全 文 ：安徽农学通报，Anhui Agri.Sci.Bull.2016，22（16）
华肖菝葜组织培养技术的初步研究
弓 强 1 王贵军 2
（1山西中医学院，山西晋中 030619；2阳曲县农业委员会，山西太原 030100）
摘 要：为了更好地开发利用华肖菝葜，该研究以华肖菝葜幼嫩带芽茎段为外植体，以MS为基本培养基，研
究了不同植物激素组合对华肖菝葜组织培养的影响。试验结果表明：外植体的最佳消毒方式为20%次氯酸
钠消毒 20min，最佳启动培养基为MS+6-BA6.0mg/L+NAA0.15mg/L+活性炭 1 000mg/L，在启动培养基上培养
25d左右诱导率达到76%。
关键词：华肖菝葜；组织培养；植物激素；外植体
中图分类号 R282.71 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）16-0027-03
Tissue Culture Technology of Heterosmilax chinensis Wang
Gong Qiang1 et al.
（1Shanxi University of Traditional Chinese Medicine，Jinzhong 030619，China）
Abstract：The aim of the research was to develop and utilize Heterosmilax chinensis Wang better. Taking the young
stem of Heterosmilax chinensis Wang as the explant，using the MS as the basic culture medium，the effects of hor⁃
mone combination on callus formation and plantlet regeneration of Heterosmilax chinensis Wang were studied in this
paper. The results indicated that：The optimum disinfection method of explatrts was disinfecting with 20% sodium hy⁃
pochlorite for 20 min.The optimum initial medium was MS+ 6-BA 6.0mg/L+NAA 0.15mg/L+activated carbon 1
000mg/L，with the induction rate being reach 76%，when cultivated in initial medium for 25d.
Key words：Heterosmilax chinensisWang；Tissue culture；Plant hormone；Explant
华肖菝葜为百合科华肖菝葜（Heterosmilax chinensis
Wang）或短柱肖菝葜（Heterosmilax yunnanensis Gagneb）
的攀援灌木，主要产地为四川中部至东南部、云南东南
部、广西西南部和广东北部。生于海拔300～2 100m的山
谷密林中或灌丛下［1］。白土苓为华肖菝葜或短柱肖菝葜
的干燥块茎，收载于《中华本草》，其味甘、淡，性平，具有
清热利湿、解毒消肿等作用，用于小便淋湿、白浊、带下、
痈肿消毒等症［2］。白土苓用药历史长，与中国药典收载的
土茯苓不仅药名相近，而且历代本草常以同药名土茯苓
记载。《本草纲目》［3］一谓“土茯苓有赤白2种，入药用白者
良”，所称白者为白土茯苓，赤者为土茯苓。在我国很多
地区常把白土茯苓作土茯苓使用，混用历史较悠长，市场
上药材品种混乱，真伪难辨别［4］。最新研究表明，华肖菝
葜提取物中含有β-谷甾醇、棕榈酸和硬脂酸［5-6］，在利尿、
抗炎、抑菌、解毒、肿瘤抑制等方面具有显著作用［7］。
华肖菝葜入药部位根的生长年限较长，资源更新较
慢。近年来，这一野生资源由于人们的过度挖掘，日益减
少，加之其花序小，单性异株，种子难于采收［8-9］。华肖菝
葜的繁殖主要依靠自然分蘖或实生繁殖，但分蘖能力及
种子发芽率低，扦插或嫁接较难成活［10］。为了更好地开
发利用保护这一野生资源，笔者对华肖菝葜的组织培养
技术进行了初步研究。采用组织培养，可以快速获得大
量无菌苗，对保护这一野生资源具有重要意义。
1 材料与方法
1.1 材料 试验用的华肖菝葜外植体取自上午09：00—
11：00当年萌生的健壮带芽茎段。试剂：蔗糖、琼脂、酒
精、次氯酸钠、6-BA、NAA、HCl、活性炭，以上试剂均为分
析纯。
1.2 试验方法
1.2.1 培养基配制 以MS培养基为基本培养基，根据
实验需要添加其他物质（6-BA、NAA、活性炭等），定容
至1 000mL，用1mol/LNaOH调节培养基pH至5.8。最后培
养基中加9g的琼脂和30g蔗糖，在121℃高压灭菌20min，
备用。在配制母液时，把Ca2+与SO42-、Ca2+与PO43-放在不同
的母液中，以免发生沉淀。各种母液配完后，分别用玻璃
瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，
保存在冰箱的冷藏室中。在使用提前配制的母液时，应
在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发
作者简介：弓强（1986—），男，山西壶关人，硕士，助教，研究方向：药用植物病毒检测。 收稿日期：2016-07-02
27
DOI:10.16377/j.cnki.issn1007-7731.2016.16.011
安徽农学通报，Anhui Agri.Sci.Bull.2016，22（16）
现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种
母液，重新进行配制。
1.2.2 外植体消毒 取当年萌生的华肖菝葜带芽茎段，
剪去残伤及叶片，先用软毛刷蘸洗衣粉水轻刷干净，然后
用流水冲洗30min后，再用无菌水冲洗3次。在超净工作
台上用70%的酒精浸泡15s，用20%的次氯酸钠溶液消毒，
采用5个不同的时间分别处理5、10、15、20、25min。消毒
好的外植体用无菌水冲洗5次，用消毒滤纸吸干水分，备
用。在持续灭菌时间内定时用玻璃棒轻轻搅动，以促进
植物材料各部分与消毒液充分接触，驱除气泡，使灭菌
彻底。
1.2.3 启动培养 消毒好的外植体用无菌水冲洗5次，用
消毒滤纸吸干水分，接种到芽诱导培养基（A0-A12）上。
培养基A0～A12植物生长调节剂为6-BA、NAA，如表1所
示。30d后统计萌芽数量，计算诱导率。
表1 不同培养基6-BA、NAA的配比
培养基序号
A0
A1
A2
A3
A4
A5
A6
A7
A8
A9
A10
A11
A12
6-BA（mg/L）
0
2
4
6
2
4
6
2
4
6
2
4
6
IAA（mg/L）
0
0.05
0.05
0.05
0.1
0.1
0.1
0.15
0.15
0.15
0.2
0.2
0.2
1.2.4 培养条件 培养温度为25～28℃，光照时间14h/d，
光照强度2 000～2 500lx［11］。
2 结果与分析
2.1 外植体最佳消毒时间的确定 灭菌剂的要求是灭菌
效果好，从植物组织上清除容易，对人体无害，无环境污
染。70%～75%的酒精是最常见的表面灭菌剂，具有较强
的穿透力和灭菌作用，但对植物材料的杀伤作用也很
大。氯化汞的灭菌效果极佳，但缺点是易在植物材料上
残留，对环境危害大，对人有毒害。次氯酸钠是一种较好
的灭菌剂，灭菌能力强，不易残留，对环境无害。在多次
预试验中用次氯酸钠对外植体消毒，其效果较好。因此，
实验采用次氯酸钠对华肖菝葜带芽茎段消毒。由表2可
以看出，用20%次氯酸钠对华肖菝葜带芽茎段消毒，在处
理25min时，材料的污染率最低，效果最好，因此确定外植
体的最佳消毒时间为20min。
表2 不同消毒时间对外植体污染率的影响
时间（min）
5
10
15
20
25
总瓶数（个）
20
20
20
20
20
污染瓶数（个）
14
9
7
4
6
污染率（%）
7
45
35
20
30
2.2 启动培养 华肖菝葜的茎芽在接种10d左右即有部
分腋芽萌动，20d后除培养基A0处理外均有芽发生萌动。
35d有叶片生成（图1）。试验中出现了褐化现象，在培养
基中加入1 000mg/L活性炭之后褐化的外植体明显减少。
表3为不同生长调节素添加对华肖菝葜茎芽诱导的影响结
果。由表3得知，培养基A9为最佳处理，诱导率达76%。因
此，该培养基组（MS+6-BA6.0mg/L+NAA0.15mg/L+活性炭
1 000mg/L）可选为华肖菝葜最佳启动培养基。
图1 处理35d时华肖菝葜的生长情况
表3 不同生长调节素添加对华肖菝葜茎芽诱导的影响
序号
A0
A1
A2
A3
A4
A5
A6
A7
A8
A9
A10
A11
A12
接种数
（个）
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
诱导数
（个）
2
4
7
9
7
10
14
11
15
23
8
12
17
褐化瓶数
（个）
5
7
9
13
6
9
12
5
8
11
7
10
14
诱导率
（%）
6
13
23
30
23
33
46
36
50
76
26
40
56
褐化率
（%）
17
23
30
43
20
30
40
17
27
37
23
30
47
3 讨论
在本次试验中出现了褐化现象，这主要是在初期培
养中，基本培养基上中高浓度的盐可以促进外植体内酚
类物质的大量分泌，酚类化合物被氧化形成褐色的醌类
物质。试验发现，当6-BA添加量减少时，褐化率明显降
低，这主要是因为6-BA能促进酚类化合物的合成，并具
有刺激多酚氧化酶活性的作用［12-13］，从而促进（下转33页）
28
22卷16期
4
5
336.15
390.15
997.50
840.45
677.10
658.35
88.33
87.33
轻倒
重倒
好
较差
处理 基本苗（万/hm2） 越冬前茎蘖数（万/hm2） 穗数（万/hm2） 株高（cm） 倒伏情况 籽粒色泽
2.2 不同处理产量构成因素及产量的比较 由表2可知，
处理3（省大配方2）在穗粒数和千粒重方面表现最好，较
处理1（常规对照）分别增加1.87粒和1.96g，增产率达11.37
个百分点；其他各处理在产量上均较处理1（常规对照）增
产4%以上，但处理2因早衰较明显，致千粒重最低。由表
3可知：F0.05=3.48＜F=3.56＜F0.01=5.99，表明处理间产量在
1%水平上有差异。进一步用最小显著差数法（LSD法）进
行多重比较，结果表明，只有处理3比处理1在a=0.05水平
上增产达显著水平，其他任何两处理之间，产量差异均未
达显著水平。
表2 各处理产量构成因素及产量比较
处理
1
2
3
4
5
穗数
（万穗/hm2）
642.30
665.70
643.05
677.10
658.35
穗粒数
（粒/穗）
28.23
28.90
30.10
27.60
28.10
千粒重
（g）
45.29
44.51
47.25
46.98
47.35
产量
（kg/hm2）
8212.05
8563.05
9145.65
8779.65
8759.55
比处理1增
产（kg/hm2）
351.00
933.60
567.60
547.50
增产率
（%）
4.27
11.37
6.91
6.67
表3 方差分析
变异原因
处理间
重复间
总变异
自由度
4
10
14
平方和
8742.92
6148.06.
14890.98
均方
2185.73
614.81
1063.64
F值
3.56
F0.05
3.48
F0.01
5.99
表4 差异显著性分析
处理
1
2
3
4
5
产量（kg/hm2）
重复1
7851.75
8319.45
9148.35
9147.15
8471.70
重复2
7970.70
8202.45
8796.90
8947.80
8816.25
重复3
8813.85
9167.40
9491.70
8244.00
8990.55
平均值
8212.10
8563.10
9145.65
8779.65
8759.50
较处理1比
增产（kg/hm2）
351.00
933.55
567.55
547.40
差异显著性
5%
a
a
b
a
a
1%
A
A
A
A
A
3 结论与讨论
（1）试验结果表明，各处理小麦到越冬前茎蘖数均较
常规施肥（处理1）高；穗数以省大配方3最高；株高以常规
施肥和高氮配方最高，均在90cm左右；抗倒性以省大配方
3最好，常规施肥和省大配方4最差，严重倒伏，这可能是
因为处理4基肥中钾肥比例较高，而常规施肥和省大配方
4都于小麦返青期追施了氮肥；小麦籽粒色泽除处理5较
差（不知是何原因）外，其余均很好。
（2）省大配方2（处理3）在穗粒数和千粒重方面表
现最好，较常规施肥分别增加 1.87粒和 1.96g，增产
933.6kg/hm2，增产率达11.37个百分点；其他各处理在产
量上均较常规施肥增产4%以上，但处理2因早衰较明
显，致千粒重最低。
（3）方差分析结果表明，不同处理间产量在1%水平上
有差异。多重比较结果显示，除省大配方2较常规施肥在
1%水平上增产显著外，其余各处理间产量差异均不显著。
（4）从小麦产量表现、抗倒性、籽粒商品性等方面综合
评价，以省大配方2，即每1hm2用以22-13-10的配方肥
750kg作基肥，小麦拔节期再追施尿素150kg表现最好。但
省大配方2在阜南县并非最佳配方，因为阜南县目前绝大部
分土壤磷素缺乏不明显，甚至有些土壤出现富磷现象，因此
在此配方基础上，适当减磷更好。 （责编：张宏民）
（上接28页）了外植体的褐化程度。在培养基中加入活性
炭之后褐化的外植体明显减少，因为活性炭表面积大，可
以吸附非极性物质及色素大分子，减少一些有害物质的
影响。华肖菝葜在到目前为止所用过的培养基中，没有
看到一般愈伤组织的形成，这是因为其形成的各种微小
的愈伤组织随着根系的进一步分化逐渐消失［14］，因此也
就没有像其他植物那样建立起茎、根等营养体接种到培
养基上形成愈伤组织后再分化的系统。
参考文献
［1］中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志15卷［M］.北京：
科学出版社，2007：244.
［2］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草第 8册［M］.上
海：上海科学技术出版社，1999：106.
［3］明·李时珍.本草纲目［M］.北京：人民卫生出版社，1979：1292.
［4］罗金裕.广西中药白土苓原植物调查及显微鉴定［J］.中药材，
1989，12（11）：18.
［5］Chen C T，Chang S M.Studies in nature products（7）.A study
on the constituentsof Heterosmilax japonicakunth.Bull Inst
Chem，1976，23：9.
［6］Zhang S J，Pan J G，Ji L，el al.Analysis of the volatile compo⁃
nents in bai tu ling.［J］.China J Chin Mater Med，1999，24
（12）：740-741.
［7］秦文杰.短柱肖菝葜化学成分及质量控制研究［D］.北京：北京中
医药大学，2007.
［8］李青.菝葜的组织培养与快速繁殖［J］.植物生理学通讯，2007，43
（7）：502.
［9］董青松.广西菝葜族药用植物资源及开发调查初报［J］.中药研究
与信息，2005，7（5）：21.
［10］孙昌高，方坚.百合科药用植物种子发芽的研究［J］.中草药，
2000，l3（2）：l27-129
［11］刘永提，黄皎名.托柄菝莫组织培养技术研究［J］.林业科技开
发，2006（03）：45-48.
［12］邱璐，陈善娜，杨跃仙，等.云桑组织培养中褐化问题的研究［J］.
蚕业科学，2000，26（2）：118-119.
［13］高国训.植物组织培养中的褐变问题［J］.植物生理学通讯，
1999，35（6）：501-506.
［14］田泽一二（日）.用组织培养繁殖山野菜菝葜［J］.农业与园艺
（日），1990，65（3）：423-425. （责编：张宏民）
孙少利 小麦高产高效施肥田间对比试验研究 33