全 文 ：HPLC测定田基黄注射液中槲皮素含量
虞金宝 , 　吕武清 , 　李才堂 , 　李　晶 , 　宋友昕
(江西省中医药研究院 ,江西 南昌 , 330077)
收稿日期:2003-08-19
作者简介:虞金宝(1966～ ),男 ,江西铅山人 ,副研究员 ,主要从事中药制剂及质量标准研究 ,电话:0791-8501404。
关键词:田基黄注射液;槲皮素;HPLC
摘要:目的:测定田基黄注射液中槲皮素的含量。方法:采用 H PLC法测定田基黄注射液中槲皮素的含量 ,以 C18为固定
相 , 甲醇 - 0. 2%磷酸(52∶48)为流动相 , 检测波长 260nm。结果:线性范围 0. 092 ～ 0. 92μg,平均回收率为 98. 3%, RSD
为 2. 9%。结论:该方法可作为田基黄注射液的含量测定方法。
中图分类号:R927. 2　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2005)01-0100-02
　　田基黄注射液收载于中国药典 1977年版一部 , 是由地
耳草(田基黄)单味药制成的注射液 , 功能为清热利湿 , 散瘀
消肿。用于病毒性肝炎属肝胆湿证者 ,临床研究证明 ,田基
黄注射液对急性黄疸型和非黄疸型肝炎疗效较好 , 对迁延
性 、慢性肝炎也有一定疗效 [ 1] 。田基黄含槲皮苷 ,异槲皮苷 、
槲皮素-7-鼠李糖苷 [ 2] ;3, 5, 7, 3′, 4′-五羟基黄酮-7-鼠李糖
苷 [ 3]等黄酮类成分。我们对田基黄注射液中的槲皮素进行
了含量测定 , 实验方法如下。
1　仪器与药品
HP-1100高效液相色谱仪(美国), HP化学工作站 , DAD
检测器 , 四元梯度泵 , 槲皮素对照品 (含量测定用 , 批号:
0081-9304, 中国药品生物制品检定所),甲醇为色谱纯 , 水为
重蒸馏水 , 其它试剂均为分析纯。
田基黄注射液(江西众鑫药业有限公司)批号:991104、
991127、20000718、 20010914、 20010915、 20011202、 20020312、
20020313、20020418、20020419。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件　参照文献 [ 4]对田基黄注射液中的槲皮素含
量测定进行实验研究 ,色谱柱:A lltech C
18
4. 6 mm ×250 mm,
流动相:甲醇 - 0. 2%磷酸(52∶48), 流速:1 mL m in- 1 , 检
测波长 260 nm ,柱温:室温。 在此条件下对照品 、供试品在
约 9 m in相同时间有一色谱峰 ,见图 1。
2. 2　水解条件的选择　取注射液直接进样测定 , 结果槲皮
素含量极低;参照文献 [ 4]对注射液进行水解 ,经测定 ,槲皮素
含量较高且杂质峰少。由此说明注射液中槲皮素主要以糖
苷形式存在 , 因此 , 分别对加酸量和水解时间进行了研究。
取注射液 3份 ,每份 5 m L, 各加甲醇 15 mL, 再分别加盐酸
0. 5, 1, 2 mL,加热水解 30 m in, 放冷 , 转移至 25 m L量瓶中 ,
加甲醇至刻度 , 摇匀 , 照上述色谱条件测定 , 结果加酸量以
1 m L为佳。
据此 , 我们又分别考察水解时间对槲皮素的影响 ,取注
射液 3份 , 每份 5 mL, 各加甲醇 15 m L盐酸 1. 0 mL, 分别加
图 1　田基黄注射液 HPLC色谱图
A槲皮素　B田基黄注射液
热水解 30, 45, 60, 90 m in, 放冷 , 转移至 25 mL量瓶中 , 加甲
醇至刻度 ,摇匀 , 照上述色谱条件测定 , 结果水解 30 m in到
90 m in结果无明显差异 , 故选用水解 30 m in。
2. 3　线性关系的考察
对照品溶液的配制　精密称取在槲皮素对照品 4. 6
m g, 置 50 m L量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 即得每 1 mL含
0. 092 m g槲皮素的对照品溶液。
线性关系考察　分别精密吸取对照品溶液 1, 2, 4, 6, 8,
10 m L至 10 m L量瓶中 , 加甲醇稀释成以下浓度:0. 0092,
0. 0184, 0. 0368, 0. 0552, 0. 0736, 0. 092 mg m L -1。分别精
密吸取 10 μL,注入液相色谱仪中 , 按上述色谱条件测定对
照品峰面积 ,将样品浓度与峰面积进行回归处理 , 回归方程
为:Y =9000. 96X +16. 96(注:X为浓度 , μg mL - 1;Y为峰
面积)r=0. 99976(n =6), 槲皮素对照品在 0. 092 ～ 0. 92μg
范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。
2. 4　稳定性试验　取田基黄注射液 , 照含量测定方法项下
水解 ,精密吸取供试品溶液 10 μL, 按上述色谱条件 , 每隔
0. 5 h或 1 h, 测定供试品溶液中槲皮素峰面积值 , 共测定 4
h, 结果经数据处理 RSD为 2. 0 。
100
2005年 1月
第 27卷　第 1期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
January 2005
Vo .l 27　No. 1
2. 5　精密度试验　取田基黄注射液 ,照上述条件水解 , 精密
吸取供试品溶液 10μL, 按上述色谱条件 , 重复进样 5次 , 测
定供试品溶液中槲皮素峰面积值 , 结果经数据处理 RSD 为
1. 6 。
2. 6　重复性试验　取同一批样品 ,共 6份 , 照含量测定项下
实验方法制成供试品溶液 , 按上述色谱条件进行测定 ,测定
结果经数据处理 RSD 为2. 8 。
2. 7　加样回收率试验　分别精密吸取田基黄注射液 5 mL,
共 5份 , 置 100 mL园底烧瓶中 , 各精密加入槲皮素对照品
(1. 25 mg m L- 1)1 mL, 加甲醇 15 mL、盐酸 1 mL, 混合均
匀 , 按含量测定项下操作 ,作为供试品溶液;分别精密吸取对
照品溶液与供试品溶液各 10 μL,注入液相色谱仪 , 测定 , 计
算回收率 , 结果见表 1。
表 1　 　回收率测定结果
样号 样品中槲皮素量(m g)
加入槲皮
素量(mg)
测出槲皮
素量(mg)
回收率
( )
统计
结果
1 0. 7629 1. 25 2. 0455 102. 6
2 0. 7629 1. 25 2. 0100 99. 8 X =98. 3
3 0. 7404 1. 25 1. 9419 96. 1
4 0. 7404 1. 25 1. 9581 97. 4 RSD =2. 9
5 0. 7404 1. 25 1. 9374 95. 8
表 2　 　田基黄注射液中槲皮素含量
批号 槲皮素含量(m g 支) 批号
槲皮素
含量(mg 支 - 1)
991104 0. 2629 20011202 0. 3084
991127 0. 2845 20020312 0. 2995
20000718 0. 3015 20020313 0. 3211
20010914 0. 3282 20020418 0. 3312
20010915 0. 3300 20020419 0. 3100
2. 8　样品测定　精密吸取本品 5 m L, 置园底烧瓶中 , 加甲
醇 15 mL、盐酸 1 m L,混合均匀 , 加热水解 30 m in, 放冷后转
移至 25 mL量瓶中 ,用甲醇洗涤园底烧瓶 ,洗液并入量瓶中 ,
加甲醇至刻度 ,摇匀 , 作为供试品溶液;分别精密吸取对照品
溶液与供试品溶液各 10 μL, 注入液相色谱仪 , 测定 , 计算 ,
即得。结果见表 2。
3　讨论
实验中发现 ,田基黄注射液中主要为黄酮类成分 , 尚含
少量氨基酸;另外 , 在分别对田基黄药材和制剂水解产物中
的槲皮素测定结果发现 , 田基黄制成注射液后 , 其黄酮类成
分的转移率不足 5 (“HPLC法测定田基黄药材中槲皮素的
含量”将另文报道),这主要是由于槲皮素几乎不溶于水 ,槲
皮苷几乎不溶于冷水 ,溶于乙醇 、碱性水溶液 [ 5] ,且田基黄注
射液系采用水煎煮工艺制成。根据人们对黄酮类化学元素
成分的研究发现 ,黄酮类化合物除了具有对心脑缺血损伤 、
心律失常的保护作用以及镇痛作用外 , 对肝损伤也具有保护
作用 [ 6] ,像水飞蓟黄酮 、艾纳香总香酮 、甘草类黄酮 、淫羊藿
黄酮 、黄芪素等黄酮类成分对肝损害均具有较显著的保护作
用。如果田基黄中抗肝损害的有效成分也主要是黄酮类成
分 ,那么现在田基黄注射液的生产工艺不利于黄酮成分的溶
出 ,则大大影响了田基黄注射液的临床疗效。
参考文献:
[ 1] 　国家中医药管理局中华本草编委会 ,中华本草 [M ] . 上海:上
海科学技术出版社 , 1999:598.
[ 2] 　徐礼焱 ,刘爱茹.地耳草中槲皮甙的库伦滴定法 [ J] .药物分析
杂志 , 1987, 7(50):280-282.
[ 3] 　顾国明 ,冯淑珍 ,王小燕. 地耳草中一种黄酮类化合物的分离
和结构测定中草药 [ J] . 1983, 14(8):11-12.
[ 4] 　中华人民共和国药典 (一部)[ S ] . 北京:化学工业出版社 ,
2000:257.
[ 5] 　国家药品监督管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手
册 [M ] .北京:人民卫生出版社 , 1986:876.
[ 6] 　黄河胜 ,马传庚 , 陈志武. 黄酮类化合物药理作用研究进展
[ J] .中国中药杂志, 2000, 25(10):589-592.
薄层扫描法测定复方抗甲片中黄芪甲苷的含量
宋吉莲 1 , 　张冬梅 1 , 　刘　兵2
(1.威海市药品检验所 ,山东 威海 264200;2.威海市职业学院 山东 威海 264200)
收稿日期:2003-08-25
作者简介:宋吉莲(1932～ ),女 ,山东威海人 ,主管中药师 ,主要从事中药分析和质量标准研究 ,电话:13963109818。
关键词:TLC-S;复方抗甲片;黄芪甲苷
摘要:目的:用薄层扫描法测定复方抗甲片中黄芪甲苷的含量。方法:样品经皂化并用氯仿 、正丁醇等溶剂处理 ,展开后 ,
于 λS =510 nm , λR =610 nm处扫描。结果:测得该片中黄芪甲苷含量为 0. 0317 ,平均回收率为 96. 04 , RSD 为1. 1 。
结论:可作为该复方制剂中黄芪甲苷的含量测定方法。
中图分类号:R927. 2　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2005)01-0101-02
101
2005年 1月
第 27卷　第 1期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
January 2005
Vo .l 27　No. 1