全 文 ：的优化值(见表 5)进行综合分析，令溶化时间的权重为 0． 7，pH
值的权重为 0． 3，由溶化时间的优化值 × 0． 7 + pH 值的优化值 ×
0． 3，得:X1 = 0． 83，X2 = 4． 4%，X3 = 0． 84%，即小儿金莲泡腾颗粒
剂的优化处方配比为柠檬酸与碳酸氢钠的配比为 0． 83:1(g:g) ，
聚乙二醇 6000 用量为 4． 4%，甜蜜素用量为 0． 84%。按优化处
方配比制备 3 批小儿金莲泡腾颗粒剂样品进行验证实验，测得其
溶化时间和 pH值的平均值分别为 95s 和 6． 28，与预测值 93． 2s
和 6． 256 基本相符。
表 5 优化值及优化条件下的溶化时间和 pH值
因素
溶化时间
优化值 溶化时间 / s
pH值
优化值 pH值
x1 0． 886352 93． 174707 0． 700084 6． 255689
x2 4． 684540 3． 736359
x3 0． 871553 0． 763289
3 讨论
小儿金莲泡腾颗粒为中药制剂，其浸膏粉具有一定的吸湿
性。为防止浸膏粉吸潮导致酸碱反应，影响泡腾颗粒剂的稳定
性，采取了以下措施:①用聚乙二醇 6 000 包裹碳酸氢钠，以减少
酸碱的直接接触，增强泡腾颗粒剂的稳定性［6］。②采用干法制
粒。与传统的湿法制粒相比，省去了制软材、干燥、整粒的过程，
工艺简单，并且克服了辅料用量大的缺点，提高了载药量［7］。③
用乳糖作稀释剂，以降低泡腾颗粒剂的吸湿性。④在干燥通风的
环境下生产。经查阅文献［8］及前期单因素考察发现，柠檬酸与
碳酸氢钠的不同配比对小儿金莲泡腾颗粒的溶化时间影响较 pH
值的影响更为显著，故令溶化时间的权重为 0． 7，pH 值的权重为
0． 3，以确定最佳制备工艺。
参考文献:
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科医学临床与教育，2010，8(2) :125．
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展［J］．中草药，2013，19(44) :2772．
［8］ 郑 平，孟丽娟，孙国萍，等．当归六黄泡腾颗粒剂处方配比的优化
研究［J］．中药材，2011，34(3) :452．
国药鉴别
收稿日期:2013-05-09; 修订日期:2014-09-01
基金项目:国家自然科学基金(No． 81160551)
作者简介:张 屏(1977-)，女(汉族)，河北石家庄人，内蒙古民族大学蒙医药
学院副教授，博士学位，主要从事药物分析和药品质量控制研究工作．
* 通讯作者简介:包保全(1969-) ，男(蒙古族) ，内蒙古科左中旗人，内蒙
古医科大学药学院教授，博士学位，主要从事蒙药活性物质基础及资源研
究工作．
蒙药材细叶铁线莲薄层鉴别和含量测定方法研究
张 屏1，包温根其其格1，吉日木巴图2，青格勒1，包保全2*
(1．内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000; 2．内蒙古医科大学药学院，内蒙古 呼和浩特 010110)
摘要:目的 以芹菜素和芹菜素 － 7 － O － β － D －(－ 6 － p －香豆酰基)－葡萄糖苷为指标性成分，建立蒙药材细叶铁线
莲的薄层鉴别和含量测定方法。方法 薄层鉴别采用硅胶 G薄层板，以氯仿 －甲醇 －甲酸(4∶ 0． 5∶ 0． 2)为展开剂，3%
三氯化铝乙醇溶液显色，置紫外灯(365nm)下检视。含量测定采用 ODS填充的色谱柱，乙腈 － 2%醋酸水溶液(30∶ 70)
为流动相，335nm下测定。结果 薄层色谱方法斑点清晰，专属性强。HPLC含量测定法，芹菜素和芹菜素 － 7 － O － β － D
－(－ 6 － p －香豆酰基)－葡萄糖苷均在 0． 05 ～ 1． 60μg 线性良好(r = 0． 9999) ，平均回收率分别为 100． 3%(RSD 为
0． 33%)和 100． 5%(RSD为 0． 29%) ，在 6 批次药材中的含量分别为 0． 181 ～ 0． 368 mg·g －1和 0． 819 ～ 2． 030 mg·g －1。
结论 此方法可有效鉴别细叶铁线莲，准确测定药材中芹菜素和芹菜素 － 7 － O － β － D －(－ 6 － p －香豆酰基)－葡萄糖
苷的含量，为该药材的质量控制提供方法和依据。
关键词:细叶铁线莲; 芹菜素; 芹菜素 － 7 － O － β － D －(－ 6 － p －香豆酰基)－葡萄糖苷; 薄层鉴别; 含量测定
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 02． 044
中图分类号:R284． 1;R291． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)02-0367-03
细叶铁线莲(Herba Clematis) ，蒙药名特穆日 －敖日阳古，为
毛茛科芹叶铁线莲 Clematis aethusifolia Turcz的干燥带花叶枝条，
是蒙医常用的破痞去滞药，用于治疗寒性肿瘤、消化不良、黄水
疮、水肿、寒泻等［1 ～ 3］，收载于《卫生部药品标准·蒙药分册》，其
质量标准尚未建立鉴别项和含量测定项。
化学研究表明，本品含有酚酸类、黄酮类、香豆素类、糖脂类、
苯丙素类和三萜类化合物。其中黄酮类成分含量较多，并且其化
学结构多以芹菜素为母核［4 ～ 6］。芹菜素具有抗肿瘤、抗菌、抗炎、
抗动脉硬化和抗氧化等药理作用［7］，与本品破痞、止泻、消肿功
效一致。因此，以芹菜素和芹菜素 － 7 － O － β － D －(－ 6 － p －
香豆酰基)－葡萄糖苷为指标性成分，对本品进行 TLC 定性鉴别
和 HPLC 含量测定研究［8，9］，为细叶铁线莲的质量控制提供方法
和依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 日本岛津 Shimadzu LC － 20A 高效液相色谱仪(配
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SPD － 20A 紫外检测器和 LC － Solution色谱工作站) ，德国赛多利
斯 Sartorius BT 25S型电子天平，DL450A 超声仪(上海之信仪器
有限公司 450W，40kHz) ，Diamonsil ODS(2)色谱柱(4． 6 mm × 250
mm，5 μm)。
1． 2 试药 采集并制备了 6 批细叶铁线莲药材(表 1) ，原植物由
内蒙古医科大学药学院生药教研室包保全教授鉴定为芹叶铁线
莲 Clematis aethusifolia Turcz，模式标本存放于内蒙古医科大学药
学院药用植物标本室。
芹菜素对照品(批号 LOTMUST － 12050505)购自北京伊格瑞
斯科技有限公司，经 HPLC 检识，面积归一化法计算其纯度大于
98%。对照品芹菜素 － 7 － O － β － D －(－ 6 － p －香豆酰基)－
葡萄糖苷为本实验室从芹叶铁线莲中分离得到，解析光谱数据
(1D － NMR、2D － NMR 和 MS)并参考文献报导，确定其化学结
构［4］。采用 HPLC 峰面积归一化法测定纯度大于 98%。对照品
化学结构式见图 1。
表 1 细叶铁线莲样品的采集与制作
编号 采集地点 采集时间 采集部位 制作方法
1 锡林郭勒正镶蓝旗桑根荙莱 2011-08 地上部分 晒干
2 锡林郭勒正镶蓝旗桑根荙莱 2012-08 地上部分 晒干
3 锡林郭勒正镶蓝旗乌赫尔秦敖包 2012-08 地上部分 晒干
4 锡林郭勒锡林浩特 2012-08 地上部分 晒干
5 锡林郭勒正镶白旗 2012-08 地上部分 晒干
6 锡林郭勒东乌珠穆沁 2012-08 地上部分 晒干
a －芹菜素;b －芹菜素 － 7 － O － β － D －(－ 6 － p －香豆酰基)－葡萄糖苷
图 1 对照品化学结构式
2 方法
2． 1 薄层鉴别 取本品粉末 1g，加甲醇 20ml，超声处理 30 min，
滤过，取滤液作为供试品溶液。另取适量芹菜素和芹菜素 － 7 －
O － β － D －(－ 6 － p －香豆酰基)－葡萄糖苷，加甲醇使溶解，
配制成 0． 1mg·ml －1的混合对照品溶液。吸取上述溶液各 5μl，
分别点于同一硅胶 G薄层板上，以氯仿∶ 甲醇∶ 甲酸(4∶ 0． 5∶
0． 2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 3%三氯化铝乙醇溶液显
色，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱
相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点(图 2)。
2． 2 含量测定
2． 2． 1 色谱条件 Diamonsil ODS(2) (4． 6mm × 250mm，5 μm)色
谱柱，流动相为乙腈 － 2% 醋酸水溶液(30 ∶ 70) ;检测波长
335nm;流速 1． 0ml·min －1;柱温 40℃。在此高效液相色谱条件
下，芹菜素和芹菜素 － 7 － O － β － D －(－ 6 － p －香豆酰基)－
葡萄糖苷与样品中其他组分色谱峰达基线分离，峰形良好(图 3)。
1 ～ 6 六批细叶铁线莲样品(表 1) ;7 混合对照品:a 芹菜素;
b 芹菜素 － 7 － O － β － D －(－ 6 － p －香豆酰基)－葡萄糖苷
图 2 细叶铁线莲的薄层鉴别色谱图
I混合对照品:a 芹菜素;
b 芹菜素 － 7 － O － β － D －(－ 6 － p －香豆酰基)－葡萄糖苷;
II 细叶铁线莲药材(样品 1)
图 3 细叶铁线莲 HPLC含量测定色谱图
2． 2． 2 溶液的制备
2． 2． 2． 1 混合对照品溶液的制备 取芹菜素和芹菜素 － 7 － O －
β － D －(－ 6 － p －香豆酰基)－葡萄糖苷对照品适量，精密称
定，加甲醇制成每 1ml含 100 μg的混合对照品溶液。
2． 2． 2． 2 供试品溶液的制备 取本品粉末(过 4 号筛) ，取约
0． 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25ml，称定重
量，超声处理 30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，
摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
2． 3 线性关系考察 取上述芹菜素和芹菜素 － 7 － O － β － D －
(－ 6 － p －香豆酰基)－葡萄糖苷混合对照品溶液，精密吸取
0． 5，1，2，4，8，16μl，注入高效液相色谱仪，按“2． 2． 1”色谱条件分
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析，测定各自峰面积，以对照品进样量(μg)为横坐标，峰面积值
为纵坐标，计算回归方程:芹菜素在 0． 05 ～ 1． 6μg 的范围内线性
良好，回归方程 Y = 4532370X － 10281(r = 1． 0000) ，芹菜素 － 7 －
O － β － D －(－ 6 － p －香豆酰基)－葡萄糖苷在 0． 05 ～ 1． 6μg
的范围内线性良好，回归方程 Y = 1426111X － 985(r = 1． 0000)。
2． 4 方法学考察
2． 4． 1 精密度试验 精密吸取供试品溶液(样品 1)10μl，连续进
样 6 次，测得芹菜素和芹菜素 － 7 － O － β － D －(－ 6 － p －香豆
酰基)－葡萄糖苷的峰面积值 RSD 分别为 0． 2%和 0． 6%，表明
仪器精密度良好。
2． 4． 2 稳定性试验 取同一供试品溶液(样品 1) ，分别于 0，2，4，
8，12，24h进样 10μl，测得芹菜素和芹菜素 － 7 － O － β － D －(－
6 － p － 香豆酰基)－ 葡萄糖苷峰面积 RSD 分别为 0． 3% 和
0． 6%，表明供试品 24h内稳定。
2． 4． 3 重复性试验 取同一批号的样品(样品 1) ，分别制备 6 份
供试品溶液，进样 10μl，测定芹菜素和芹菜素 － 7 － O － β － D －
(－ 6 － p －香豆酰基)－葡萄糖苷的峰面积 RSD 分别为 1． 0%
和 0． 7%。结果表明方法的重复性良好。
2． 4． 4 回收率试验 取细叶铁线莲样品 1 约 0． 25g，精密称定，
其中芹菜素和芹菜素 － 7 － O － β － D －(－ 6 － p －香豆酰基)－
葡萄糖苷含量分别为 0． 317mg·g －1和 1． 058mg·g －1，按 0． 5、1
和 1． 5 倍量精密加入对照品，再按“2． 2． 2． 2”方法制备供试品溶
液，精密吸取 10μl 进行 HPLC 分析，记录峰面积，计算回收率。
结果芹菜素的平均回收率为 100． 3%(RSD = 0． 33%) ，芹菜素 － 7
－ O － β － D －(－ 6 － p －香豆酰基)－葡萄糖苷的平均回收率
为 100． 5%(RSD = 0． 29%) ，表明回收率符合要求(表 2)。
表 2 加样回收率试验结果
对照品
取样量
/g
样品含量
/mg
对照品加
入量 /mg
检出量
/mg
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD
/%
0． 2486 0． 0788 0． 0400 0． 1191 100． 7
0． 2477 0． 0786 0． 0400 0． 1188 100． 4
a 0． 2511 0． 0797 0． 0800 0． 1595 99． 8 100． 3 0． 33
0． 2516 0． 0798 0． 0800 0． 1595 100． 1
0． 2517 0． 0799 0． 1200 0． 2006 100． 6
0． 2494 0． 0791 0． 1200 0． 1996 100． 4
0． 2486 0． 2647 0． 1350 0． 4006 100． 7
0． 2477 0． 2649 0． 1350 0． 4000 100． 1
b 0． 2511 0． 2646 0． 2700 0． 5354 100． 3 100． 5 0． 29
0． 2516 0． 2650 0． 2700 0． 5374 100． 9
0． 2517 0． 2651 0． 4000 0． 6679 100． 7
0． 2494 0． 2520 0． 4000 0． 6542 100． 5
a 芹菜素;b 芹菜素 －7 － O － β － D －(－6 － p －香豆酰基)－葡萄糖苷;n =3
2． 5 样品含量测定 分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液
各 10μl，注入高效液相色谱仪测定。6批样品含量测定结果见表 3。
表 3 6 批细叶铁线莲含量测定结果
样品编号
a
含量 /mg·g － 1 RSD /%
b
含量 /mg·g － 1 RSD /%
1 0． 317 0． 67 1． 058 1． 01
2 0． 277 0． 48 2． 030 0． 66
3 0． 193 0． 97 2． 007 1． 10
4 0． 209 0． 76 1． 614 1． 48
5 0． 181 0． 49 0． 819 0． 97
6 0． 368 0． 78 1． 267 0． 87
a 芹菜素;b 芹菜素 －7 － O － β － D －(－6 － p －香豆酰基)－葡萄糖苷;n =3
3 小结
薄层鉴别方法考察了多种展开系统，最终确定采用氯仿 －甲
醇 －甲酸(4∶ 0． 5∶ 0． 2) ，各成分均达到较好分离，斑点清晰，方
法简便可靠。HPLC含量测定方法考察了甲醇 －水、乙腈 －水流
动相系统，其中乙腈 －水系统分离效果较好，加入适量冰醋酸改
善峰形又解拖尾问题，芹菜素和芹菜素 － 7 － O － β － D －(－ 6
－ p －香豆酰基)－葡萄糖苷同时能够达到良好的分离，该含量
测定方法稳定、准确、可靠。
本课题在芹叶铁线莲化学成分研究的基础之上，首次对蒙药
材细叶铁线莲进行质量控制方法的研究，所选指标性成分特征
性、专属性强，含量较高，并能表达本品蒙医临床疗效的相关生物
活性。6 批药材中芹菜素和芹菜素 － 7 － O － β － D －(－ 6 － p －
香豆酰基)－葡萄糖苷含量测定数据可为本品含量限度的制定
提供科学依据。
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