全 文 ： 2008, Vol. 29, No. 04 食品科学 ※工艺技术210
新疆粉绿铁线莲不同部位总黄酮含量比较
古丽巴哈尔·阿巴拜克力1，阿不都拉·阿巴斯2,*
(1.新疆师范大学生命科学与化学学院，新疆 乌鲁木齐 830054 ；
2.新疆大学生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046)
摘 要：新疆粉绿铁线莲不同部位中含有黄酮类化合物。本实验采用分光光度法，以芦丁为标准样品测定其不同
部位中的总黄酮的含量，采用正交试验设计对粉绿铁线莲不同部位中总黄酮提取工艺进行了最佳筛选，四种因素对
不同部位总黄酮含量测定均有影响，分别得到了最佳提取工艺条件。茎：乙醇浓度为70%，温度为60℃，浸提
时间为2.5h，料液比为1:60，吸光度达0.303；叶：乙醇浓度为60%，温度为60℃，浸提时间为3.5h，料液比
为1:30，吸光度达0.751；花：乙醇浓度60%，料液比1:30，时间2.5h，温度60℃，吸光度达0.590；果实：
温度为80℃，乙醇浓度为60%，料液比为1:50，浸提时间为3h，吸光度达0.390。
关键词：粉绿铁线莲；总黄酮；提取
Total Flavonids Extraction and Content Comparison of Various Organs f Clematis glauca Wi ld. i Xinjiang
GULIBAHAER Ababaikeli1，ABDULLA Abbas2,*
(1.College of Life Science and Chemistry, Xinjiang Normal University,Urumqi 830054, China；
2.College of Life Science and Technology, Xinjiang University, Urumgi 830046, China)
Abstract ：Flavonoid exits in Clemat glaucaW lld. In this study the total flavonoids contents were assayed by spectropho-
tometry method with rutin as standard. The optimum extraction technologies of the total flavonoids from different parts of
clematis glauca Willd. were obtained by orthogonal test. The results were as follows respectively: The best extraction conditions
for stem ar concentration of ethano1 70%, temperature 60℃, extraction time 2.5 h and rate of solid to solution 1:60, and the
absorbance is 0.303; The best extraction conditions for leaf are concentration of ethanol 60%, temp rature ℃, extraction time
3.5h and rate of solid to soltion 1:30, and the absorbance s 0.751; The best extraction conditions for flower are concen ration
of ethanol 60%, rate of solid to solution 1:30, extraction time 2.5 h and temperature 60℃, and the abso banc is 0.950; The hest
extraction conditions for furit are temperature 80 ℃, concentration of e hanol 60 %, rate of solid to solution 1:5and extraction
time 3 h,and the absorbance is 0.390.
Key words：Clematis glauca Wi ld；total flavonoids；extraction
中图分类号：O623.54 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2008)04-0210-04
收稿日期：2007-11-01
基金项目：新疆师范大学优秀青年教师科研启动基金项目(XJNU-0726)
作者简介：古丽巴哈尔·阿巴拜克力(1969-)，女，讲师，硕士研究生，研究方向为植物有效成分分析。E-mail：xj_rstm@yeah.net
*通讯作者：阿不都拉·阿巴斯(1951-)，男，教授，研究方向为资源植物学。E-mail：abdulla@xju.edu.cn
粉绿铁线莲(Clematis glauca Willd.)藤本，一至二
回羽状复叶；小叶有柄，常为单歧聚伞花序，三花；
苞片叶状，四萼片，黄色，或外面基部带紫红色，瘦
果卵形至倒卵形，花期6至7月，果期8至10月。生
于海拔1700～2500米山地灌丛、平原河漫滩、城郊田
间及荒地。
分布于我国新疆、青海、甘肃、陕西、山西。
国外在蒙古、西伯利亚及中亚地区也有分布。全草可以
入药，可祛风湿，主治慢性风湿性关节炎，关节疼痛；
熬膏外敷可以治疗疮；枝叶水煎外洗，可止瘙痒症[1]。
目前，国内外有一些关于粉绿铁线莲花中挥发油的
报道，但是对黄酮类化合物提取方法未见报道，用不
同浓度乙醇浸提，新疆地产药用植物粉绿铁线莲不同部
位中黄酮类化合物，确定最佳提取工艺，可为开发和
利用其有效成分提供理论依据[2]。
1 材料与方法
1.1原料
新疆粉绿铁线莲于2006年8月采自新疆乌鲁木齐县
永丰乡农田田埂等地。
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1.2试剂
芦丁(rutinum)对照品；亚硝酸钠 (NaNO2)、氢氧化
钠 (NaOH)、硝酸铝(Al(NO3)3)、三氯化铁(FeCI3)、无
水乙醇 (CH3CH2OH)、镁粉均为分析纯。
1.3仪器
HZ-D循环水式真空泵、HH-S型水浴锅、S24分光
光度计、RE-52旋转蒸发器、回流提取装置及LAC164
分析天平(精确至0.0001g)。
1.4黄酮鉴定方法
1.4.1盐酸-镁粉反应
在样品液中加入少量镁粉，再滴加1～2滴浓盐酸，
在沸水溶液中加热3min，观察反应结果。
1.4.2三氯化铝显色反应
将样品液滴于滤纸上，并滴加5%FeCl3指示剂，观
察反应结果。
1.4.3铝盐反应
在样品液中滴加1%AlCl3溶液，观察反应结果。
1.4.4浓硫酸反应
在样品液中加入浓硫酸观察反应结果。
1.4.5醋酸镁反应
在样品液中逐滴加入1%醋酸镁溶液，观察反应结
果[3-4]。
1.5单因素试验
1.5.1乙醇浓度对提取效果的影响
分别用30%、40%、50%、60%、70%、80%、
90%的乙醇，在温度为70℃、料液比为(质量:体积)
1:15、每次1h的提取条件下提取2次，合并滤液，过
滤，浓缩，然后于50ml容量瓶定容，测定其吸光度。
1.5.2料液比对提取效果的影响
分别用10、20、30、40、50、60、70倍量的
60%乙醇，在温度为70℃、料液比为(质量:体积)1:15、
浸泡时间每次1h的提取条件下提取2次，合并滤液，过
滤，浓缩，然后于50ml容量瓶定容，测定其吸光度。
1.5.3浸泡温度对提取效果的影响
温度分别为30、40、50、60、70、80、90℃
时，用60%的乙醇，在料液比为(质量:体积)1:15，时
间为1h的提取条件下分别浸泡提取2次，合并滤液，过
滤，浓缩，然后于50ml容量瓶定容，测定其吸光度。
1.5.4浸泡时间对提取效果的影响
用60%的乙醇，在料液比为(质量:体积)1:15、的提
取条件下分别浸泡1、1.5、2、2.5、3、3.5、4h并
提取2次，合并滤液，过滤，浓缩，然后于50ml容
量瓶定容，测定其吸光度。
1.6黄酮类化合物含量测定[5-8]
1.6.1标准溶液的配制
精确称取0.200mg经120℃烘干至恒重的芦丁标准品，
用体积分数30%乙醇溶解并定容至100ml即为标准液。
1.6.2样品溶液的制备
准确称取样品各1g，以乙醇为溶剂，用最佳条件进
行提取，将滤液离心、浓缩，然后于50ml容量瓶中定容。
1.6.3测定波长的选择
分别取标准溶液1ml，置于50ml容量瓶中，加入0.7ml
5%NaNO2，摇匀，放置6min后加入0.7ml 10%Al(NO3)3，
放置6min再加入10ml 1 mol/L NaOH溶液，混匀，用
30%乙醇稀释至刻度，同时做空白对照，10min后测定
波长400～600nm区段的吸收度，得知芦丁最大吸收在
510nm波长处，因此分光光度法选测定波长为510nm。
1.6.4标准曲线的制作和回归方程的建立
精密量取标准溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、
3.0ml于7只25ml容量瓶中，再分别加入0.7ml 5% NaNO2，
摇匀，放置6min后加入0.7ml 10% Al(NO3)3，摇匀，
6min后再加入10ml 1 mol/L的NaOH溶液，混匀，用
30%乙醇稀释至刻度，15min后于波长510nm处测定吸
光度，0.0ml为空白对照，测得不同浓度下的吸光度。
测定结果见表1。以标准溶液浓度(C)为横坐标，吸光度
(A)为纵坐标作标准曲线。
标准溶液浓度(mg/ml)0.00.008.0160.0240.0320.0400.048
吸光度 0.00.0670.1540.2320.3190.3880.460
表1 标准溶液的吸光度
Table 1 Standard rutin concentration vs absorbance
1.6.5样品中黄酮含量测定
按标准曲线的制作方法精密量取样品溶液0.0、1.0ml
于25ml容量瓶中，再分别加入0.7ml 5% NaNO2，摇匀，
放置6min后加入0.7ml 10%Al(NO3)3，摇匀，6min后再
加入10ml 1mol/L的NaOH溶液，混匀，用30%乙醇稀
释至刻度，15min后于波长510nm处测定吸光度，0.0ml
为空白对照，测得不同浓度下的吸光度，根据回归方程
找出样品中总黄酮的浓度，计算得原料中总黄酮含量。
计算公式如下：
总黄酮含量(%)=[(C×50×25)/(1×1000)] ×100
式中，C为根据所测定的溶液的吸光度，代入回
归方程计算出相应的总黄酮含量(mg/ml)。
1.6.6正交试验设计
采用L9(34)正交试验设计，进一步考察乙醇体积分
数、料液比、提取温度、提取时间对提取液中总黄酮
含量影响，以确定最佳的总黄酮提取条件。
将1.00g粉碎的粉绿铁线莲不同部位按正交试验进行
浸取，将滤液离心、浓缩，然后于50ml容量瓶定容，
用移液管准确吸取1ml，放入25ml容量瓶中，按芦丁溶
液标准曲线的绘制步骤进行操作，分别测定吸光度，按
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回归方程分别计算出总黄酮含量。
2 结果与分析
2.1黄酮类物质的鉴定
显色反应结果见表2。结果说明粉绿铁线莲含有黄
酮类化合物。
试剂

材 料
浓硫酸 氢氧化钠 三氯化铝 盐酸+镁粉 乙酸镁
粉绿铁线莲茎 橙色 橙红色 黄色 浅红色 黄色
粉绿铁线莲叶 橙黄色 深黄色 黄色 浅红色 黄色
粉绿铁线莲花 黄色 黄色 黄色 黄色 黄色
粉绿铁线莲果实 橙红色 橙红色 黄色 浅黄色 黄色
表2　 显色反应结果
Table 2 Results of colour reaction
2.2单因素试验结果
图1表明，随着乙醇浓度的升高，黄酮的提取率
先升高后降低，当乙醇浓度达到一定浓度时，提取率
最高，随后又降低。考虑到提取操作的经济性，粉绿
铁线莲茎、叶、花及果实部位均选用50%～70%的乙醇
作为提取液。
图2表明，采用不同料液比进行浸提时总黄酮提取
率有差别，料液比实际上是溶剂的用量大小，一般当
溶剂的用量越大提取率也越大，但是过多的料液比会
造成溶剂和能源的浪费。综合考虑，粉绿铁线莲叶选
择1:30～1:50料液比，茎、花、果实则选择1:40～
1:60。
图3表明，总黄酮提取率随温度升高而升高，达
到一定时提取率最高，随后温度再升高则呈现下降趋
势。综合考虑，茎、叶、花均选择5 0～7 0℃，而果
实则选择60～80℃。
图4表明，随着提取时间的延长，不同部位总黄
酮提取率有不同程度的增加，当达到一定时间时，提
取率最高，随后呈现下降趋势。所以提取时间条件分
别为：叶为3～4 h，茎、花、果实等部位2～3 h。
2.3标准曲线与回归方程
所得标准曲线与回归方程见图5。
3 讨 论
3.1实验结果表明，粉绿铁线莲含有黄酮类化合物。
本实验对新疆粉绿铁线莲不同部位中总黄酮进行了定性
分析并用分光光度法对其含量进行比较测定，最终确定
叶部含量最高其次为花部，再次为果实，茎部含量最
低 。
图3 温度对提取效果的影响
Fig.3 Effects of temperature on extraction
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
30 40 50 60 70 80 90
茎
叶
花
果实
吸
光
度
提取温度(℃)
图 4 提取时间对提取效果的影响
Fig.4 Effects of time on extraction
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
1 1.52 2.53 3.54
茎
叶
花
果实
吸
光
度
提取时间(h)
图 2 料液比对提取效果的影响
Fig.2 Effects of rate of material to solution (m:V) on extraction
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
1:101:201:301:401:501:601:70
茎
叶
花
果实
吸
光
度
料液比
图1 乙醇浓度对提取效果的影响
Fig.1 Effects of ethanol concentration on extration
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
30 40 50 60 70 80 90
茎
叶
花
果实
吸
光
度
乙醇浓度(%)
213※工艺技术 食品科学 2008, Vol. 29, No. 04
3.2以乙醇为提取溶剂，乙醇浓度低时黄酮类物质无
法有效溶出，而随着乙醇浓度逐渐升高时，黄酮类化
合物的溶解度增加，当乙醇浓度再增加，黄酮类化合
物的溶解度减小，可能是由于随着乙醇浓度的增加一些
醇溶性杂质、色素、亲脂性强的成分溶出量增加，这
些成分与黄酮类化合物竞争同乙醇-水分子结合，从而
导致黄酮类化合物的提取率下降。
3.3一般来说，溶剂用量越大，提取率越高，但是，
过大的料液比会造成溶剂和能源的浪费，并给后序工作
带来麻烦，同时增大溶剂量，很有可能把一些不易溶
出的成分提取出来，造成黄酮类化合物的提取率降低。
3.4通常热提效率较冷提效率高。随着温度的不断升
高，分子运动速度会逐渐加快，渗透、扩散、溶解
速度也加快，同时高温可以引起细胞膜结构的变化，使
黄酮类化合物由外层细胞转移到溶剂中。因此，随着
最佳提取条件
测定部位 乙醇 料液 提取 提取
吸光度
浓度(%) 比 温度(℃) 时间(h)
率均值
粉绿铁线莲茎 70 1:60 60 2.5 0.303
粉绿铁线莲叶 60 1:30 60 3.5 0.751
粉绿铁线莲花 60 1:30 60 2.5 0.590
粉绿铁线莲果实 60 1:50 80 3 0.390
表3 新疆粉绿铁线莲不同药用部位总黄酮含量测定结果
Table 3 Total flavonids extraction and contents comparison of
various organs of Clematis glauca Willd.
提取温度的升高黄酮类化合物的提取率升高，但是，温
度过高可能引起黄酮类化合物结构被氧化破坏导致其提
取率降低。
3.5提取是物质的传质过程，需要一定时间才能达到
平衡，时间太短，还未达到平衡，其得率就偏低。当
传质过程达到基本平衡后，得率就不会明显上升，时
间过长溶剂的挥发损耗和生成也有变化[9-10]。
3.6采用正交试验设计对粉绿铁线莲不同部位中总黄酮
提取工艺进行了最佳筛选，分别得到的最佳提取工艺条
件如下：茎：乙醇浓度为7 0 %，温度6 0℃，浸提时
间为2.5h，料液比为1:60，吸光度达0.303；叶：乙
醇浓度为60%，温度为60℃，浸提时间为3.5h，料液
比为1:30，吸光度达0.751；花：乙醇浓度60%，料
液比1:30，时间2.5h，温度60℃，吸光度达0.590；
果实：温度为80℃，乙醇浓度为60%，料液比为1:50，
浸提时间为3h，吸光度达0.390。
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图 5 标准曲线
Fig.5 Standard curve of rutin
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 0.010.020.030.040.050.06
y=9.7634x－0.0029
R2=0.9988
吸
光
度
芦丁浓度(mg/ml)