全 文 ：二棱裸大麦茎尖愈伤组织的
诱导及植株的再生 月
一 杨乃博 唐 惕
〔中国科学院上海植物生理研究所细胞生理室 )
为了配合我室原生质体培养以及体细胞
杂交研究工作 , 进行了二棱裸大麦 ( H or d -
e : ;。 d i s t宕c h o n v a r 。 n u d u 。 )体细胞愈伤组织
的诱导及再分化成苗的研究 ( 19 7 5一 1 97 6 ) 。
目前国内外关于大麦组织培养工作的报导较
少①②⑥⑥ , 尤其是国内有关裸大麦茎尖愈伤
组织的诱导及其植株的再分化未见报导 , 现
将 一试验结果简述于下 。
材料和方法
采用 B 。④培养基为基本培养基 , 比较了
不同含量的 2 , 4 一 D , N A A , K T (激动素 ) ,
肌醇等组分对愈伤组织增殖速度及分化的影
响 。 各处理均补加水解乳蛋 白0 . 5克 /升 。 固体
培养基添加琼脂 0 . 8 一 1% , p H值为 5 . 4一 5 . 8 ,
培养基于 12 1℃下高压蒸汽灭菌 30 分钟 。 在
无菌室内 , 从培养 2~ 3周 的 无菌 苗中切取
0
.
5~ l厘米带有叶原基的茎尖 , 并接种于培
养基上 , 培养物放在 25 ℃ 、 光强约 2 0 0 0勒克
斯 、 每 日照光 12 小时的 条件 下进 行静 置培
养 , 或在转速为 1 4 转 /分的旋转式摇床上进
行液体振荡培养 。
结果与讨论
裸大麦茎 尖在 B 。 + Z p P m Z , 4 一 D + 0 . 2 5
p p m K T , 以及 B 。 + s p p rn Z , 4 一 D + 0 . 2 5 p p m
K T , 的固体培养基上均能诱 导出愈 伤组织
(图 D通常在 SP p也 2 , 4一 D 培养基上 , 愈伪组辣的诱导速度稍快于 Z p p m Z , 4一 D 。 在培养
5一 7天后 , 就能从切 口基部长出白色较紧密
的愈伤组织 , 个别刚诱导的或经继代培养的
愈伤组织在培养过程中 (5 ~ 12 周 ) 逐渐 分化
出正常的叶或叶状体 , 并且还观察到愈伤组
织的增殖生长与叶分化同时进行的现象 ( 图
2 )
。 在培养基中提高肌醇的 浓度 ( 4 0 毫
克 /升 ) 对愈伤组织的影响并不明显 。
由于这些叶状体在 原培 养基 上 生长迟
缓 , 较难成苗 , 因此我们将培养物分别移到
下列分化与成苗的培养基内 : B 。 ` Z p p m Z , 凌
一
D + 0
.
2 5 p p m K T ; B
S + I P p m Z
, 4
一
D + 0
.
2 5
p p m K T , B
S + Z p p m N A A + 0
。
2 5 p p m K T
,
B
。 + 一p p m N A A + o . 2 5 p p m K T 。 试验结果
表明 , 虽在这些培养基上 , 均获得小苗 ( 图
3 )
。 但以 B 。 十 l p p m N A A + 0 . 2 5 p p m K T
的效果为最佳 , 几乎全部接种的愈伤组织均
分化成苗。 再生小苗经盆栽可生长成健康的
植株 ( 图 4 ) , 并开花结籽 ( 图 5 ) 。
液体振荡培养的试验表明 , 培养在加有
Zp p m Z
, 4
一
D和 0 . 2 5 p p m K T的 B 。培养基中 ,
从茎尖能直接诱导形成愈伤组织 , 愈伤组织
形态呈白色颗粒状与固体培养的不同 。 和固
体培养情况相似 , 随着培养时间的延长 , 能
从颗粒状愈伤组织中分化出叶状体 , 并也观
察到愈伤组织的增殖生长与叶或叶状体的分
化同时进行 的现象 ,但如不及时转移叶状体 ,
它的进一步生长明显受阻 , 当将具有分化叶
状体的颗粒状愈伤组织移至含有 l p p m N A A
和 o . 2 5 p p m K T 的 B 。液体培养基中 , 叶状 体
DOI : 10. 13592 /j . cnki . ppj . 1980. 06. 013
就能继续生长形成带根的健壮的苗 。
此外 , 我们也观察到裸大麦茎尖愈伤组
织的分化能力随着继代培养的次数增加而逐
渐减弱 , 并有白化苗的出现 ( 图 6 ) , 这些
现象对于利用裸大麦茎尖愈伤组织迸行体细
胞杂交研究是不利的 , 这些问题值得进一步
研究和探讨 .
〔 1 ) 梁竹青等 , 19了7 : 花药培养学术讨论文集 . 2的
页 , 科学出版社
〔 2 〕 范家烨 , 1 9了7 : 花药培养学术讨论文集 . 2 9 页
利· 学出版社 .
〔 3 〕 M u r a s il i g e , T . , a n d Sk o o g . F . 。 1062 . P h y s io l
P l
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〔 4 〕 G a m b o r g , O . L . , e t a l . l g 3 8 : E x P . C e ll R e s .
5 0 : 1 5 1一 15 8 .
〔 5 〕 N o r s t o g . K . 1 9 7 0 : D e v e l o p . B io l . , 2 3 : 665一6 7 0
〔 6 〕 C h e n g . T . Y . a n d s m i th , H . H . , 1马7 6 : P l a n t a ,
123 ( 3 )
: 3 0 7一 3 1 0 .
参 考 文 献 〔1 9 8 0年 2月 1 2日收到 〕
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图版说明: 1 .培养三个月的茎尖愈伤组织 , 培养基为 B 。 + SP p m Z , 4 ~ D + 。 . 2 5 p p m K T
2
. 在愈伤组织增殖的同时发生芽的分化过程 , 培养基为 B 。 + Z p p m Z , 4 一 D 十。 . 25 p p m K T
3
.从愈伤组织发生的幼苗 , 培养基为 B 。 + IP p m N A A + 。 . 2 5P p m K T
4
.再生植株移栽入土壤内 , 培养在人工气侯室内2。℃ , 光强约 1万米蚀光 , 日照 10’J 、时。
弓.再生植株正常开花和结子 。
6
.继代培养5代的茎尖愈伤组织形成的白化幼苗 。
4 3