全 文 ：中南药学 2015 年 2 月 第 13 卷 第 2 期 Central South Pharmacy. February 2015, Vol.13 No.2
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菝葜（Smilax china L.）又名金刚藤、金刚刺、铁菱
角、马加勒、筋骨柱子、红灯果等 [1]，属多年生藤本落
叶攀附植物。主要分布 于长江以南各省区，如湖南、湖
北、浙江、广东、贵州等地。其中以湖南省储藏量大。
传统中医认为菝葜性味甘、微苦、涩，平，具有利湿去
浊、祛风除痹、解毒散瘀的功效 [2]。以其为主要原材料
制剂多年来在临床运用广泛且疗效佳，越来越多的药厂
生产以菝葜为主要原材料的相关制剂。周艳林等 [3-4]分别
对菝葜药材脂溶性成分和黄酮类成分运用 HPLC指纹图
谱进行了分析。杨立勇等 [5]对贵州产菝葜及其混淆品光
叶菝葜的指纹图谱进行了综合分析比较。本试验以湘产
菝葜为研究对象，以落新妇苷和黄杞苷作为对照，进行
HPLC指纹图谱分析，以期为更好的开发利用湘产菝葜，
并保证其制剂安全有效，质量可控。
1 仪器与试药
1.1 仪器及数据处理软件
Agilent1200 液相色谱仪（VWD 检测器，Agilent
Technologies），KQ-超声清洗仪（昆山超声仪器有限公
湘产菝葜高效液相色谱指纹图谱的研究
徐贝，刘应蛟，喻亚飞，李小珍，刘塔斯 *（湖南中医药大学，长沙 410208）
摘要：目的 建立湘产菝葜的高效液相色谱指纹图谱。方法 采用 Ultimate XB-C18（4.6 mm×250 mm，5
μm）色谱柱，以乙腈 -0.1%磷酸溶液为流动相，进行梯度洗脱，体积流量 1 mL·min－ 1，柱温 35 ℃，检
测波长 290 nm，运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A版”软件处理图谱。结果 10批菝葜药材
HPLC指纹图谱共标定 16个特征峰，10批样品的相似度均＞ 0.9。结论 本方法操作简便且重现性好，可
用于湘产菝葜药材的质量控制。
关键词：菝葜；高效液相色谱法；指纹图谱
中图分类号：R282, O657.7 文献标识码：A 文章编号：1672-2981(2015)02-0113-03
doi:10.7539/j.issn.1672-2981.2015.02.001
HPLC fi ngerprint of Smilax china L.
XU Bei, LIU Ying-jiao, YU Ya-fei, LI Xiao-zhen, LIU Ta-si* (Hunan University of Chinese Medicine, Changsha
410208)
Abstract: Objective To establish an HPLC fi ngerprint of Smilax china L. collected from Hunan. Methods The
samples were separated on an Ultimate XB-C18 column with gradient elution of acetonitrile and 0.1% phosphoric
acid solution at 1.0 mL·min － 1 and the detected wavelength was 290 nm. The column temperature was
maintained at 35 ℃ . Semblance software was used to analyse the similarity of Smilax china L.. Results Ther e
were 16 characteristic peaks in the fi ngerprint of 10 batches of Smilax china L.. The similarity coeffi cient of Smilax
china L. was more than 0.90. Conclusion The method is simple with good reproducibility and can be uesd in the
quality control of the crude drug of Smilax china L..
Key words: Smilax china L.; HPLC; fi ngerprint
基金项目：长沙市科技局（No.k1203018-31）。
作者简介：徐贝，女，在读硕士研究生，主要从事中药资源与质量的研究，Tel：15073138634，E-mail：254629684@qq.com
*通讯作者：刘塔斯，女，教授，博士研究生导师，主要从事中药资源与质量的研究，Tel：13036794420，E-mail：liutasi@126.com
司），电子分析天平（SHIMAZUAUW220D，日本岛津
公司，d：0.1 mg），国家药典委员会指纹图谱相似度评
价系统 A版（2004）。
1.2 试药
落新妇苷（批号：111798-201102，纯度＞ 93.4%）
和黄杞苷（批号：111906-201001，纯度＞ 89.5%）对照
品（中国食品药品检定研究院）。10批药材分别采自湖
南省不同地方（见表 1），经湖南中医药大学刘塔斯教授
鉴定为百合科植物菝葜 Smilax china L.的根茎。乙腈为
色谱纯（国药集团化学试剂有限公司），水为纯净水（市
售怡宝），磷酸为色谱纯（天津市光复精细化工研究所），
甲醇为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Ultimate XB-C18 柱（4.6 mm×250 mm，
5 μm）；流动相：乙腈 -0.1 %磷酸溶液，按表 2进行梯
度洗脱；体积流量 1 mL·min－ 1；柱温 35 ℃；检测波长
290 nm；进样量为 10 μL；运行时间 50 min。理论塔板数
中药定量指纹图谱与中药标准制剂
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以落新妇苷峰计应≥ 5 000。
表 2 梯度洗脱程序
Tab 2 Gradient elution program
时间
（time）/min
乙腈
（acetonitrile）/%
0.1%磷酸溶液
（0.1% phosphoric acid solution）/%
0 10 90
10 13 87
40 33 67
50 40 60
面积较大，出峰时间居中且其为活性成分，故选其为参
照峰（见图 1）。
2.2 供试品溶液的制备
精密称取菝葜药材粉末 0.5 g，置具塞锥形瓶中，加
入 25 mL甲醇，密塞，摇匀，称定重量，超声提取 45
min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，过
滤，取续滤液，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取落新妇苷、黄杞苷对照品适量，加甲醇溶
解定容至 25 mL量瓶中，摇匀，即得落新妇苷和黄杞苷
浓度分别为 59.2 μg·mL－ 1、149.6 μg·mL－ 1的混合对
照品溶液，经微孔滤膜过滤，待用。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液，按“2.1”
项下色谱条件连续进样 5次，记录各共有色谱峰的保留
时间和峰面积，以 12号峰（黄杞苷）的保留时间和峰
面积为参照，计算，得各共有峰相对保留时间 RSD为
0.03%～ 0.6%，相对峰面积的 RSD为 0.3%～ 2.6%，均
＜ 3.0%，符合指纹图谱要求，说明仪器精密度良好。
2.4.2 重复性试验 精密称取同一供试品 5份，每份 0.5
g，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别依次按“2.1”
项下色谱条件进样，测得各色谱峰相对保留时间 RSD为
0.04%～ 0.3%，相对峰面积的 RSD为 0.4%～ 1.4%，均
＜ 3.0%，表明该方法重复性良好。
2.4.3 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，按“2.1”
项下色谱条件分别于 0、2、4、8、16、24 h测定，结果
各色谱峰相对保留时间 RSD为 0.03%～ 0.4%，相对峰面
积 RSD为 0.3%～ 1.1%，均＜ 3.0%，表明供试品溶液在
24 h内稳定。
2.5 指纹图谱的建立
2.5.1 参照峰的确定 精密吸取各供试品溶液 10 μL，
按照“2.1”项下色谱条件进行检测。10批湘产的菝葜
药材样品的色谱峰均在 50 min内出现，通过与对照品
HPLC色谱图的对照，确定了 10号（26.441 min）峰和
12号（30.223 min）峰分别为落新妇苷和黄杞苷。10批
样品中 2个对照峰均存在，其中 12号（黄杞苷）峰的峰
图 1 对照品高效液相色谱图
Fig 1 HPLC chromatogram of reference substance
10.落新妇苷（astilbin）；12. 黄杞苷（engeletin）
t/min
2.5.3 相似度计算 采用“中药指纹图谱相似度评价软
件 2004A版”进行相似度计算，10批湘产菝葜的相似度
均＞ 0.90，相似度较高，说明湘产菝葜药材化学组成一
致性较好且质量稳定，结果见表 4。
3 讨论
3.1 提取方法及色谱柱的选择
周雪苹等 [6]对湖北等地菝葜的 HPLC指纹图谱进行了
图 2 湘产菝葜 HPLC色谱
Fig 2 HPLC chromatogram of Smilax china L. from Hunan
10.落新妇苷（astilbin）；12. 黄杞苷（engeletin）
t/min 0 10 20 30 40 50
图 3 10批湘产菝葜指纹图谱
Fig 3 HPLC fi ngerprint of 10 batches of Smilax china L. from Hunan
0 7.25 14.49 21.74 28.98 36.23 43.48 50.72
t/min
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
表 1 菝葜药材来源
Tab 1 Origins of 10 different samples
编号
（No.）
来源
（origin）
采集时间
（harvest time）
编号
（No.）
来源
（origin）
采集时间
（harvest time）
S1 通道 20131113 S6 郴州 20131204
S2 益阳 20131201 S7 铜湾 20131226
S3 长沙 20131229 S8 洪江 20131211
S4 衡阳市 20131109 S9 平江 20131125
S5 衡阳县 20131117 S10 怀化 20131203
2.5.2 共有峰的标定 将 10批菝葜的指纹图谱导入国家
药典委员会“中药指纹图谱相似度评价系统 2004A版”
软件，以中位数生成对照谱图，通过对 10批供试品的
HPLC色谱图检测结果进行比较，总共标定 39个共有
峰，选择其中出峰稳定、峰面积较大、吸收强的作为特
征峰，共标记 16个特征峰。特征峰的保留时间分别为
3.002、7.259、12.959、14.479、16.24、17.557、19.165、
23.928、26.441、27.744、30.223、31.698、33.721、
34.837、35.916、36.609。经计算，10批样品特征峰相对
保留时间 RSD在 0.04%～ 1.3%，均＜ 2.0%，结果见表 3，
色谱图见图 2～ 3。
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构建和解析，并指出提取方法采用超声提取后将样品浓缩，
再用甲醇复溶，出现有前延峰，而采用流动相复溶后前
延峰消失。本试验参考上述方法操作，分别使用 Kromasil
ODS-1 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）和 Hypersil-ODS2 C18
（4.6 mm×250 mm，5 μm）2种色谱柱，均出现前延
峰且出峰数少。而更换 Ultimate XB-C18（4.6 mm×250
mm，5 μm）色谱柱后前延峰消失。故笔者认为前延峰的
产生可能和色谱柱有一定关联。由于超声提取后直接进
样操作简便易行且出峰数量较多，故本试验采用超声提
取方法，Ultimate XB-C18为色谱柱。
3.2 流动相的选择
曾考察甲醇 -水、甲醇 -磷酸溶液、乙腈 -水、乙腈 -
磷酸溶液，结果发现甲醇 -水、甲醇 -磷酸溶液或乙腈 -
水不同比例进行洗脱，所得色谱峰堆积，分离度差，且
出峰数目较少。而以乙腈 -0.1%磷酸溶液为流动相梯度
洗脱出峰数量最多，峰形较好，且各色谱峰能达到较好
的分离效果。故选择乙腈 -0.1%磷酸溶液为流动相。
3.3 相似度的评价
将 10批湘产菝葜指纹图谱导入中药指纹图谱分析软
件，相似度分析结果表明 10批菝葜样品相似度均＞ 0.90，
相似度较好。说明本文建立的菝葜指纹图谱可体现湖南
产药材的共性特征，且本研究所建立的方法稳定可靠、
重现性好、精密度高，可以有效地用于湘产菝葜药材的
质量控制和鉴定。
参考文献
[1] 江苏新医学院 .中药大辞典（下册）[M].上海：上海科技
出版社，1977：1996.
[2] 中国药典 2010年版 . 一部 [S]. 2010：290.
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[4] 干国平，江维，孙进，等 .菝葜提取物黄酮类成分的 HPLC
指纹图谱研究 [C]//中华中医药学会第九届制剂学术研讨会
论文集，2008：317-321.
[5] 杨立勇，李雨生，王祥培，等 .菝葜药材 HPLC指纹图谱
的鉴别 [J].中国实验方剂学杂志，2011，17（8）：104-
107.
[6] 周雪苹，艾又生 .菝葜高效液相色谱指纹图谱的建立 [J].医
药导报，2012，31（4）：474-477.
（收稿日期：2014-08-30；修回日期：2014-09-24）
表 3 样品色谱峰的相对保留时间
Tab 3 HPLC fi ngerprints data of sample (relative retention time)
样品
（sample）
色谱峰（peak number）
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
S1 0.096 0.230 0.410 0.457 0.513 0.554 0.605 0.755 0.835 0.875 0.954 1.000 1.064 1.099 1.133 1.155
S2 0.095 0.231 0.412 0.460 0.514 0.556 0.607 0.756 0.836 0.876 0.956 1.000 1.064 1.098 1.133 1.156
S3 0.095 0.230 0.411 0.459 0.514 0.555 0.606 0.756 0.835 0.876 0.955 1.000 1.064 1.099 1.133 1.156
S4 0.095 0.229 0.409 0.457 0.512 0.554 0.605 0.755 0.834 0.875 0.954 1.000 1.064 1.099 1.133 1.155
S5 0.096 0.229 0.409 0.457 0.512 0.554 0.604 0.755 0.834 0.875 0.953 1.000 1.064 1.100 1.134 1.155
S6 0.096 0.229 0.408 0.456 0.512 0.553 0.604 0.754 0.834 0.875 0.952 1.000 1.065 1.100 1.134 1.155
S7 0.096 0.230 0.410 0.458 0.513 0.554 0.605 0.755 0.834 0.875 0.957 1.000 1.064 1.099 1.133 1.155
S8 0.094 0.228 0.408 0.456 0.512 0.553 0.604 0.754 0.834 0.875 0.953 1.000 1.064 1.099 1.133 1.154
S9 0.093 0.228 0.407 0.456 0.511 0.553 0.604 0.754 0.834 0.875 0.953 1.000 1.064 1.099 1.133 1.154
S10 0.092 0.227 0.406 0.455 0.511 0.552 0.603 0.754 0.833 0.875 0.952 1.000 1.064 1.099 1.133 1.154
均值 0.095 0.229 0.409 0.457 0.512 0.554 0.605 0.755 0.834 0.875 0.954 1.000 1.064 1.099 1.133 1.155
RSD/% 1.3 0.5 0.4 0.3 0.2 0.2 0.2 0.1 0.09 0.04 0.2 0.0 0.04 0.05 0.04 0.08
表 4 10批药材之间的相似度
Tab 4 Similarity of 10 batches of Smilax china L.
样品（sample） S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 对照（control）
S1 1 0.995 0.991 0.986 0.972 0.987 0.978 0.986 0.975 0.996 0.991
S2 0.995 1 0.994 0.99 0.968 0.985 0.974 0.981 0.976 0.993 0.987
S3 0.991 0.994 1 0.995 0.969 0.980 0.975 0.988 0.983 0.99 0.988
S4 0.986 0.99 0.995 1 0.972 0.980 0.978 0.988 0.982 0.986 0.989
S5 0.972 0.968 0.969 0.972 1 0.979 0.996 0.981 0.971 0.975 0.986
S6 0.987 0.985 0.98 0.98 0.979 1 0.98 0.988 0.978 0.993 0.993
S7 0.978 0.974 0.975 0.978 0.996 0.98 1 0.987 0.977 0.98 0.991
S8 0.986 0.981 0.988 0.988 0.981 0.988 0.987 1 0.99 0.989 0.996
S9 0.975 0.976 0.983 0.982 0.971 0.978 0.977 0.99 1 0.979 0.987
S10 0.996 0.993 0.99 0.986 0.975 0.993 0.98 0.989 0.979 1 0.994
对照 0.991 0.987 0.988 0.989 0.986 0.993 0.991 0.996 0.987 0.994 1