全 文 ：中药新药与临床药理 2014年 5月第 25卷第 3期
·质量分析研究·
收稿日期：2014-01-19
作者简介：成磊，女，硕士研究生，研究方向：中药与民族药质量标准研究。Email：Chenglei_777@126.com。通讯作者：蒋伟，副教授，研究方
向：中药与民族药药效物质基础与质量标准研究。Email：dynastyjw@126.com。
基金项目：国家自然科学基金项目（81360675）；国家重大新药创制课题（2012ZX09103-201-050）；江西省“赣鄱英才55 工程”人才引进计划项目。
HPLC法测定篦齿虎耳草及其近缘品种中金丝桃苷的含量
成 磊 1，蒋 伟 2，3，杜小浪 2，3，慕泽泾 2，3，钟国跃 2，3（1. 北京中医药大学，北京 100029；2. 江西中医药大
学，江西 南昌 330004；3. 中药资源与民族药研究中心，江西 南昌 330004）
摘要：目的 建立常用藏药“松蒂”药材主流品种篦齿虎耳草 Saxifraga umbellulata var.pectinata（Marquand et
Shaw）J. T. Pan中金丝桃苷的含量测定方法。测定“松蒂”药材相关基源植物共计15个样品，涉及虎耳草属8
个种及变种中金丝桃苷含量，评价其药用合理性。比较高原藏区虎耳草品种和低海拔地区虎耳草品种中金丝桃
苷含量，探讨高原藏区虎耳草品种和低海拔地区虎耳草品种的药用差异。方法 采用高效液相色谱法，使用
Amethyst-C18-P（4.6 mm×250 mm，5μm）色谱柱，以乙腈 -0.1 %磷酸水溶液（15∶85）为流动相，流速为
1 mL·min-1，柱温35℃，在360 nm波长处测定金丝桃苷的含量。结果 3个篦齿虎耳草样品中金丝桃苷含量
为0.02%～0.03%；其他品种虎耳草内均含有金丝桃苷，10个高原藏区样品中含量为0.02%～0.86%；2个低
海拔地区样品含量分别为0.001%和0.002%。结论 该方法用于金丝桃苷含量测定，便捷、准确、重复性好，
可用于“松蒂”药材的质量控制。藏区多种虎耳草属植物金丝桃苷含量不低于主流品种篦齿虎耳草的含量，作
为“松蒂”药材基源植物具有一定的合理性。高原藏区虎耳草品种的金丝桃苷含量显著高于低海拔地区虎耳草
品种的含量，一定程度上说明其药用差异的内在物质基础原因。
关键词：篦齿虎耳草；金丝桃苷；近缘品种；高效液相色谱
中图分类号：R284.1文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2014）03-0327-04
doi：10.3969/j.issn.1003-9783.2014.03.022
Determination of Hyperin in Saxifraga umbellulata var. pectinata and Its Relative Species by HPLC
CHENG Lei1，JIANG Wei2，3，DU Xiaolang2，3，MU Zejing2，3，ZHONG Guoyue2，3（1. Beijing University of Traditional
Chinese Medicine，Beijing 100029，China；2. Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004
Jiangxi，China；3. Research Center of Natural Resources of Chinese Medicinal Materials and Ethnic Medicine，
Nanchang 330004 Jiangxi，China）
Abstract：Objective To establish a method for the determination of hyperin inSaxifraga umbellulata var.pectinata
which is the main source species used as Tibetan medicine“Songdi”，to evaluat the medicinal rationality of other
relativeSaxifraga species used as medicinal source of“Songdi”through comparing the hyperin content among them，
and to discuss the reason for the medicinal differences between theSaxifraga species in the Qinghai-Tibet Plateau and
the region with lower elevations by comparing their hyperin content.Methods HPLC was adopted to determin the
content of hyperin on chromatographic column Amethyst-C18-P（4.6 mm×250 mm，5μm）by isocratic elution with the
mobile phase of acetonitrile -0.1 % formic acid（15∶85）. The flow ate was 1 mL·min-1，the column was maintained
at 35℃，and detecting wave length was set at 360 nm.Results In the three batches ofS. umbellulata var.pectinata
samples，the hyperin content was in the range of 0.02 %-0.03 %. Other relativeSaxifraga species also contained
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2014 May，Vol． 25 No． 3
“蒂达”（习称藏茵陈）系藏医临床用于治疗肝胆
疾病的一类功效相近药材的总称，是藏药中最具代
表性的常用药材之一。“松蒂”是“蒂达”的品种
之一，其味苦性寒，具有清肝胆之热、排脓敛疮之
功效，临床上多用于肝炎、胆囊炎、感冒发热及疮
热等的治疗[1-2]。“松蒂”在藏区不同地区使用的基
源较为复杂，《中华人民共和国药典》2005及2010年
版附录中以“迭达”之名收载了虎耳草科唐古特虎
耳草 Saxifraga tangutica Engl.，《藏药标准》[3]中以“莲座
虎耳草（松蒂）”之名收载了伞梗虎耳草 S. pasμmensis
Marq. EtShaw、聚叶虎耳草 S. confetifolia Engl.和虎耳
草 S. candelabrμm Frach.等3种，而《藏药志》[4-5]等现代
藏医药文献中则记载有高原分布的多种虎耳草属植
物。据笔者对藏、青、川等藏区藏医医疗机构、制
药企业等的调查，“松蒂”的主流品种为篦齿虎耳
草 S. umbellulata var.pectinata Marq.et Shaw，以全草
入药[6-7]，该种主要分布于青藏高原海拔3000 m以上
的高山灌丛和草甸区[8]，为藏医特有药物。另外，低
海拔地区的虎耳草属植物也为各地作为民间草药使
用，主要品种为 S. stolonifera（L.）Meerb.，但其用途与
“松蒂”迥异，主要用于治疗肺热咳嗽，中耳炎以及
痔疾肿毒等。目前尚未见有关篦齿虎耳草化学成分
的研究报道。笔者等对篦齿虎耳草进行了较为系统
的化学成分分离和分析，结果表明篦齿虎耳草主要
含有黄酮类和皂苷类成分（将另文报道），并对其总
黄酮、绿原酸、芦丁、槲皮素进行了含量测定[9]。鉴
于金丝桃苷具有显著的保肝[10]、抗乙肝[11-12]作用，与
“松蒂”的临床功效相关，本文进一步采用HPLC法
建立了篦齿虎耳草中金丝桃苷含量测定方法，并对
其他近缘品种进行了金丝桃苷含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器及试剂 Agilent 1260高效液相色谱仪，美
国安捷伦科技有限公司；色谱柱：Amethyst-C18-P
（4.6 mm×250 mm，5μm），美国赛分科技有限公司；
KQ-100DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有
限公司；水为超纯水；甲醇、乙腈均为色谱纯；其
他试剂均为分析纯。
1.2 对照品 金丝桃苷（中国药品生物制品检验所，供
含量测定用，批号：111521-201205；含量：93.3%）。
1.3 样品 共用15个样品，其中3个样品为收集于
藏区的商品药材，10个样品分别为采自藏区的道地
药材，2 个样品分别为采集于江西、安徽的道地药
材。各样品经重庆市中药研究院刘翔助理研究员鉴
定分别为虎耳草属8个种及变种，标本及样品现存
于江西中医药大学中药资源与民族药研究中心。样
品来源信息见表1。
表 1 松蒂样品信息表
Table 1 Information of sample“Songdi”
2 方法与结果
2.1 金丝桃苷对照品溶液制备 精密称取金丝桃苷对
hyperin. In the ten batches of samples from Qinghai-Tibet Plateau，the hyperin content was in the range of 0.02 %-
0.86 %. In the two batches of samples from the region with lower elevations，the content of hyperin was 0.001 % and
0.002 %，respectively.Conclusion The established methods are simple and accurate，and with good reproducibility，
which are suitable for the quality control of“Songdi”. In Tibet dis ict，the hyperin content of various relative species
of“Songdi”is not less than that in the main source species S.umbellulata var.pectinata，which partly explained the
rationality of variety of source species for“ Songdi”in Tibetan medicine. In addition，the hyperin content in the
samples from the Qinghai-Tibet Plateau is much higher than that from the lower elevations，which partly contributes to
the medicinal differences between the two districts.
Keywords：Saxifraga umbellulata var.pectinata；Hyperin；Relative species；HPLC
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植物名
篦齿虎耳草
篦齿虎耳草
篦齿虎耳草
小伞虎耳草
小伞虎耳草
小伞虎耳草
狭瓣虎耳草
狭瓣虎耳草
山地虎耳草
白小伞虎耳草
唐古特虎耳草
疏叶虎耳草
疏叶虎耳草
虎耳草
虎耳草
拉丁名
S. umbellulata var.pectinata
S. umbellulata var.pectinata
S. umbellulata var.pectinata
S. umbellulata
S. umbellulata
S. umbellulata
S. pseudohirculus
S. pseudohirculu
S. sinomontana
S. umbellulata var. muricola
S. tangutica
S. substrigosa
S. substrigosa
S. stolonifera
S. stolonifera
来源
西藏林芝采集
西藏工布江达县采集
商品
昌都地区藏药厂
昌都地区藏药厂
西藏曲松罗布沙镇罗布沙四组
四川省德格县雀儿山下
西藏曲松县布丹拉山口
四川省德格县雀儿山下
西藏加查县布丹拉山口
西藏加查县布丹拉山口
西藏米林县南伊沟扎贡
西藏林芝县色吉拉山
江西
安徽
批号
201201
2011311
20090801
20120801
2013110
2013170
2013060
2013185
2013065
2013195
2013197
2013252
2013309
2013075
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中药新药与临床药理 2014年 5月第 25卷第 3期
照品（含量：93.3 %）4.95 mg（经折算金丝桃苷量为
4.62 mg），用甲醇溶解，制成 0.037 mg·mL-1溶液，
即得。
2.2 供试品溶液制备 取篦齿虎耳草样品粉末（1号
样品，过4号筛）约 1 g，精密称定，置具塞锥形瓶
中，精密加入 20mL甲醇，称定质量，超声处理 60
min，放冷，再称定质量，加甲醇补足减失的质量，
过0.22μm微孔滤膜，弃去初滤液，取续滤液即得。
2.3 色谱条件 色谱柱：Amethyst-C18-P（4.6 mm×
250 mm，5μm）；流动相：乙腈 -0.1%磷酸水溶液
（15∶85）；流速：1 mL· in-1；柱温：35℃；检测波
长360 nm。在选定的色谱条件下，相邻色谱峰之间
分离度均大于 1.5，拖尾因子均在 0.95～1.05 之间，
理论塔板数均大于 8000，满足定量要求，见图1。
A.对照品；B. 供试品
图 1 金丝桃苷对照品溶液与供试品溶液色谱图
Figure 1 HPLC graphs of references and Samples
2.4 线性范围考察 精密吸取配制好的金丝桃苷对照
品溶液1，2，4，6，8，12μL进样，按照2.3项下
色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵
坐标，对照品的量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，
并计算得金丝桃苷回归方程为 Y=2328.8X+1.7743
（r=0.9999），在 0.037～0.444μg 范围内，金丝桃苷
线性关系良好。
2.5 精密度试验 取同一金丝桃苷对照品溶液，进样
15μL，重复测定 6 次。结果金丝桃苷峰面积的RSD
为0.11 %（n=6），表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验 取供试品溶液，置阴暗处室温密闭
放置，分别于0，15，30，48，72 h精密吸取同一供
试品溶液15μL进样，测定金丝桃苷峰面积，结果
金丝桃苷峰面积的 RSD 为 1.86 %（n=6），表明供试
品溶液在48 h内稳定性较好。
2.7 重复性试验 取同一批样品（1号样品）6 份，精
密称定，按照 2.2 项下方法制备供试品溶液，进样
15μL，计算金丝桃苷的含量，结果显示含量平均值
为0.3295 mg·mL-1，RSD为1.63 %（n=6），表明重复
性良好。
2.8 加样回收率试验 取已知含量的样品（1号样品，
金丝桃苷含量为0.3295 mg·mL-1）粉末约 0.5 g，共 9
份，精密称定，置具塞锥形瓶中，按样品中金丝桃
苷含量的80 %，100 %和 120 %分别精密加入金丝
桃苷对照品溶液各3份，挥干溶剂，按照2.2项下方
法制备供试品溶液并进行含量测定，计算回收率。
结果金丝桃苷平均回收率为98.99 %，RSD为4.2 %
（n=9），表明该方法准确度良好。
2.9 样品测定 取表1中15个虎耳草样品按上述方
法进行测定，由线性方程计算含量，3个篦齿虎耳草
样品中金丝桃苷百分含量在 0.02 %～0.03 %范围内
（见表2）。其他10个高原藏区虎耳草样品中金丝桃
苷含量在0.02 %～0.86 %范围内（见表3）。而低海拔
地区江西、安徽两地产虎耳草样品中金丝桃苷含量
仅为0.001 %～0.002 %，见表3。
表 2 篦齿虎耳草金丝桃苷含量测定结果
Table 2 Results of hyperin content determination inSaxifraga
umbellulata var.pectinata
3 讨论
3.1 关于含量测定方法的考察 在采用HPLC法测定
金丝桃苷含量中，考察了不同填料色谱柱、不同检
测波长、不同流动相系统（甲醇 - 水、乙腈 - 水）及
不同流动相比例对分离度的影响。结果表明采用色
谱柱 Amethyst-C18-P（4.6 mm×250 mm，5μm），检
测波长为 360 nm，以乙腈-0.1%磷酸水为流动相等
度洗脱，可使待测成分的色谱峰分离度良好，理论
塔板数高。
在样品前处理中，考察了不同提取方式（超声、
mAU
2.5
2
1.5
1
0.5
0
A
5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5 25
t/min
mAU
B
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
5 10 15 20 25
t/min
编号
1
2
3
样品名称
篦齿虎耳草
篦齿虎耳草
篦齿虎耳草
样品批号
201201
2011311
20090801
金丝桃苷/mg· -1
0.3295
0.1769
0.3124
金丝桃苷百分含量/%
0.03
0.02
0.03
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样品名称
小伞虎耳草
小伞虎耳草
小伞虎耳草
狭瓣虎耳草
狭瓣虎耳草
山地虎耳草
白小伞虎耳草
唐古特虎耳草
疏叶虎耳草
疏叶虎耳草
江西虎耳草
安徽虎耳草
样品批号
20120801
2013170
2013110
2013060
2013185
2013065
2013195
2013197
2013252
2013309
2013075
2013065
金丝桃苷含量/mg· -1
0.6191
2.1362
1.1696
8.5669
0.9436
0.2174
0.1976
0.4387
0.3060
2.4893
0.0276
0.0141
金丝桃苷百分含量/%
0.06
0.21
0.12
0.86
0.09
0.02
0.02
0.04
0.03
0.25
0.002
0.001
回流）、不同溶媒用量（10，15，20，30，40 mL）以
及不同提取时间（30，45，60，90 min）等因素对供试
品溶液含量的影响，结果表明以 20 mL 甲醇超声提
取 60 min 对篦齿虎耳草药材中金丝桃苷的提取效率
最高。
3.2 关于藏区“松蒂”药材来源于多种虎耳草属基源
植物的合理性 通过测定藏区用于“松蒂”药材基
源植物的主流品种篦齿虎耳草及其近缘相关虎耳草
属植物的金丝桃苷含量，可以发现藏区“松蒂”药
材所用多种虎耳草属基源植物均含有一定量的金丝
桃苷（0.02 %~ 0.86 %），提示藏医药文献及临床将藏
区多种虎耳草属植物作为“松蒂”药材基源植物具
有一定的物质基础依据和合理性，这为扩大治疗肝
胆类疾病的药用资源的途径提供了一定的参考依据。
3.3 关于藏区产不同虎耳草样品中金丝桃苷含量的差
异 收集或采集于藏区的13个虎耳草样品共计包括
7个种及变种，其金丝桃苷的含量差异既存在种/变
种之间（0.02 %~0.86 %），也存在同物种中（狭瓣虎耳
草间相差约10倍，疏叶虎耳草间相差约 8 倍），结
合各样品的产地和生长环境分析，不同的种/变种作
为同一药材使用时，其质量可能与物种和产地均密
切相关，应进一步进行不同物种和同物种不同产地
样品间的成分组成相似度比较研究给予确认。
3.4 关于高原藏区虎耳草品种与低海拔地区虎耳草品
种金丝桃苷含量的差异 由表3的含量测定结果可
知，藏区的13个虎耳草样品中金丝桃苷含量（0.02 %
～0.86 %）显著高于低海拔地区江西、安徽两地产虎
耳草样品中含量（分别仅为0.001 %和0.002 %）。推
测金丝桃苷含量在两个地区虎耳草品种中含量的差
异可能是两地虎耳草药材品种的药用差异的内在物
质基础原因之一。
参考文献：
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（编辑：邓响潮）
表 3 其他近缘虎耳草品种金丝桃苷含量测定结果
Table 3 Results of hyperin content determination in other relative
species
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