,合并上清
液 ,置 100 mL量瓶中 ,用提取溶剂定容至 100 mL ,制
得样品溶液(每 1 mL 相当于原药材 0.04 g)。
精密吸取上述所制得的样品溶液 5 mL ,置 10
mL 量瓶中 ,用提取溶剂定容 ,溶液过 0.45 μm 微孔
滤膜 ,滤液进行 HPLC 分析(见图 2)。
图 2　水提物的 HPLC-FPs
乙腈-0.5%磷酸(0～ 20 min , 乙腈体积分数 5%～ 13%;
20～ 80 min , 乙腈体积分数 13%～ 25%;流量:1 m L·min-1)
2.3　洗脱程序的优化　由于等度洗脱很难将驱虫斑
鸠菊总提取物中不同极性的组分均在较佳容量因子
的范围内洗脱 ,故采用梯度洗脱进行分离 。经试验 ,
得到以下初始程序:0 ～ 70 min ,乙腈的体积分数由
10%线性增至 32%;流速为 1 mL ·min-1 ;进样量为
10μL。其色谱图在 5 ～ 10 min之间的色谱峰未达到
基线分离 ,色谱峰分布较密 ,而在 10 ～ 22 min之间色
谱峰较少 ,各组分主要分布在 5 ～ 10 min 、22 ～ 40 m in
之间(图 3A),且 28 与 29 min的主要色谱峰没有达
到基线分离 ,说明 5 ～ 10 m in及 22 ～ 40 min 之间洗
脱溶剂强度较强 ,即乙腈的体积分数大于 13%时 ,极
性较大的组分没有达到基线分离而被快速的洗脱出
来 ,因此 ,要适当的改变初始洗脱溶剂的强度 , 减小
10 min之前洗脱溶剂的强度 ,适当增加 10 min 之前
的梯度陡度 ,使 t R小于 10 min 的色谱峰顺延;在 10
～ 22 min之间色谱峰较少 ,说明这段时间之间洗脱
溶剂强度较弱 ,只有少数组分被洗脱出来 。因此 ,在
保持初始洗脱溶剂强度不变的情况下 ,增加 22 m in
之前洗脱溶剂的强度 ,使 t R大于 22 min 的峰提前 ,从
而改善峰分布。图3B为上述程序改变为0 ～ 20 min ,乙
腈的体积分数由 5%线性增至13%;20 ～ 80 min ,乙腈的
体积分数由 13%线性增至 25%;流速为 1 mL·min-1;
进样量为 10μL 的色谱图。从图 3B可知 ,通过减小前
段时间的洗脱强度 ,同时降低10 ～ 22 min的梯度陡度使
溶剂洗脱强度变化减缓 ,可达到改善峰分布的效果。
上述程序经稳定性 、精密度 、重现性试验考察 ,结
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果表明驱虫斑鸠菊水提取物的各峰具有较佳的稳定
性 、精密度 、重现性(数据略)。
图 3　水提物的优化程序
A:乙腈-0.5%磷酸(0 ～ 70 min , 乙腈体积分数 10%～ 32%;
流量:1 mL·min-1 .);
B:乙腈-0.5%磷酸(0 ～ 20 min , 乙腈体积分数 5%～ 13%;
20 ～ 80 min , 乙腈体积分数 13%～ 25%;流量:1 mL·min-1)
3　讨论　
在进行梯度洗脱程序优化时 ,曾调整流速 ,改变
程序中的柱温 ,效果均不理想 。因此 ,在优化 HPLC-
FPs的梯度洗脱程序时 ,应主要调整流动相的组成 、
洗脱溶剂的强度 、梯度陡度 。在上述流动相系统中 ,
组分的疏水性越强 ,与疏水性 C18键合固定相作用就
越强 ,需在强度较大的洗脱溶剂下洗脱。经考察 160
min内的指纹图谱可知 ,本品中的组分均在 80 min
内出峰 ,而 80 min后无色谱峰。经试验 ,优化程序下
的色谱分离条件可用来评价不同品种的驱虫斑鸠菊
药材及其相关药材指纹图谱间的质量差异 ,其质量差
异主要表现在指纹峰的数量和峰面积比值上 。
参考文献:
[ 1] 　徐雄良 ,张志荣 ,黄园.大黄高效液相色谱法指纹图谱分
离条件的优化[ J] .四川大学学报(医学版), 2004 , 35
(4):559-562.
[ 2] 　张岩 , 薛兴亚 ,徐青 , 等.葛根提取物高效液相色谱分析
方法的优化[ J] .色谱 , 2006 , 24(4):354-358.
[ 3] 　王晓辉 , 刘涛 ,李清 , 等.高效液相色谱法同时测定黄芪
中的五种异黄酮类成分[ J] .色谱 , 2006 , 24(5):486-488.
[ 4] 　徐青 ,王龙星 ,张曦 ,等.黄芪中黄酮类组分的高效液相色谱
分离条件的快速优化[ J] .色谱, 2005 , 23(11):630-632
(收稿日期:2008-11-24)
贵州省兴义市药用植物资源研究
李云超 , 何顺志＊(贵阳中医学院药学系 , 贵州 贵阳
550002)
摘要:目的　研究贵州省兴义市药用植物资源的种类及其分
布。方法　野外考察 、标本采集 、分类鉴定 、资料考证。结果
贵州省兴义市现有药用植物 1 461种 , 其中 101 种为贵州药用
新资源 、6 种为贵州特有药用植物。 结论　兴义市药用植物
资源丰富 ,部分种类具有较高的药用和科研价值。
关键词:贵州;兴义;药用植物;资源;调查
中图分类号:R282　　　文献标识码:A　　　
文章编号:1004-2407(2009)02-0103-04
自 1985 年贵州省中药资源普查以来 ,各县(市)
未进行系统的再调研工作。近 10年来 ,笔者在对小
檗科 、毛茛科 、绞股蓝属等专科专属药用植物资源调
查研究中发现[ 1-9] ,贵州西南部的兴义市药用植物资
源十分丰富 。在多项基金的资助下 ,笔者对兴义市药
用植物资源的种类和分布进行了调查研究 ,以期为兴
义市中草药资源利用及可持续发展提供科学依据。
基金项目:国家自然科学基金项目(30660224);教育部科学
技术研究重点项目(206131)
作者简介:李云超 ,男 , 硕士研究生
＊通讯作者:何顺志 ,男 , 研究员 ,硕士生导师
1　自然概况
兴义市位于贵州省西南部 ,为滇 、黔 、桂三省(区)
交接处 ,东经104°31′～ 105°11′,北纬24°37′～ 25°23′,全
市总面积2 915 km2 。兴义市位于云贵高原向广西低
山丘陵过渡地带 ,地势西北高东南低;属亚热带黔西
南温暖春干气候 ,热量条件好 ,光照充足 ,夏无酷暑 ,
冬无严寒 ,年平均气温16.1 ℃;土壤有黄壤 、红壤 、石
灰土 、紫色土等 6个土类;地带性植被属中亚热带干
湿性常绿阔叶林 ,南部河谷低丘为河谷季雨林 ,中北
部山地呈现为稀疏的云南松林或为灌丛草坡;石灰岩
地区为较大面积的灌丛或藤刺灌丛 。
2　药用植物资源
根据笔者野外调查和参考有关资料[ 10] ,兴义市有药
用植物 1 461种(包括变种),隶属于215科787属。
2.1 　药用藻类 2 科 2 属 3 种 　有扭曲水绵
Spirogy ra intorta Jao 、光洁水绵 Spirogy ra nitida
(Dillw .)Link 、膨胀丽藻 Nitella expansa T .F.Allen。
2.2　药用真菌类 12科 23 属 29 种 　主要有云芝
Coriolus versicolor (L.ex Fr.) Quél.、 紫 芝
Ganoderma sinense Zhao ,Xu et Zhang 、 雷 丸
Polyporus my lit tae Cooke et M ass.、 猪 苓
Polyporus umbel latus (Pers.)Fr.、香菇 Lentinus
edodes (Berk.)Sing.、竹荪 Dictyophora indusiata
(Vent.et Per.)Fisch.等 。
2.3 　药用地衣类 5 科 5 属 7 种 　主要有石耳
Umbil icaria esculenta (Miyoshi)M inks 、 长松萝
Usnea longissima Ach.等 。
2.4　药用苔藓类 4 科 4 属 4 种 　主要有石地钱
Reboulia hemisphaerica (L .) Raddi.、 地 钱
Marchantia polymorpha L .等。
2.5　药用蕨类植物 36科 71属 133种　主要有垫状
卷柏 Selaginel la pulv inata (Hook.et Grev.)Ma-
xim.、柄叶 瓶 尔小 草 Ophiog lossum pet iolatum
Hook.、狭叶瓶尔小草 O.thermale Kom.、海金沙
Lygodium japonicum (Thunb.) Sw .、铁 线 蕨
Adiantum capi l lus-veneris L.、 长 柄 车 前 蕨
103西北药学杂志　2009 年 4 月　第 24 卷　第 2 期