全 文 ：收稿日期:2008-01-30;　修订日期:2008-07-28
基金项目:内蒙古医学院蒙药现代化研究重大项目(No.MX2005ZB010)
作者简介:常福厚(1962-),男(汉族),内蒙古四子王旗人 ,现任内蒙古医
学院药学院教授 ,硕士研究生导师 ,博士学位,主要从事药理学研究工作.
高效液相色谱法测定蒙药黄花铁线莲中槲皮素的含量
常福厚 ,齐　君 ,范　蕾 ,韩瑞兰 ,王敏杰 ,尹　琴
(内蒙古医学院药学院 ,内蒙古 呼和浩特　010059)
摘要:目的 测定黄花铁线莲中槲皮素的含量 ,为蒙药黄花铁线莲中槲皮素的含量提供检测方法 , 制定质控标准。方法
采用高效液相色谱法 , Kromasil(250 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱 ,甲醇-0.4%磷酸(60∶40)为流动相 , 流速为 1.0 ml/
min;检测波长 360nm。结果 槲皮素浓度在 15.35 ～ 76.75 μg/ml范围之间与峰面积线性关系良好 , r=0.999 6。槲皮素
平均回收率为 98.13%, RSD=1.55%。结论 采用高效液相色谱法测定黄花铁线莲中槲皮素的含量具有分离效果好 、简
便 、准确等优点。
关键词:黄花铁线莲;　槲皮素;　高效液相色谱法;　含量测定
中图分类号:R284.1　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)04-0911-01
　　黄花铁线莲为毛茛科植物黄花铁线莲 ClematisintricataBge.
的地上部分 , 主要分布于内蒙古 、辽宁 、河北 、山西 、陕西 、甘肃 、青
海等地 , 多生于山坡 、草地 、路边或灌木丛中。 “黄花铁线莲”名
称源于其植物名 , 其作为蒙药 “阿拉格 -特木尔 -敖日阳古 ”收
载于《中华医学百科全书》(蒙医分卷)《认药白晶鉴》《无误蒙药
鉴》《内蒙古中草药》和《内蒙古植物药志》[ 1] 《中华本草 》(蒙药
卷)中。主治胃痞 、石痞 、大肠痞 、食痞等寒性痞症。现有研究表
明 , 槲皮素具有抗炎 、抗氧化 、抗癌和抗突变 、抗心肌肥厚和降血
压等多种药理作用 [ 2 ～ 4] 。黄花铁线莲有效成分为槲皮素等黄酮
类物质 , 本实验采用高效液相色谱法测定其中槲皮素的含量 ,以
此方法控制蒙药材黄花铁线莲的质量。
1　材料与仪器
1.1　材料 黄花铁线莲(采自内蒙古呼和浩特市蛮汉山 、小井
沟 、五一水库 ,经内蒙古医学院药学院生药学教研室庞秀生教授
鉴定为毛茛科植物黄花铁线莲 ClematisintricataBge.的地上部
分),方法学考察中均采用蛮汗山所采集到的样品。槲皮素对照
品(中国药品生物制品检定所提供 ,批号:100081-200406);甲醇
为色谱纯 , 无水乙醇 、磷酸 、盐酸等试剂均为分析纯 , 水为双蒸水。
1.2 　仪器 依利特 UV-230+高效液相色谱仪(大连依利特分
析仪器有限公司):UV-230 +紫外 -可见检测器 、P230/P230p
高压恒流泵 、EC2000色谱工作站。 601超极恒温水浴(江苏省金
坛市医疗仪器厂),电子天平(JA2003,上海天平仪器厂)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 色谱柱:Kromasil(250mm×4.6 mm, 5 μm),流
动相:甲醇 -0.4%磷酸(60∶40);流速:1.0 ml/min;检测波长:
360nm;进样量为 20 μl。结果见图 1 ～ 2。
图 1　槲皮素对照品 HPLC图谱
图 2　黄花铁线莲 HPLC图谱
2.2　对照品溶液的配制 取 120℃干燥 4 h的槲皮素对照品 3
mg,精密称定 , 置 10 ml容量瓶中 ,然后加甲醇至刻度 , 摇匀 ,即得
(每毫升中含槲皮素 0.307 mg)。
2.3　供试品溶液的制备 取本品 1 g, 过 65目筛 , 精密称定 , 加
无水乙醇 16 ml, 9%盐酸 4 ml, 加热回流两次 , 30 min/次 , 抽滤 ,
合并滤液 ,置 50 ml容量瓶中 , 加 9%盐酸至刻度 , 摇匀 ,即得 。
2.4　标准曲线的制备 精密吸取 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 ml对照
品溶液分别置于 10 ml容量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀。分别吸
取 20μl注入高效液相色谱仪 , 记录峰面积。以对照品溶液浓度
为横坐标 ,对照品峰面积为纵坐标 , 进行线性回归 ,标准线性回归
方程为 Y=89.644X-71.768, r=0.999 6实验表明槲皮素浓度
在 15.35 ～ 76.75 μg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.5　精密度实验 取供试品溶液 ,重复进样 5次 , 记录峰面积并
计算 , 结果槲皮素的平均含量为 1.858 7 mg/g, RSD为 1.11%。
2.6　稳定性实验 取黄花铁线莲供试品溶液在 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6,
9 h分别进样 20 μl, 记录峰面积 , 结果 RSD为 1.05%,表明槲皮
素在 9 h内保持稳定。
2.7　重复性实验 取同一批供试品 5份 ,各约 1 g,精密称定 , 分
别按样品提取方法提取 、测定 , 结果槲皮素品均含量为 1.832
mg/g, RSD为 1.81%。
2.8　加样回收率实验 取已知含量的同一批供试品 5份 , 各约
0.5 g,精密称定 , 分别加入槲皮素标准品溶液(0.586 mg/ml)
1.45 ml, 按供试品溶液的方法处理并测定含量 , 计算加样回收
率 , 结果见表 1。槲皮素平均回收率为 98.13%, RSD为 1.55%,
结果表明本方法准确可靠。
表 1　样品中槲皮素含量加样回收率实验结果
样品
号
取样量
m/g
样品含量
C/mg· g-1
加入量
m/mg
实测含量
C/mg· g-1
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 0.491 2 0.899 9 0.849 7 1.727 6 97.41
2 0.490 8 0.899 1 0.849 7 1.719 3 96.52
3 0.497 7 0.911 8 0.849 7 1.746 8 98.27 98.13 1.55
4 0.510 6 0.935 4 0.849 7 1.790 3 100.61
5 0.514 4 0.942 4 0.849 7 1.773 7 97.84
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.4 时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期
2.9　样品含量测定 取 3个批次的样品各两份 ,每份约 10 g,精
密称定 , 按 “供试品溶液的制备”项下操作 , 取 20 μl注入高效色
谱仪 , 以色谱条件测定 ,计算槲皮素的含量 ,结果见表 2。
表 2　样品含量测定结果
供试品来源 取样量 峰面积 含量C/mg· g-1
平均含量
C/mg· g-1
蛮汉山 1.006 2 1 817.21 1.046 2 1.060 7
1.006 8 1 870.57 1.075 2
小井沟 1.005 6 1 724.83 0.995 6 0.998 9
1.004 5 1 734.74 1.002 2
五一水库 1.003 5 1 434.74 0.836 4 0.834 2
1.005 0 1 428.82 0.831 9
3　讨论
选定提取溶剂后 ,在相同水解条件下 , 分别用水浴回流提取
与超声提取处理样品 ,结果发现槲皮素总含量 , 水浴回流法比超
声提取法高一倍多 , 说明回流更有利于黄酮类物质的水解 , 因此
选定水浴回流提取的方法 [ 5] 。为了保证被测成分在回流提取过
程中能全部提净 , 实验研究中对样品提取次数作了考察 , 结果见
表 3。
表 3　提取次数的考察
提取次数 峰面积
1 　 956.55
2 3 171.53
3 3 125.90
实验结果表明加热回流提取 2次与 3次的结果基本一致 ,说
明加热回流提取 2次就可将黄花铁线莲中的槲皮素提取完全。
故将供试品的提取次数定为 2次。
波长的选择:用二极管阵列紫外检测器对槲皮素的标准品溶
液在波长 190 ～ 500 nm范围内进行扫描 , 发现槲皮素在 210, 255
nm和 360 nm波长处有特征吸收峰 , 槲皮素在 360 nm处灵敏度
较高 , 峰形较好 ,样品中槲皮素峰能达到基线分离 [ 6] 。 故最后选
定检测波长为 360 nm[ 7] 。
黄酮类成分在测定中易出现拖尾现象 ,在流动相中可加入磷
酸 , 抑制其拖尾 ,提高其峰形对称性 [ 8] 。通过对不同比例的流动
相及磷酸浓度的实验选择 ,结果发现甲醇 -水系统比乙腈 -水系
统分离效果好;甲醇增加可改善峰形 , 减少拖尾 , 但甲醇比例过
高 , 分离效果下降 , 而以甲醇 -水(60∶40)为流动相 , 分析时间
适中;磷酸的比例在 0.1% ～ 0.4%之间 , 都能保证样品的分离 ,
本文比较了甲醇 -0.4%磷酸不同比例 , 结果发现对黄花铁线莲
而言 , 选择现正文所用流动相 , 待测成分分离较好且峰形最佳。
槲皮素为黄酮类化合物 ,在槐花米 、银杏等中均有分布 ,具心
血管方面的生理活性 ,也是黄花铁线莲中的主要有效成分 , 因此
测定其含量可较好地控制产品质量 ,保证蒙医用药的安全性与有
效性。
参考文献:
[ 1 ] 　朱亚民.内蒙古植物药志 , 第Ⅰ 卷 [ M].呼和浩特:内蒙古人民出
版社 , 2000:392.
[ 2 ] 　俞一心 ,戈升荣 ,王桂珍 ,等.槲皮素及其衍生物的药理作用研究进
展 [ J] .中药材 , 2003, 26(12):902.
[ 3 ] 　谭　君 ,王伯初 ,祝连彩 ,等.槲皮素金属配合物的药理作用研究进
展 [ J] .中国药学杂志 , 2006, 41(22):1688.
[ 4 ] 　吕　蔡.槲皮素的药理作用 [ J] .国外医药 ·植物药分册 , 2005, 20
(3):108.
[ 5 ] 　郭朝辉 ,蒋生祥.高效液相色谱法测定甘肃金银花中槲皮素和木樨
草素的含量 [ J] .时珍国医国药 , 2006, 17(4):552.
[ 6 ] 　王天志 ,李永梅.金银花的研究进展 [ J].华西药学杂志 , 2000, 15
(4):292.
[ 7 ] 　张丽静 ,易新萍 ,李　革 ,等.HPLC法测定新疆贯叶连翘中芦丁及
槲皮素的含量 [ J] .新疆大学学报(自然科学版), 2007, 24(1):70.
[ 8 ] 　郭　澄 ,张　纯 ,邵元福 ,等.测定南方菟丝子中槲皮素和山萘酚的
含量 [ J] .中国药学杂志, 1999, 34(2):113.
收稿日期:2008-05-29;　修订日期:2008-11-28
基金项目:广西教育厅科研资助项目(No.桂教 2004-20)
作者简介:赵凤春(1972-),女(壮族),广西天等人 ,现任广西南宁地区教
育学院副教授 ,硕士学位 ,主要从事天然药物化学研究工作.
黄芪多糖微波提取工艺的研究
赵凤春 1 ,蒋艳忠 2
(1.广西南宁地区教育学院 ,广西 南宁　530001;　2.广西工业职业技术学院 ,广西 南宁　530001)
摘要:目的 探讨黄芪多糖的微波辅助提取。方法 以黄芪多糖的得率及纯度为考察指标 , 以水为提取剂 , 采用正交设计
实验的方法 , 研究了黄芪多糖的微波提取工艺。结果 确定的优化条件为:微波功率 360W,提取时间 10 min, 液固比为 5
∶1 (ml∶g), 测得样品中多糖得率和纯度分别为 3.28%, 46.56%。结论 与直接加热提取法相比 ,微波提取能缩短提取
时间 , 提高了提取效率。
关键词:黄芪多糖;　微波;　提取;　正交实验
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)04-0912-02
　　从蒙古黄芪中提取的黄芪多糖是一种杂多糖 , 由葡萄糖 、鼠
李糖 、阿拉伯糖 、半乳糖和葡萄糖醛酸等单糖组成 [ 1] 。研究表
明 , 黄芪多糖具有增强机体免疫功能 、强心降压 、降血糖 、抗应激 、
抗肿瘤 、抗病毒 、抗辐射 、抗氧化等多种药理功效 [ 2] 。目前对黄
芪多糖提取的研究 , 多集中在加热浸提上 [ 3 ～ 5] , 而用微波辅助提
取工艺优化条件的研究少有报道。本工艺对此进行了研究 ,确定
了优化条件 , 并与加热浸提法进行了比较。
1 　材料与仪器
黄芪 , 购自广西南宁市一心药业公司 , 经分析 , 符合《中国药
典》 2005年版Ⅰ部 “黄芪”项下有关规定。
98%硫酸 、苯酚 、 95%乙醇 、葡萄糖 , 以上试剂均为分析纯。
苯酚使用前经蒸馏处理 ,收集 180 ～ 182℃馏分待用。
UV-2501PC型紫外可见分光光度计(日本岛津公司);BS
124S电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);LABOR-
TA4000旋转蒸发器(德国 Heidolph公司);101A-E1电热鼓风
干燥箱(上海实验仪器厂有限公司);NJL07 -3微波萃取器(南
京杰全微波设备有限公司)。
2　方法与结果
2.1　黄芪多糖的测定方法 采用苯酚 -硫酸法 [ 6]测定 , 以葡萄
糖为标准样品。多糖在浓硫酸的作用下能水解生成单糖 ,并迅速
脱水形成糠醛衍生物 ,然后与苯酚缩合成有色化合物 , 可用分光
光度法测定其吸光度 ,确定其提取效果。
2.2　微波提取条件的优化 将黄芪药材在恒温干燥箱中于 60
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.4