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南川百合组织培养研究



全 文 :第 8卷 第 9期
2006年 9月 中国现代中药 Vo l.8, NO.9Sep. 2006È
32  / S INO -TCM
The Ch inese medicine resources
中药资源
[通讯作者 ]  *刘燕琴 , E -m ail: sasa1976@ tom. com。
南川百合组织培养研究
刘燕琴* , 胡开治 , 肖波 , 谢贤明 , 刘杰
(重庆市药物种植研究所 , 重庆 408435)
[摘要 ] 目的:应用组培知识 , 研究南川百合组培诱导小鳞茎技术 。方法:在 M S培养基上添加不同的激素配
比 , 采用鳞片的不同部位为外植体。 结果:筛选出外植体诱导产生小鳞茎的最佳培养基 M S+6 - BA2. 0m g L - 1 +
NAA0. 5 m g L - 1 +GA2. 0 m g L - 1;鳞片的下部小块分化率最高 , 为 90. 0%。结论:采用组织培养方式可进行南
川百合的快速繁殖 , 可以为人工种植发展提供大量优质的种源。
[关键词 ] 南川百合;组织培养
  南川百合 Lilium rosthornii D ie ls为百合科百合属多
年生草本植物 , 原产地为重庆南川市金佛山周围 , 海
拔 350 ~ 1 100m的山沟 , 溪边 , 林下 , 6 ~ 9月为开花
期。其药用部分是干燥的肉质鳞片 , 具有养阴润肺 ,
清心安神的功效。开花期长 , 花色呈红黄色 、黄色 ,
花型呈卷丹样 , 花被有紫色斑点 , 质感平滑 , 观赏价
值极高。近年来 , 大量的野生资源被采挖 , 破坏 , 现
存的资源已十分有限 , 急需进行人工保护和发展 , 否
则将面临着灭绝的境地。但是 , 南川百合种子大量败
育 , 而鳞茎的繁殖数量非常有限 , 这就大大阻碍了南
川百合的繁殖发展。所以 , 运用组培方法研究南川百
合的小鳞茎繁殖技术就显得十分必要。
1 材料
采摘于金佛山周围的林下 , 山沟的新鲜的
材料。
2 方法
2.1鳞茎诱导小鳞茎的试验
取采下的新鲜鳞茎 , 去泥沙和腐烂的部位 , 在
自来水下冲洗净 , 洗衣粉浸泡 2h , 流水冲洗 1h ,
用 75%的酒精浸泡 30s, 0.1%的升汞处理 10m in ,
再无菌水冲洗 4次 , 最后用无菌纸吸干 , 以备用
(以下的消毒方法相同)。
在超净工作台上 , 将鳞茎片切成 0.5 ~ 1.0cm2
的小块 , 然后随机接种到培养瓶中 , 每组 20瓶 ,
每瓶一块。置于培养室内培养 , 培养条件:温度
(25±2)℃, 光照强度 3000 lx, 光周期为 12h d-1
(下同 )。
本试验以 MS为基本培养基 , 通过附加不同浓
度的 NAA 、 6 -BA、 GA , 设计了 6组培养基。其编
号 、成分见表 1。
表 1 由鳞片诱导小鳞茎的培养基及诱导结果
编号 NAA /m g L - 1 6 - BA /m g L -1 GA /m g L - 1 污染数 诱导数 诱导率 /% 分化在鳞片上的平均鳞茎数
1 0 0 0 4 3 18.7 1. 3
2 0. 5 0 0 3 5 29.4 1. 6
3 0. 5 0.5 0.5 2 6 33.3 2. 1
4 0. 5 1.5 1.0 5 8 53.3 3. 2
5 0. 5 2.0 2.0 3 11 64.7 3. 5
6 0. 5 2.5 3.0 4 9 56.3 3. 0
  注:接种数为 20
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2.2鳞片的不同部位诱导小鳞茎能力的试验
本试验按培养材料来源不同 , 设计了 3个处
理 , 将百合鳞片依照上述方法消毒后 , 将同一鳞片
按上 、 中 、 下 , 3个部位切割 , 分别接种 , 每一处
理 50 瓶 , 每一瓶接种 3片 。统一采用 MS +
NAA0.5mg L - 1 +GA2.0mg L -1 +6 -BA2.0mg L- 1
培养基培养 , 培养条件同上。
3 结果
3.1 NAA , GA , 6 - BA不同浓度配比对鳞片诱导
小鳞茎的影响
  培养 8d后 , 从外植体近轴面基部出现启动迹
象 , 形成一些淡绿色的小突起 , 随培养时间的延
长 , 小突起为鳞茎样 , 进一步膨大成小鳞茎 , 为绿
色带褐斑 、 簇生 、形状规则。每块产生小鳞茎数目
不一 , 少的 1到 2个 , 多的 5到 6个。培养 60d进
行统计 , 见表 1。
由表 1可知 , 无激素的 MS培养基诱导作用
最小 , 诱导率仅为 18. 7%, 产生的小鳞茎数少 。
当培养基中存在 NAA 、 6 - BA、 GA时 , 诱导作
用明显增强 , 小鳞茎数也相应增加 。当 NAA固
定为 0. 5mg L -1 , 6 - BA、 GA浓度逐渐提高时 ,
诱导率和小鳞茎数也逐渐上升 。当 6 - BA , GA
都为 2.0mg L - 1时 , 诱导率达最高 。在一定范围
内 , 高浓度的激素促进鳞茎片的分化 , 但浓度过
高时 , 促进作用减弱 , 甚至出现玻璃化现象 。所
以 , 选择出最适合小鳞茎诱导的培养基是 MS +
NAA0. 5 mg L -1 + 6 - BA 2.0mg L - 1 +
GA 2.0 m g L - 1。
3.2鳞片不同部位对小鳞茎诱导的影响
接种培养 60d时统计 , 结果见表 2。
表 2 鳞茎不同部位的诱导率
部位 污染数 诱导数 诱导率 /%
上 10 2 5. 0
中 12 6 15. 8
下 10 36 90. 0
  注:接种数为 50
从表 2可知 , 同样在最佳培养基上培养 , 鳞片
不同部位的诱导率差异极大 , 其中鳞片的下部诱导
率最高 , 为 92.5%;中部次之 , 为 15.8%;上部
最小 , 仅为 5.0%。这和鳞片扦插时小鳞茎发生都
集中在鳞片近轴面基部是一致的。分析原因 , 可能
跟鳞片的内源激素的分布有关 , 也可能与不同部位
的细胞生理化特性有关。
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(收稿日期 2006-05-22)