全 文 ：亚 太 传 统 医 药
Asia-Pacific Traditional Medicine
Vol. 6 No.3%
Mar. 2010
第 6 卷 第 3 期
2010 年 3 月
收稿日期：2010－01－03
基金项目：内蒙古医学院蒙药现代化研究重大项目（MX2005ZB010）
作者简介：王阳（1968-），男，满族，内蒙古呼和浩特人，内蒙古医学院第一附属医院主管药师，从事药物分析研究工作。
高效液相色谱法测定大瓣铁线莲中槲皮素的含量
王 阳 1，马 佳 2，常福厚 2
（1.内蒙古医学院第一附属医院，内蒙古 呼和浩特 010059；
2.内蒙古医学院 药学院 药理学教研室，呼和浩特 010059）
摘 要：目的：测定大瓣铁线莲中槲皮素的含量，为蒙药大瓣铁线莲中槲皮素的含量提供检测方法，制定质控
标准。 方法：采用高效液相色谱法，Kromasil（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，甲醇—0.4％磷酸（64：36）为流动相，
流速为1.0mL ／ min； 检测波长360nm。 结果： 槲皮素浓度在11.77～58.75μg ／ mL范围内呈良好的线性关系，r＝
0.9998，槲皮素平均回收率为101.2％，RSD＝1.96％。 结论：采用高效液相色谱法测定大瓣铁线莲中槲皮素的含
量，具有分离效果好、简便、准确等优点。
关键词：大瓣铁线莲；槲皮素；高效液相色谱法；含量测定
中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1673－2197（2010）03－0039－03
大瓣铁线莲为毛茛科植物大瓣铁线莲 Clematis
macropetala Ledeb.的地上部分，主要分布于东北、华北、西
北等地区，生于山地林下、林缘草甸。大瓣铁线莲作为蒙药
“哈日—特木尔—敖日阳古”，收载于《中华医学百科全书》
（蒙医分卷）、《认药白晶鉴》、《无误蒙药鉴》、《内蒙古中草
药》和《内蒙古植物药志》［1］、《中华本草》（蒙药卷）中。 主治
肝热、肺热、肠刺痛、热泻。 现有研究表明，槲皮素具有抗
炎、抗氧化、抗癌、抗突变、抗心肌肥厚和降血压等多种药
、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、
Determination ofQuercetin inClematisMacropetala byHPLC
Wang Yang1，Ma Jia2，Chang Fuhou2
（1.Drugstore of the First Affiliated Hospital of Inner Mongolia，Huhhot 010059，China；2.Department of
Pharmacology，Pharmaceutical School of Inner Mongolia，Huhhot 010059，China）
Abstract：Objective:To determine the content of quercetin in Clematis macropetala.Methods:A HPLC method was established using
Kromasil （250mm×4.6mm，5μm）with the mobile phase consisting of methanol-0.4% phosphorous acid （64:36），the flow rat was at 1.0
mL/min and the UV detection wavelength was at 360nm.Results:The calibration curves were liner in the range of 11.77~58.75μg/mL，r=
0.9998.The average recovery of a content was 101.2%, RSD=1.96%.Conclusion：Determination of quercetin in Clematis macropetala by
HPLC was satisfactory separation effect, simple and accurate.
Key Words:Clematis Macropetala；Quercetin；HPLC；Content Determination
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（责任编辑：姜付平）
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理作用［2－4］。 大瓣铁线莲有效成分为槲皮素等黄酮类物质，
本文采用高效液相色谱法测定其中槲皮素的含量，以此方
法控制蒙药材大瓣铁线莲的质量。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
依利特 UV－230＋高效液相色谱仪 （大连依利特分析
仪器有限公司）：UV－230 紫外—可见检测器、P230 ／ P230p
高压恒流泵、EC2000 色谱工作站、Kromasil 柱（4.6mm×200
mm，5μm， 大连依利特分析仪器有限公司）；601 超极恒温
水浴（江苏省金坛市医疗仪器厂）；电子天平（JA2003，上海
天平仪器厂）。
1.2 实验材料
大瓣铁线莲（采自内蒙古呼和浩特市蛮汉山、小井沟、
五一水库，经内蒙古医学院药学院生药学教研室庞秀生教
授鉴定为毛茛科植物大瓣铁线莲 Clematis macropetala
Ledeb.的地上部分）。 方法学考察中均采用蛮汉山所采集
到的样品。槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所提供，
批号 100081－200406）；甲醇为色谱纯，无水乙醇、磷酸、盐
酸等试剂均为分析纯，水为双蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Kromasil （250mm×4.6mm，5μm）， 流动相：甲
醇—0.4％磷酸（64：36）；流速：1.0mL ／min；检测波长：360nm；
进样量为 20μL。 结果见图 1、图 2。
图 1 槲皮素对照品 HPLC 色谱
图 2 大瓣铁线莲 HPLC 色谱
2.2 对照品溶液的配制
精密称取 120℃干燥 4h的槲皮素对照品适量，加甲醇
制成每 1mL 中含槲皮素 35μg 的溶液，摇匀，（经高效液相
色谱归一化法测定含量为 96％）即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品粉末（过 65 目筛）1g，精密称定，加无水乙醇
16mL，9％盐酸 4mL，加热回流 2 次，每次 30min，抽滤，合
并滤液，置 50mL 容量瓶中，用 9％盐酸洗涤容器，洗液并
入同一量瓶中，然后加 9％盐酸至刻度，摇匀，取续滤液，即
得。
2.4 内标物溶液制备
精密称取内标物适量， 用乙腈制成 0.196g·L－1 的溶
液，作为内标物溶液。
2.5 标准曲线的制备
精密吸取 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL对照品溶液分别置于
10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。以峰面积对溶液浓度
进行回归分析， 回归方程为 Y＝97.146X－195.71，r＝0.9998，
结果显示浓度在 11.77～58.75μg ／mL 范围内呈良好的线性
关系。
2.6 加样回收率实验
取已知含量的同一批供试品 5 份，各约 0.5g，精密称
定，分别加入槲皮素标准品溶液（0.398mg ／ mL）1.7mL，按
供试品溶液的方法处理并测定含量， 计算加样回收率，结
果见表 1。槲皮素平均回收率为 101.2％，RSD为 1.96％，结
果表明本方法准确可靠。
表 1 样品中槲皮素含量加样回收实验结果
样品
号
取样量
（g）
样品含量
（mg/g）
加入量
（mg）
实测含量
（mg/g）
回收率
（%）
平均
（%）
RSD
(%)
1 0.4955 0.673 0.6766 1.336 98.0
101.2 1.96
2 0.5072 0.6889 0.6766 1.383 102.6
3 0.5063 0.6877 0.6766 1.3819 102.6
4 0.5068 0.6884 0.6766 1.3804 102.3
5 0.5037 0.6842 0.6766 1.3646 100.6
2.7 样品含量测定
取 3 个批次的样品各两份，每份约 1g，精密称定，按
“供试品溶液的制备” 项下操作， 取 20μL 注入高效色谱
仪，以色谱条件测定，计算槲皮素的含量，结果见表 2。
表 2 样品含量测定结果
供试品来源 取样量 峰面积 含量（mg/g） 平均含量（mg/g）
蛮汉山
1.0062 1817.21 1.0462
1.0607
1.0068 1870.57 1.0752
小井沟
1.0056 1724.83 0.9956
0.9989
1.0045 1734.74 1.0022
五一水库
1.0035 1434.74 0.8364
0.8342
1.0050 1428.82 0.8319
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3 讨论
选定提取溶剂后，在相同水解条件下，分别用水浴回
流提取与超声提取处理样品， 结果发现槲皮素总含量，水
浴回流法比超声提取法高一倍多，说明回流更有利于黄酮
类物质的水解，因此选定水浴回流提取的方法 ［5］。 为了保
证被测成分在回流提取过程中能全部提净，实验研究中对
样品提取次数作了考察，实验结果表明加热回流提取 2 次
与 3次的结果基本一致，说明加热回流提取 2 次就可将大
瓣铁线莲中的槲皮素提取完全。故将供试品的提取次数定
为 2次。
波长的选择：用二极管阵列紫外检测器对槲皮素的标
准品溶液在波长 190～500nm 范围内进行扫描， 发现槲皮
素在 210、255 和 360nm 波长处有特征吸收峰， 槲皮素在
360nm 处灵敏度较高，峰形较好，样品中槲皮素峰能达到
基线分离［6］，故最后选定检测波长为 360nm［7］。
黄酮类成分在测定中易出现拖尾现象， 在流动相中可
加入磷酸，抑制其拖尾，提高其峰形对称性［8］。 通过对不同
比例的流动相及磷酸浓度的实验选择， 结果发现甲醇—水
系统比乙腈—水系统分离效果好；甲醇增加可改善峰形，减
少拖尾， 但甲醇比例过高， 分离效果下降， 而以甲醇—水
（64：36） 为流动相， 分析时间适中； 磷酸的比例在 0.1％～
0.4％之间，都能保证样品的分离，本文比较了甲醇—0.4％磷
酸不同比例，结果发现对大瓣铁线莲而言，选择本文所用流
动相，待测成分分离较好且峰形最佳。 有多种文献报道，槲
皮素的含量测定方法主要有梯度洗脱 ［9］和等度洗脱 ［10，11］等
方法，在本次实验中，我们通过对两种方法的比较发现，本
文所采用的梯度洗脱的方法，具有简单、快速、仪器损耗低、
试剂要求低、柱效高、分离度好等特点，可用于槲皮素在大
瓣铁线莲中的含量测定。笔者在实验中发现，槲皮素在室温
下不稳定，当做回收率实验时，标准品和对照品都应现用现
配，以保证标准溶液的质量。
槲皮素为黄酮类化合物，在槐花米、银杏等中均有分
布，具有心血管方面的生理活性，也是黄花铁线莲中的主
要有效成分，因此应用本方法回流提取的样品，符合定量
要求，因此该方法可用于槲皮素在大瓣铁线莲中的含量测
定，可较好地控制产品质量。 未来此种方法是否能应用于
同类蒙药，保证蒙医用药的安全性与有效性，值得深入探
讨。
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（责任编辑：胡 静）
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