全 文 ：光叶菝葜抗炎有效部位筛选
*
农 亨，杜洪志 ，董立莎＊＊，何席呈，张 静，李家丽，刘 明
(贵阳中医学院，贵阳 550002)
摘 要 目的:筛选黔产光叶菝葜根茎抗炎有效部位，并探索其抗炎的作用机制。方法:光叶菝葜药材用 60% 乙醇提取后再
分极性提取各部位，通过二甲苯致小鼠腹部毛细血管通透性影响试验(急性渗出性炎症)、小鼠棉球肉芽肿试验(慢性增殖性炎症)
对光叶菝葜抗炎有效部位进行了药效学筛选;对筛选出的抗炎有效部位再通过大鼠急性炎症试验中的血清一氧化氮(NO)3 天动态
释放量探索其抗炎的作用机制。结果:二甲苯致小鼠腹部毛细血管通透性影响试验中，光叶菝葜醇提物(7g /kg)及其乙酸乙酯部位
(7g /kg)均能显著减少染料的渗出量，抑制率分别为 29%和 34% 。而在小鼠棉球肉芽肿试验中，光叶菝葜醇提物(7g /kg)及其乙酸
乙酯部位(7g /kg)均能显著减少肉芽肿的增生，抑制率分别为 43%和 52%。在大鼠急性炎症试验中，光叶菝葜醇提物(7g /kg)及其
乙酸乙酯部位高(0． 4g /kg)、中(0． 2g /kg)、低(0． 1g /kg)剂量在致炎后的 72h 中均能抑制大鼠致炎足肿胀度，显著降低血清中一氧
化氮(NO)的含量。结论:黔产光叶菝葜的抗炎有效部位为乙酸乙酯部位，其作用机制可能是通过抑制机体中一氧化氮(NO)的释
放。
关键词 光叶菝葜;乙酸乙酯部位;急性渗出性炎症;慢性增殖性炎症;一氧化氮(NO)
光叶菝葜为百合科植物光叶菝葜 Smilax glabra Ｒoxb 的干
燥根茎［1］。其在黔东南苗族地区应用广泛，苗药习称薄丈达
(Bod zangd dak)，在少数民族地区及临床上广泛应用于妇科炎
症、风湿疼痛及梅毒等疾病疗效显著。本课题组前期研究发现，
黔产光叶菝葜的 60%醇提物有抗炎作用［2］，为此，本文首次通
过三种抗炎试验，将进一步对其有效部位进行药效学筛选的比
较研究，寻找黔产光叶菝葜的抗炎有效部位。
1 材料和方法
1． 1 试验药物 光叶菝葜药材样品由作者采集于贵州各地，将
根茎洗净，切片，阴干备用。由贵阳中医学院药学院生药教研室
董立莎教授鉴定为百合科植物光叶菝葜(Smilax glabra roxb．)
的根茎。光叶菝葜醇提物以 12 倍量 60% 的乙醇提取，每次提
取 1h，提取三次，提取物再按极性从大到小多次进行分级萃取，
最后重结晶后所得到的固体即为:光叶菝葜水提取部位(收率
7． 3%)，光叶菝葜乙酸乙酯提取部位(收率 5． 4%)，光叶菝葜石
油醚提取部位(收率 1． 7%)。临用时均以收率折算成所需剂
量，用 0． 5% 羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na)配制成所需浓度。
氢化可的松(天津金耀氨基酸有限公司，批号 1301051)配制成
2mg /ml。醋酸泼尼松(醋酸泼尼松，浙江仙琚制药股份有限公
司，批号 121267)配制成 0． 7 mg /ml。
1． 2 试剂 卡介苗，成都蓉生药业有限责任公司，批号
20140128;一氧化氮试剂盒，南京建成生物技术有限公司，批号:
20141022。
1． 3 动物 KM 小鼠，体重 18 ～ 22g，许可证号:SCXK(渝)
2012-0011;SD大鼠，6 ～ 8 周，体重 160 ± 20g;均为 SPF 级，合格
证号:SCXK(渝)2012-0005。均由重庆第三军医大学提供，动物
均饲养于标准环境:温度 18 ～ 22℃，相对湿度 50 ～ 60%，人工
光照 12h明暗周期，以标准颗粒饲料饲养。
1． 4 仪器 数显测厚仪，北京 Exploit 开拓工具有限公司，
033002 型。
1． 5 方法
1． 5． 1 小鼠腹部毛细血管通透性试验 取雄性小鼠 60 只，随
机分为 6 组，每组 10 只。设模型对照组(0． 5% CMC-Na)，氢化
可的松组 7mg /kg，光叶菝葜醇提物组、光叶菝葜水提取部位
组、乙酸乙酯部位组及石油醚部位组剂量均为 7g /kg(按生药
计)。除氢化可的松为皮下注射给药外，其余各组均为灌胃给
药。实验前两天将小鼠腹部脱毛，实验当天给药 1h后于每只鼠
尾静脉注射 0． 5%伊文思蓝生理盐水溶液 0． 1ml /10g，于腹部
脱毛处涂以 20μl 二甲苯，20min 后脱颈处死小鼠，剪下腹部脱
毛皮肤，加入丙酮硫酸钠溶液浸渍过夜，待染料完全溶出后，
3000rpm 离心 15min，取上清液于 UV-2401PC型-紫外-可见分光
光度计 590nm 处比色。
1． 5． 2 小鼠棉球肉芽肿试验 取雄性小鼠 60 只，随机分为 6
组，每组 10 只。设模型对照组(0． 5% CMC-Na)，醋酸泼尼松组
7mg /kg，光叶菝葜醇提物组、光叶菝葜水提取部位组、乙酸乙酯
部位组及石油醚部位组剂量均为 7g /kg(按生药计)。均为灌
胃给药。实验当日给药 1h后，腹腔注射 4%水合氯醛生理盐水
溶液(0． 1ml /10g)，待麻醉后，于小鼠左右腋下分别放于植入
一个高压灭菌棉球(10 ± 1mg)，缝合伤口。每天灌胃 1 次，连
续 14d，于第 15d处死小鼠后取出棉球，剔除脂肪组织，70℃烘
箱中烘干 4h，称重。
1． 5． 3 大鼠急性炎症试验 取雄性大鼠 70 只，随机分为 7
组，每组 10 只，空白对照组和模型对照组每天灌胃 0． 5% CMC-
Na 1ml /100g大鼠;光叶菝葜乙酸乙酯部位低、中、高三个剂量
组(0． 3g /kg、0． 6g /kg、1． 2g /kg)、光叶菝葜醇提物组 7g /kg 和醋
酸泼尼松组 7mg /kg均以 1ml /100g 每天灌胃给药，于致炎前两
天开始每天灌胃给药 1 次，连续 6 天。取卡介苗冻干粉，制备弗
氏完全佐剂(Freunds complete adjuvant FCA)，备用［3］。给药 1h
后，将大鼠乙醚麻醉，右后足常规消毒，于右足底皮下注射 0．
1mlCFA致炎，正常对照组注射 0． 1ml生理盐水。以诱导大鼠急
36中药药理与临床 2015;31(2)
* 基金项目:国家自然科学基金项目(81460588);贵州省中药现代化专项(黔科合 ZY 字［2013］3011 号);贵州省教育厅项目(黔教合 KY 字
［2014］262 号);贵中医大创合字(2014)15 号 ＊＊通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2015.02.023
性足肿胀炎症。使用厚度测量仪，分别于致炎前及致炎后 4h、
24h、48h及 72h测定大鼠致炎侧足掌厚度，以致炎足与非致炎
足足掌厚度的差作为肿胀度。于致炎后的 3 天中，每天同一时
段乙醚麻醉大鼠，眼内眦取血，常规方法制备血清，严格按试剂
盒说明，采用硝酸还原酶法检测血清一氧化氮(NO)含量。
2 结果
2． 1 对小鼠毛血管通透性的影响 在小鼠毛血管通透性影响
试验中，光叶菝葜醇提物组、光叶菝葜石油醚部位组、光叶菝葜
乙酸乙酯部位组及光叶菝葜水提取部位组与模型对照组相比，
显著减少伊文思蓝染料渗出量，结果见表 1。
表 1 光叶菝葜对二甲苯致小鼠腹部毛细血管通透性影响试验结
果(珋x ± s，n = 10)
组别 剂量(g /kg) OD值 抑制率(%)
模型对照 0． 185 ± 0． 039
氢化可的松 0． 02 0． 106 ± 0． 051＊＊ 43
光叶菝葜醇提物 7 0． 132 ± 0． 051＊＊ 29
光叶菝葜石油醚部位 7 0． 137 ± 0． 076 26
光叶菝葜乙酸乙酯部位 7 0． 123 ± 0． 062＊＊ 34
光叶菝葜水提取部位 7 0． 142 ± 0． 047* 23
与模型对照组比较* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01 (下同)
由上表可以看出，光叶菝葜醇提物、石油醚部位、光叶菝葜
乙酸乙酯部位和光叶菝葜水提取部位对于急性炎症均具有显
著的抑制作用，并且以光叶菝葜乙酸乙酯部位的抑制率最高。
2． 2 对小鼠棉球肉芽肿的影响 在小鼠棉球肉芽肿试验中，光
叶菝葜醇提物组、光叶菝葜石油醚部位组、光叶菝葜乙酸乙酯
部位组、光叶菝葜水提取部位组与模型对照组相比，均能显著
减少肉芽肿增生，结果见表 2。
表 2 光叶菝葜对小鼠棉球肉芽肿影响试验结果 (珋x ± s，n = 10)
组别 剂量(g /kg) 肉芽重(mg) 抑制率(%)
模型对照 7． 61 ± 2． 40
醋酸泼尼松 0． 007 5． 33 ± 2． 74* 46
光叶菝葜醇提物 7 5． 78 ± 1． 52* 43
光叶菝葜石油醚部位 7 6． 30 ± 2． 35* 21
光叶菝葜乙酸乙酯部位 7 5． 23 ± 1． 08* 52
光叶菝葜水提取部位 7 5． 01 ± 1． 19* 32
由上表可以看出，光叶菝葜醇提物、光叶菝葜石油醚部位、
光叶菝葜乙酸乙酯部位及光叶菝葜水提取部位对于慢性(增殖
性)炎症均具有一定的抑制作用，且以光叶菝葜乙酸乙酯部位
的抑制率最高，且高于醋酸泼尼松。
由表 1 ～ 2 可以看出，光叶菝葜乙酸乙酯部位无论对于急性
渗出型还是慢性增殖性炎症抑制率均高于其他二个提取部位，
说明光叶菝葜乙酸乙酯部位是光叶菝葜抗炎的主要活性部位。
2． 3 大鼠急性炎症足肿胀度的影响 与模型对照组相比，光叶
菝葜乙酸乙酯部位的中剂量组与光叶菝葜醇提物组和醋酸泼
尼松组大鼠的足爪肿胀度在致炎后 4h起明显减轻，光叶菝葜乙
酸乙酯部位低剂量组与光叶菝葜乙酸乙酯部位高剂量则在致
炎后第 24h 至 48h 明显减轻，光叶菝葜高剂量组抑制足肿胀效
果不稳定，结果见表 3。
表 3 光叶菝葜对大鼠急性足肿胀度的影响(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
(g /kg)
致炎后 4h
(mm)
致炎后 24h
(mm)
致炎后 48h
(mm)
致炎后 72h
(mm)
空白对照 0． 12 ± 0． 10＊＊ 0． 05 ± 0． 05＊＊ 0． 03 ± 0． 06＊＊ 0． 03 ± 0． 03＊＊
模型对照 1． 81 ± 0． 37 2． 67 ± 0． 40 2． 57 ± 0． 43 2． 28 ± 0． 39
光叶菝葜乙酸乙酯部位 0． 3 1． 66 ± 0． 33 2． 17 ± 0． 62* 1． 95 ± 0． 66* 1． 51 ± 0． 53＊＊
光叶菝葜乙酸乙酯部位 0． 6 1． 48 ± 0． 22* 2． 15 ± 0． 50* 1． 82 ± 0． 44* 1． 41 ± 0． 32＊＊
光叶菝葜乙酸乙酯部位 1． 2 1． 56 ± 0． 45 2． 26 ± 0． 55 1． 88 ± 0． 64* 1． 51 ± 0． 56＊＊
光叶菝葜醇提物 7 1． 47 ± 0． 31* 2． 24 ± 0． 72 1． 96 ± 0． 63* 1． 35 ± 0． 43＊＊
醋酸泼尼松 0． 007 1． 45 ± 0． 28* 1． 93 ± 0． 48＊＊ 1． 71 ± 0． 37＊＊ 1． 27 ± 0． 28＊＊
由上表可以看出，光叶菝葜乙酸乙酯部位各剂量与光叶菝
葜醇提物均对抑制大鼠急性足肿胀具有显著的抑制作用。
2． 4 对血清一氧化氮含量的影响 与模型对照组相比，光叶菝
葜醇提物组、光叶菝葜乙酸乙酯部位各剂量组从致炎后 24h起，
大鼠血清中的一氧化氮(NO)含量能显著降低，而光叶菝葜乙
酸乙酯部位高剂量组则是从致炎后 48h 起，才使大鼠血清中的
一氧化氮(NO)含量显著降低，结果见表 4。
表 4 光叶菝葜对大鼠急性炎症血清一氧化氮(NO)动态含量的影
响(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
(g /kg)
致炎后 24h
(μmol /L)
致炎后第 48h
(μmol /L)
致炎后第 72h
(μmol /L)
空白对照 5． 42 ± 3． 94＊＊ 5． 09 ± 2． 50＊＊ 5． 00 ± 2． 69＊＊
模型对照 26． 61 ± 7． 53 23． 81 ± 4． 83 21． 36 ± 3． 68
光叶菝葜乙酸乙酯部位 0． 3 18． 22 ± 6． 09* 16． 53 ± 6． 21＊＊ 12． 71 ± 5． 42＊＊
光叶菝葜乙酸乙酯部位 0． 6 18． 90 ± 7． 60* 12． 54 ± 5． 07＊＊ 9． 92 ± 3． 87＊＊
光叶菝葜乙酸乙酯部位 1． 2 21． 02 ± 4． 37 14． 49 ± 6． 96＊＊ 15． 68 ± 7． 26*
光叶菝葜醇提物 7 18． 64 ± 6． 03* 14． 32 ± 3． 00＊＊ 9． 83 ± 3． 35＊＊
醋酸泼尼松 0． 007 14． 32 ± 9． 32＊＊ 12． 37 ± 4． 99＊＊ 8． 14 ± 3． 30＊＊
由表 4 可以看出，模型对照组与空白对照组动物血清中的
一氧化氮(NO)含量差异显著，各给药组动物血清中的一氧化氮
(NO)含量也与模型对照组有差异。光叶菝葜乙酸乙酯部位中
剂量组较模型对照组低，同时最终血清中一氧化氮(NO)的含量
也较光叶菝葜乙酸乙酯部位低剂量组和光叶菝葜乙酸乙酯部
位高剂量组低，并与光叶菝葜醇提物组相当，说明光叶菝葜乙酸
乙酯部位和光叶菝葜醇提物均能显著降低急性足肿胀大鼠血
清中一氧化氮(NO)的含量。
3 讨论
本次大鼠急性炎症试验结果表明，光叶菝葜醇提物及其乙
酸乙酯部位能够显著降低大鼠急性足肿胀程度，与小鼠抗炎试
验结果相吻合;由急性炎症大鼠血清一氧化氮 3 天动态含量变
化实验结果表明，光叶菝葜醇提物及其乙酸乙酯部位能够显著
降低急性炎症大鼠血液中的一氧化氮(NO)含量，说明光叶菝葜
醇提物及其乙酸乙酯部位可能是通过抑制机体中一氧化氮
46 中药药理与临床 2015;31(2)
(NO)的释放，降低局部细小血管的通透性，减少局部组织血管
内的液体和细胞成分通过血管壁渗出，继而缓解炎症局部红肿
的症状。此研究为综合评价黔产光叶菝葜的抗炎活性部位，为
下一步活性成分研究提供基础，为综合利用黔产该药、保护植
物资源、扩大药源提供了科学的实验依据。
参考文献
1 国家中医药管理局《中华本草》编委会著．中华本草·苗药卷．贵阳:
贵州科技出版社，2005∶ 47 ～ 49
2 葛向前，吴曙光，陈秀芬，等．断面红棕色及类白色土茯苓抗炎作用
的比较研究．中药药理与临床，2012;28(6)∶ 103 ～ 105
3 魏伟，吴希美，李元建著．药理实验方法学(第 4 版)． 北京:人民卫
生出版社，2010∶ 737 ～ 790
Screening of active and mechanism on anti-inflammatory from Smilax glabra Ｒoxb of Guizhou
Nong Heng ，Du Hongzhi ，Dong Lisha ，He Xicheng ，Zhang Jing ，Li Jiali ，Liu Ming
(Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002)
Objective:To explore the mechanisms of anti-inflammatory and the effective fractions of the Smilax glabra Ｒoxb rhizome of Guizhou．
Method:Smilax glabra Ｒoxb of medicinal materials were extracted with 60% ethanol extraction respectively，and its effective fractions was
be screened by the acute anti-inflammatory experiment(acute exudative inflammation)，the cotton pellet granuloma in mice (chronic hyper-
plastic inflammation)． Then the anti-inflammatory effective fraction＇s mechanism of anti-inflammation was explored by the rat effected by Fre-
und＇s complete adjuvant (FCA)of serum levels of NO dynamic release a quantity to 3 days． Ｒesults:In the acute anti-inflammatory experi-
ment，the ethanolic extract (7g /kg)and the ethyl acetate extract (7g /kg)could reduce dye exudation ，the inhibitory rates were 29% and
34% respectively． Moreover，both of them could reduce granuloma hyperplasia in the cotton granuloma test． the inhibitory rates were 43%
and 52% respectively． In the inflammation induced by FCA，the ethanolic extract(7g /kg)and the ethyl acetate extract high(0． 4g /kg) ，me-
dium(0． 2g /kg)and low (0． 1g /kg)dose groups could reduce the inflammatory rat＇s feet swelling degree and reduce the generation of NO in
serum，significantly． Conclusion:The ethyl acetate extract is the best active fraction of Smilax glabra Ｒoxb，and may be its mechanism was
inhibiting the release of NO in the body，the lower the permeability of local capillary，to remit the symptoms of inflammation．
Key words Smilax glabra Ｒoxb(光叶菝葜);ethyl acetate extract;acute exudative inflammation;chronic hyperplastic inflammation;NO
柴郁汤对 CCl4 造成的大鼠原代肝细胞急性损伤的保护作用
*
陈 菲1，2，方步武2，吴咸中3＊＊
(1聊城市人民医院药学部，聊城 252000;2天津医科大学药理学教研室，天津 300070;
3天津市中西医结合急腹症研究所，天津 300110)
摘 要 目的:采用血清药理学的方法探讨柴郁汤对 CCl4 造成的大鼠原代肝细胞急性损伤的保护作用。方法:建立大鼠肝
细胞原代培养方法，制备大鼠药物血清。将原代肝细胞种于培养板中，37℃、5% CO2 孵育箱中培养 48h 后，分组加入相应药物后，
继续培养 6h、18h、30h后，除正常血清对照组外均加入 10mmol /L CCl4 继续作用 6h，测定MTT，分别收集这三个时间点的培养上清液
以测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘胆酸(CG)，并收集细胞测定细胞膜 Na + -K + -ATP 酶活性。结果:成功进行肝细胞分离，得率 3
× 107 个，存活率 90 %以上;成功制备正常大鼠血清、柴郁汤药物血清(0． 2g /ml、0． 6g /ml、1． 8g /ml)以及熊去氧胆酸药物血清;随柴
郁汤用量增加，柴郁汤药物血清使 CCl4 损伤大鼠肝细胞培养上清中 ALT的含量下降，36 h时柴郁汤药物血清 0． 2g /ml组 ALT的含
量为 6． 5 ± 2． 0IU /L，柴郁汤药物血清 1． 8g /ml组 ALT的含量为 3． 4 ± 1． 0IU /L。而上清中甘胆酸的含量升高，36 h柴郁汤药物血清
0． 2g /ml组上清中甘胆酸的含量为 2． 07 ± 0． 30 g /ml，柴郁汤药物血清 1． 8g /ml组上清中甘胆酸的含量为 2． 81 ± 0． 32 g /ml。且肝细
胞膜 Na + -K + -ATP酶活性增高，36 h 柴郁汤药物血清 0． 2g /ml 组肝细胞膜 Na + -K + -ATP 酶活性为 0． 63 ± 0． 08μmol Pi /(mg prot·
h)，柴郁汤药物血清 1． 8g /ml组 Na + -K + -ATP酶活性为 1． 10 ± 0． 15μmol Pi /(mg prot·h)，与模型组比较差异均有显著性意义。结
论:柴郁汤药物血清对 CCl4 损伤的大鼠原代肝细胞能显著促进甘胆酸分泌。柴郁汤泌胆利胆作用机制与维持肝细胞膜系的流动性
和提高肝细胞膜 Na + -K + -ATP酶的活性有关。
关键词 柴郁汤;肝细胞;四氯化碳(CCl4)
目前柴郁汤的组成药柴胡和郁金广泛用于肝内胆汁淤积、
肝外胆系结石、胆系感染的综合治疗中。柴胡疏肝解郁，郁金清
热凉血疏肝［1］。有研究表明疏肝利胆(如柴胡)和活血化瘀(如
郁金)中药合用对胆汁分泌有增效作用。本研究所用柴郁汤，
56中药药理与临床 2015;31(2)
* 基金项目:天津市科技攻关计划重大科技项目(05YFGDSF02600) ＊＊通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2015.02.024